技术特征：
1.bmspi39突变体，其特征在于，bmspi39是由seq id no.1中第25位至第98位组成，所述bmspi39突变体是将bmspi39氨基酸序列，如seq id no.1所示第56位的丙氨酸突变为精氨酸、赖氨酸、丝氨酸、苏氨酸、谷氨酰胺、酪氨酸、甲硫氨酸、亮氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、组氨酸、半胱氨酸、缬氨酸、天冬酰胺、异亮氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、脯氨酸或甘氨酸获得的。2.如权利要求1所述bmspi39突变体的构建方法，其特征在于，该方法是利用定点突变引物对如seq id no.2所示野生型bmspi39的基因序列进行定点突变，得到所述bmspi39突变体。3.如权利要求2所述bmspi39突变体的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：s1、设计定点突变引物，使上下游引物都带有突变位点；s2、以bmspi39
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p28载体作为模板，使用dna聚合酶，用特异性突变引物进行pcr反应扩增，反应产物用琼脂糖凝胶电泳进行检测；s3、利用dpn i进行酶切反应处理pcr产物；s4、将酶切反应处理的pcr产物转化入trans1
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t1感受态细胞，挑选阳性克隆进行测序验证，提取突变质粒；s5、将突变质粒转入宿主表达菌株中，诱导表达得到bmspi39突变体。4.编码权利要求1所述bmspi39突变体的基因。5.携带权利要求4所述基因的质粒。6.携带权利要求5所述质粒的宿主表达菌株。7.权利要求1所述bmspi39突变体作为枯草杆菌蛋白酶和弹性蛋白酶抑制剂的应用。8.权利要求1所述bmspi39突变体作为枯草杆菌蛋白酶、弹性蛋白酶和胰蛋白酶抑制剂的应用，其特征在在于，所述bmspi39突变体是将bmspi39氨基酸序列，如seq id no.1所示第56位的丙氨酸突变为赖氨酸或精氨酸的bmspi39突变体。
技术总结
本发明属于基因工程和酶工程技术领域，具体涉及BmSPI39突变体及其应用。BmSPI39是由SEQ ID NO.1中第25位至第98位组成，所述BmSPI39突变体是将BmSPI39氨基酸序列，如SEQ ID NO.1所示第56位的丙氨酸突变为精氨酸、赖氨酸、丝氨酸、苏氨酸、谷氨酰胺、酪氨酸、甲硫氨酸、亮氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、组氨酸、半胱氨酸、缬氨酸、天冬酰胺、异亮氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、脯氨酸或甘氨酸获得的。本发明的BmSPI39突变体均对枯草杆菌蛋白酶和弹性蛋白酶具有抑制活性，且当突变为精氨酸或赖氨酸后，还获得了胰蛋白酶抑制活性，此类突变体可用于制备胰蛋白酶抑制剂，应用前景良好。应用前景良好。应用前景良好。
技术研发人员：李游山 张杰
受保护的技术使用者：陕西理工大学
技术研发日：2021.09.15
技术公布日：2021/11/23