基于拉曼光谱的新型冠状病毒核酸检测试剂盒及方法

文档序号:27099106发布日期:2021-10-27 17:27阅读:来源:国知局

技术特征:
1.一种基于拉曼光谱的新型冠状病毒核酸检测试剂盒,其特征在于,包括:(1)、正向引物;(2)、纳米银针sers基底,所述纳米银针sers基底是由5’端有巯基修饰的反向引物与纳米银针共价连接而得。2.根据权利要求1所述的基于拉曼光谱的新型冠状病毒核酸检测试剂盒,其特征在于,所述纳米银针是通过电化学工艺制备而成,包括以下步骤:先将银针依次在乙醇、丙酮和水中超声清洗;再将银针置于1m
±
0.1m硝酸中进行电化学处理,即得;所述电化学处理包括5个~10个周期,每个周期的操作方法为:将银针置于阳极电流持续8秒~10秒,再置于阴极电流持续8秒~10秒。3.根据权利要求1所述的基于拉曼光谱的新型冠状病毒核酸检测试剂盒,其特征在于,所述正向引物的序列如seq id no.1所示,所述反向引物的序列如seq id no.2所示。4.根据权利要求3所述的基于拉曼光谱的新型冠状病毒核酸检测试剂盒,其特征在于,所述正向引物的5’端有fam修饰。5.根据权利要求1~4任一项所述的基于拉曼光谱的新型冠状病毒核酸检测试剂盒,其特征在于,所述试剂盒还包括溶解剂、rt

基础扩增试剂和激活剂。6.一种基于拉曼光谱的非诊断目的的新型冠状病毒核酸检测的方法,其特征在于,所述方法获取拉曼光谱信号的位移差异,包括以下步骤:(1)、采集纳米银针sers基底的拉曼光谱信号,所述纳米银针sers基底是由5’端有巯基修饰的反向引物与纳米银针共价连接而得;(2)、将步骤(1)的纳米银针sers基底插入包含待检测样品的反应溶液中,进行恒温扩增;(3)、恒温扩增反应结束后,取出纳米银针sers基底,采集纳米银针sers基底的拉曼光谱信号,并与步骤(1)采集的拉曼光谱信号进行比较,检测拉曼光谱信号的位移差异。7.根据权利要求6所述的基于拉曼光谱的非诊断目的的新型冠状病毒核酸检测的方法,其特征在于,步骤(3)中检测所述拉曼光谱信号的位移差异>4cm
‑1,或检测所述拉曼光谱信号的位移差异≤4cm
‑1。8.根据权利要求6所述的基于拉曼光谱的非诊断目的的新型冠状病毒核酸检测的方法,其特征在于,步骤(1)中所述纳米银针sers基底的制备方法,包括以下步骤:(a)、将5’端有巯基修饰的反向引物与三(2

羧乙基)膦混合,室温25min~35min进行还原;(b)、将还原后的反向引物于60℃~70℃孵育8min~12min,马上置冰盒上冷却,冷却后平衡到室温;(c)、在反向引物中插入纳米银针,室温反应25min~35min,使反向引物共价连接于纳米银针上,即得。9.根据权利要求6所述的基于拉曼光谱的非诊断目的的新型冠状病毒核酸检测的方法,其特征在于,步骤(2)中所述恒温扩增为:38℃~44℃恒温反应20min~30min。10.根据权利要求6所述的基于拉曼光谱的非诊断目的的新型冠状病毒核酸检测的方法,其特征在于,步骤(2)中,所述包含待检测样品的反应溶液的制备方法,包括以下步骤:(a)、将15μl~25μl溶解剂、2.0μl~3.0μl正向引物、24.5μl~26.5μl待检测样品充分震荡
混匀,离心,得到反应预混液;(b)、将反应预混液加入至rt

基础扩增试剂中,充分震荡混匀,至rt

基础扩增试剂彻底溶解;(c)、再加入1.5μl~2.5μl激活剂,充分震荡混匀,离心,得到总体积为50μl的包含待检测样品的反应溶液。

技术总结
本发明公开了一种基于拉曼光谱的新型冠状病毒核酸检测试剂盒及方法,所述试剂盒包括正向引物,和纳米银针SERS基底,所述纳米银针SERS基底由5’端有巯基修饰的反向引物和纳米银针共价连接而得。其检测方法为:先采集纳米银针SERS基底的拉曼光谱信号;在包含待检测样品的反应溶液中插入所述纳米银针SERS基底,恒温扩增;取出纳米银针SERS基底,采集拉曼光谱信号,检测两次拉曼光谱信号的位移差异。相比起根据拉曼峰强度定量检测核酸的方法,本发明的新型冠状病毒核酸检测方法可以实现定性检测核酸,检测方法更简单、更准确、更可靠。更可靠。更可靠。


技术研发人员:欧小华 吕坚 缪夏萍 周彬斌 黄晓强 李扬扬 于世辉 欧玮辉 沈君达 程雅婷
受保护的技术使用者:香港城市大学深圳研究院 广州市金域转化医学研究院有限公司 广州金域医学检验集团股份有限公司
技术研发日:2021.09.22
技术公布日:2021/10/26
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