技术特征：
1.一种转氨酶突变体，其特征在于，所述转氨酶突变体的氨基酸序列是由seq id no：1所示的氨基酸序列发生突变得到的氨基酸序列，所述突变的突变位点包括：c60y、f164v和第370位突变；优选的，所述第370位突变为l370a、l370d或l370k；优选的，所述突变为c60y+f164v+l370a、c60y+f164v+l370d、c60y+f164v+l370k、c60y+f164l+i180v+l370a+g411d+a178l+s186g+s187a+y384f+e171d+i389f+v252i+l404q、c60y+f164v+i180v+l370a+g411d+a178l+s186g+s187a+y384f+e424q、c60y+f164v+l370a+g411d、c60y+f164v+l370a+y384f、c60y+f164v+l370a+s186g、c60y+f164v+l370a+d391e、c60y+f164v+l370a+e171d或c60y+f164v+l370a+l404q。2.一种dna分子，其特征在于，所述dna分子编码权利要求1所述的转氨酶突变体。3.一种重组质粒，其特征在于，所述重组质粒含有权利要求2所述的dna分子。4.根据权利要求3所述的重组质粒，其特征在于，所述重组质粒为pet
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22a(+)、pet
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22b(+)、pet
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3a(+)、pet
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3d(+)、pet
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11a(+)、pet
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12a(+)、pet
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14b(+)、pet
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15b(+)、pet
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16b(+)、pet
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17b(+)、pet
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19b(+)、pet
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20b(+)、pet
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21a(+)、pet
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23a(+)、pet
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23b(+)、pet
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24a(+)、pet
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25b(+)、pet
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26b(+)、pet
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27b(+)、pet
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28a(+)、pet
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29a(+)、pet
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30a(+)、pet
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31b(+)、pet
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32a(+)、pet
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35b(+)、pet
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38b(+)、pet
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39b(+)、pet
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40b(+)、pet
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41a(+)、pet
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41b(+)、pet
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42a(+)、pet
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43a(+)、pet
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43b(+)、pet
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44a(+)、pet
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49b(+)、pqe2、pqe9、pqe30、pqe31、pqe32、pqe40、pqe70、pqe80、prset
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a、prset
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b、prset
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c、pgex
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5x
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1、pgex
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6p
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1、pgex
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6p
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2、pbv220、pbv221、pbv222、ptrc99a、ptwin1、pezz18、pkk232
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18、puc
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18或puc
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19。5.一种宿主细胞，其特征在于，所述宿主细胞含有权利要求3或4所述的重组质粒。6.根据权利要求5所述的宿主细胞，其特征在于，所述宿主细胞包括原核细胞或真核细胞。7.根据权利要求6所述的宿主细胞，其特征在于，所述原核细胞为大肠杆菌bl21
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de3细胞或大肠杆菌rosetta
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de3细胞，所述真核细胞为酵母。8.一种生产手性胺的方法，包括转氨酶对酮类化合物及氨基供体进行催化转氨基反应的步骤，其特征在于，所述转氨酶为权利要求1所述的转氨酶突变体。9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述酮类化合物为转氨基反应产物为其中，r1和r2分别独立的表示任选取代或未被取代的烷基、任选取代或未被取代的芳烷基、或任选取代或未被取代的芳基；r1和r2可单独或两者互相结合形成取代或未被取代的环。10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，r1和r2为碳原子数1～20的任选取代或未被取代的烷基、任选取代或未被取代的芳烷基、或任选取代或未被取代的芳基；优选的，r1和r2为碳原子数1～10的任选取代或未被取代的烷基、任选取代或未被取代的芳烷基、或任选取代或未被取代的芳基；优选的，所述芳基包括苯基、萘基、吡啶基、噻吩基、噁二唑基、咪唑基、噻唑基、呋喃基、
吡咯基、苯氧基、萘氧基、吡啶基氧基、噻吩基氧基、噁二唑基氧基、咪唑基氧基、噻唑基氧基、呋喃基氧基和吡咯基氧基；所述烷基包括甲基、乙基、丙基、丁基、戊基、己基、异丙基、仲丁基、叔丁基、甲氧基、乙氧基、叔丁氧基、甲氧基羰基、乙氧基羰基、叔丁氧基羰基、乙烯基、烯丙基、环戊基和环庚基；所述芳烷基为苄基；所述取代是指被卤素原子、氮原子、硫原子、羟基、硝基、氰基、甲氧基、乙氧基、羧基、羧甲基、羧乙基或亚甲二氧基取代；更优选的，所述酮类化合物为合物为优选的，所述氨基供体为异丙胺或丙氨酸；优选的，所述氨基供体为异丙胺；优选的，在转氨酶对酮类化合物及氨基供体进行催化转氨基反应的反应体系中，ph为7～11；转氨酶对酮类化合物及氨基供体进行催化转氨基反应的反应体系的温度为25℃～60℃；转氨酶对酮类化合物及氨基供体进行催化转氨基反应的反应体系中二甲基亚砜体积浓度为0％～50％；转氨酶对酮类化合物及氨基供体进行催化转氨基反应的反应体系中甲基叔丁基醚体积浓度为0％～90％；优选的，在转氨酶对酮类化合物及氨基供体进行催化转氨基反应的反应体系中，ph为8～10；转氨酶对酮类化合物及氨基供体进行催化转氨基反应的反应体系的温度为30～55℃；更优选的，在转氨酶对酮类化合物及氨基供体进行催化转氨基反应的反应体系中，ph为9～10；转氨酶对酮类化合物及氨基供体进行催化转氨基反应的反应体系的温度为40～50℃。
技术总结
本发明公开了一种转氨酶突变体及其应用。该转氨酶突变体的氨基酸序列是由SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列发生突变得到的氨基酸序列，突变至少包括如下突变位点之一：C60Y、F164V和第370位突变。突变体的应用可以提高反应速率，提高酶稳定性，减少了酶用量，降低了后处理的难度，使得其能够适合工业化生产。使得其能够适合工业化生产。使得其能够适合工业化生产。
技术研发人员：洪浩 詹姆斯
受保护的技术使用者：凯莱英生命科学技术（天津）有限公司
技术研发日：2019.05.30
技术公布日：2021/12/3