1.本发明涉及大黄素分离工艺领域，具体为一种大黄素高纯度分离工艺。
背景技术：
2.大黄素是一种有机物，化学式为c
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o5，橙黄色长针状结晶，在丙酮中结晶为橙色，甲醇中结晶为黄色，熔点256～257℃，具有蒽醌的特殊反应，几乎不溶于水，溶于乙醇及碱溶液。
3.大黄素为蓼科植物虎杖的干燥根茎和根。掌叶大黄的根茎，属植物型药剂。
4.大黄素的生理活性决定它不仅可用于医疗，亦可以用于保健和日用化工品中，如有人把它用于护发和护肤品中，亦有人把它编入天然色素中去。国外，人们把它作为轻泻剂。
5.在临床上，用大黄素纯品治疗肿癌，主要用于白血病、胃癌等肿瘤，而最常用的则用于抑菌。它对很多细菌如各种葡萄球菌、溶血性链球菌、白喉杆菌、霍乱孤菌、大肠杆菌、绿脓杆菌、皮肤真菌、枯草杆菌、草分枝杆菌、淋球菌、炭宜杆菌、草状菌、伤寒杆菌、痢疾杆菌等均有抑制作用。其中对葡萄球菌、淋球菌、链球菌更为有效。本品对真菌、病毒、原虫也有效。同时，还具有利尿、利胆、解痉、降低血压抑制免疫功能等作用。
6.大黄素可用作泻药，虽有泻下活性，但由于体内易被氧化破坏，实际上泻下作用很弱，如与糖结合成苷类，则可发挥泻下作用。大黄素
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葡萄糖苷和大黄素葡萄糖苷者是大黄素与葡萄糖结合的苷，二者只是结合的位置不同，同时存在于大黄中。另有抗菌、止咳、抗肿瘤、降血压的功效。
7.大黄素是一种经基葱酮的衍生物，是荟大黄素、芦荟酸等葱酮类化合物，与浸渍法、回流提取法、超大黄的有效成分之一，存在于大黄、何首乌、决明子、首乌藤、虎杖等多种药材中，其药理作用广泛，具有较好的临床应用价值。
8.虎杖，中药名。为蓼科植物虎杖的干燥根茎和根。春、秋二季采挖，除去须根，洗净，趁鲜切短段或厚片，晒干。分布于西北、华东、华中、华南及西南等地。具有利湿退黄，清热解毒，散瘀止痛，止咳化痰的功效。用于湿热黄疸，淋浊，带下，风湿痹痛，痈肿疮毒，水火烫伤，经闭，症瘕，趺打损伤，肺热咳嗽。
9.现有的大黄素提取大量使用苯等溶剂进行提取，这种方式不仅成本高昂，使用的试剂还为有挥发性和毒性的溶剂，对人身和环境均构成威胁。
技术实现要素：
10.鉴于现有技术中所存在的问题，本发明公开了大黄素高纯度分离工艺，包括以下步骤：步骤1，取2
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5g虎杖粉，添加25
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35ml蒸馏水，得混合物a；步骤2，向所述步骤1中得到的混合物a中添加4
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10mg酶，根据混合物a的体积控制酶含量为2mg/g，并酶解40
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90分钟，得混合物b；
步骤3，将所述步骤2中得到的混合物b进行萃取和浓缩后，使用蒸馏水洗脱水溶性杂质，得产物c，提高大黄素产率；萃取采用乙酸乙酯进行萃取，乙酸乙酯无毒无污染；步骤4，将所述步骤3中得到的产物c进行离心分离、干燥后得白藜芦醇粗品；步骤5，将所述步骤4中得到的所述白藜芦醇粗品使用60％酒精溶解后过滤，得大黄素提取物；步骤6，将所述步骤5中得到的大黄素粗提取物经层析柱层析后，使用乙醇溶液洗脱，将洗脱液收集减压蒸馏、重结晶，得大黄素精提取物。
11.虎杖植物化学成份研究已较为深入，迄今已从中分离得到的化学成分有：蒽醌类、二苯乙烯类、萘醌类、黄酮类等。其中蒽醌类化合物主要有：大黄素一6一甲醚(physcion)，大黄素(ernodin)，fallacinol，大黄素一8一甲醚(questin)，大黄素一8—0一b—d一葡萄吡喃糖甙(emoain一8—0—8一d—glucopyranoside)，2一甲氧基一6一乙酰基一7一甲基胡桃醌(pc一16)，白藜芦醇(resveratro)和白藜芦醇甙(piceid)。另外，通过光学异构化，得到了相应的顺式白藜芦醇和顺式白藜芦醇甙。
12.作为本发明的一种优选方案，所述步骤2中添加的酶采用纤维素酶，纤维素酶的酶解作用破坏了植物细胞壁，使虎杖中白藜芦醇等活性成分更容易溶出，提高了产率。
13.作为本发明的一种优选方案，所述步骤2中，在40℃、ph为3.0的环境下进行酶解，在酶解反应中，温度不仅影响反应速度，而且影响酶的活性。当温度升高时，反应速度加快，有利于酶解的进行，但温度过高会使酶失活，反应速度降低，因此，酶反应存在一个最适温度。大部分酶的活性受其环境ph的影响，ph的改变可以破坏酶空间构象，引起酶活性的损失，还能影响酶活性中心催化基团的解离，使底物转变成产物的过程受影响，同时ph的改变还影响酶活性中心结合基团的解离状态和底物解离状态，使底物不能与其结合，或结合后不能生成产酶解过程中使用搅拌装置进行间歇搅拌，能够使酶与混合物a均匀混合。
14.作为本发明的一种优选方案，所述间歇搅拌为搅拌3min，暂停5min；不仅能够使酶与混合物a充分均匀接触，还留有静置降解时间，使虎杖细胞细胞壁分解的更加彻底。
15.作为本发明的一种优选方案，所述步骤3中使用乙醇溶液萃取重复3次，并将3次的萃取液合并；因萃取剂对大黄素溶解度有限制，多次萃取可以充分提取大黄素，提高大黄素产量。
16.作为本发明的一种优选方案，所述步骤3中的所述浓缩采用恒温加热浓缩，浓缩过程中不仅能够蒸发多余的水分，还能够使乙醇挥发，从而使大黄素析出浓缩，将浓缩液装在梨形漏斗内，便于后续的洗脱操作。
17.作为本发明的一种优选方案，所述步骤3中的洗脱步骤为，向梨形漏斗内添加蒸馏水，上下翻倒震荡，使蒸馏水与浓缩液内的水溶性杂质充分混合，利用大黄素不溶于水的性质，将梨形漏斗静置分层，分离洗脱水，重复洗脱3次，提高产率。
18.作为本发明的一种优选方案，所述步骤4中，因静置分层分离并不能做到完全分离，故增加离心分离以进一步提纯，所述离心分离采用在30000r/min的转速下离心10min，将分离出的固体物质烘干。
19.作为本发明的一种优选方案，所述步骤5中的过滤采用真空抽滤机抽滤，能够在滤材的一侧形成真空度，利用压差使待滤液快速通过滤材，提高过滤效果。
20.作为本发明的一种优选方案，所述步骤6中的所述层析柱采用聚酰胺柱。
21.本发明的有益效果：本明通过向蒸馏水和虎杖粉的混合物内加酶，能够将虎杖粉外部细胞壁分解，从而使虎杖粉中的大黄素更容易被提取出，提高了大黄素的产率；使用乙酸乙酯进行萃取，能够将大黄素从混合物中分离出，且乙酸乙酯无毒无刺激性气味，保护了人员健康和环境安全；使用蒸馏水洗脱能够去除水溶性杂质，提高产品纯度；将过滤得到大黄素粗提取物上层析柱层析后洗脱、减压蒸馏、重结晶，洗脱液采用酒精不仅洗脱效果好，提高了大黄素产率，且无污染、易分离，进一步保护了人员健康和环境安全。
22.进一步的，使用虎杖粉、乙醇和乙酸乙酯进行大黄素的分离，虎杖粉、乙醇和乙酸乙酯成本低廉，研发、生产成本低。
具体实施方式
23.实施例1
24.本实施例公开了本发明的第一种实施方式，其特征在于，包括以下步骤：步骤1，取2虎杖粉，添加25ml蒸馏水，将虎杖粉和蒸馏水混合均匀，得混合物a；步骤2，向所述步骤1中得到的混合物a中添加4mg酶，并酶解40分钟，以便于大黄素的提取，得混合物b；步骤3，将所述步骤2中得到的混合物b进行萃取，对萃取液进行浓缩后，使用蒸馏水洗脱浓缩液，去除水溶性杂质，得产物c；萃取采用乙酸乙酯进行萃取；步骤4，将所述步骤3中得到的产物c进行离心分离，以进一步提纯产物，将离心所得固体干燥后得白藜芦醇粗品；步骤5，将所述步骤4中得到的所述白藜芦醇粗品使用60％酒精溶解，利用大黄素溶于酒精的特性从白藜芦醇粗品中提取大黄素，溶解后过滤，得大黄素粗提取物；步骤6，将所述步骤5中得到的大黄素粗提取物经层析柱层析后，使用乙醇溶液洗脱，将洗脱液收集减压蒸馏、重结晶，得大黄素精提取物。
25.作为本发明的一种优选方案，所述步骤2中添加的酶采用纤维素酶，分解虎杖细胞壁，便于后续萃取操作中能够提取出更多的大黄素。
26.作为本发明的一种优选方案，所述步骤2中，在40℃、ph为3.0的环境下进行酶解，采用水浴恒温加热升至40℃，使用稀硫酸调节ph，酶解过程中使用搅拌装置进行间歇搅拌。
27.作为本发明的一种优选方案，所述间歇搅拌为搅拌3min，暂停5min。
28.作为本发明的一种优选方案，所述步骤3中萃取重复3次，并将3次的萃取液合并；萃取过程中需上下充分振荡，以保证大黄素的产率。
29.作为本发明的一种优选方案，所述步骤3中的所述浓缩采用恒温加热浓缩，将水分和酒精蒸发，将浓缩液装在梨形漏斗内。
30.作为本发明的一种优选方案，所述步骤3中的洗脱步骤为，向梨形漏斗内添加蒸馏水，上下翻倒震荡后静置分层，利用乙醇易溶于水，而大黄素不溶于水的性质，将大黄素与酒精分离，分离洗脱水，重复洗脱3次。
31.作为本发明的一种优选方案，所述步骤4中，所述离心分离采用在30000r/min的转速下离心10min，取出固体物后使用烘箱将分离出的固体物质烘干。
32.作为本发明的一种优选方案，所述步骤5中的过滤采用真空抽滤机抽滤。
33.作为本发明的一种优选方案，所述步骤6中的所述层析柱采用聚酰胺柱。
34.实施例2
35.本实施例与实施例1的区别在于，步骤1，取5虎杖粉，添加35ml蒸馏水，得混合物a；步骤2，向所述步骤1中得到的混合物a中添加10mg酶，并酶解90分钟，得混合物b。
36.实施例3
37.本实施例与实施例1的区别在于，步骤1，取3.5g虎杖粉，添加30ml蒸馏水，得混合物a；步骤2，向所述步骤1中得到的混合物a中添加7mg酶，并酶解60分钟，得混合物b。
38.上述虽然对本发明的具体实施例作了详细说明，但是本发明并不限于上述实施例，在本领域普通技术人员所具备的知识范围内，还可以在不脱离本发明宗旨的前提下做出各种变化，而不具备创造性劳动的修改或变形仍在本发明的保护范围以内。