融合蛋白及其在幽门螺杆菌CagA抗体检测中的应用的制作方法

本发明涉及融合蛋白及其在幽门螺杆菌caga抗体检测中的应用，属于生物。

背景技术：

1、幽门螺杆菌(helicobacter pylori，hp)是一种呈s型或者弧形弯曲的革兰氏阴性细菌。1982年，barry j.marshall和j.robin warren从人的胃粘膜标本中分离并培养出幽门螺杆菌，从而成功并揭示了其潜在致病机制，二者由此获得了2005年的生理医学奖。1994年，幽门螺杆菌被世界卫生组织定为i类致癌原。现阶段，幽门螺杆菌在全球的感染率已高达50％左右，发展中国家的幽门螺杆菌感染率高于发达国家。

2、幽门螺杆菌感染是一个长期且慢性的过程，感染后人体一般难以自发清除而导致终身感染，除非进行根除治疗，或人体胃黏膜发生严重肠化生使得细菌难以定植，幽门螺杆菌才会在人体自动消失。研究表明，幽门螺杆菌长期感染会引起慢性胃炎的发生，并且，随着感染程度的加深和病情的恶化，部分患者会发展成十二指肠溃疡，甚至胃癌。因此，通过体外检测病人血液中是否含有幽门螺旋杆菌抗体，以推测病人是否曾经感染或正在感染幽门螺旋杆菌，进而对幽门螺杆菌感染人群进行及时干预对保障病人身体健康十分关键。

技术实现思路

1、为解决上述问题，本发明提供了一种融合蛋白，所述融合蛋白包括：

2、(a)氨基酸序列如seq id no.1所示的多肽；

3、和/或，(b)与seq id no.1所示氨基酸序列具有80％以上同源性，且能够与幽门螺杆菌caga抗体特异性结合的衍生多肽。

4、本发明还提供了一种核酸分子，所述核酸分子编码上述融合蛋白。

5、在本发明的一种实施方式中，所述核酸分子的核苷酸序列如seq id no.2所示。

6、本发明还提供了一种重组质粒，所述重组质粒携带上述核酸分子。

7、在本发明的一种实施方式中，所述重组质粒的载体为pet-28a载体、pmal-c2载体、pgex-4t-1载体、pet-32a载体或pet-duet-1载体。

8、本发明还提供了一种宿主细胞，所述宿主细胞携带上述核酸分子；

9、或者，所述宿主细胞携带上述重组质粒。

10、在本发明的一种实施方式中，所述宿主细胞为原核细胞或真核细胞。

11、在本发明的一种实施方式中，所述宿主细胞为大肠杆菌、酵母菌、乳酸菌或芽孢杆菌。

12、本发明还提供了一种制备上述融合蛋白的方法，所述方法为先将上述宿主细胞接种至培养基中进行发酵，得到发酵液，然后从发酵液中分离得到上述融合蛋白。

13、本发明还提供了一种幽门螺杆菌caga抗体检测试剂盒，所述试剂盒以上述融合蛋白作为幽门螺杆菌caga抗体的检测抗原。

14、本发明还提供了一种检测幽门螺杆菌caga抗体的方法，所述方法使用上述幽门螺杆菌caga抗体检测试剂盒对待测样本进行检测。

15、在本发明的一种实施方式中，所述待测样品为全血或血清。

16、本发明还提供了上述融合蛋白或上述试剂盒或上述方法在检测幽门螺杆菌caga抗体方面的应用。

17、本发明还提供了一种幽门螺杆菌caga抗体检测试纸，所述试纸以上述融合蛋白作为幽门螺杆菌caga抗体的检测抗原。

18、在本发明的一种实施方式中，所述试纸包括层析膜；所述层析膜的一端连接吸附垫；所述吸附垫上担载免疫标记的上述融合蛋白和免疫标记的第一抗体；所述层析膜上沿液体层析方向依次设有检测线和质控线；所述检测线上包被上述融合蛋白；所述质控线上包被第二抗体；所述第二抗体能够与第一抗体特异性结合。

19、在本发明的一种实施方式中，所述融合蛋白在胶体金吸附垫上的担载量为0.1～1μg/cm2。

20、在本发明的一种实施方式中，所述融合蛋白在胶体金吸附垫上的担载量为0.5μg/cm2。

21、在本发明的一种实施方式中，所述第一抗体在胶体金吸附垫上的担载量为0.1～5μg/cm2。

22、在本发明的一种实施方式中，所述第一抗体在胶体金吸附垫上的担载量为0.3μg/cm2。

23、在本发明的一种实施方式中，所述检测线由浓度为0.5～1.5mg/ml的融合蛋白溶液以0.5～1.5μl/cm的液体量包被在检测线位置处形成。

24、在本发明的一种实施方式中，所述检测线由浓度为1mg/ml的融合蛋白溶液以1μl/cm的液体量包被在检测线位置处形成。

25、在本发明的一种实施方式中，所述质控线由浓度为1～2mg/ml的第二抗体溶液以1～2μl/cm的液体量包被在质控线位置处形成。

26、在本发明的一种实施方式中，所述质控线由浓度为1.5mg/ml的第二抗体溶液以1.5μl/cm的液体量包被在质控线位置处形成。

27、在本发明的一种实施方式中，所述免疫标记为胶体金标记、胶体砷标记、胶体碳标记、有色乳胶标记或荧光乳胶标记。

28、在本发明的一种实施方式中，所述第一抗体为兔igg抗体；所述第二抗体为羊抗兔igg抗体。

29、在本发明的一种实施方式中，所述试纸还包括底板、样品垫和吸水垫；所述底板上沿液体层析方向依次设有样品垫、吸附垫、层析膜和吸水垫。

30、本发明技术方案，具有如下优点：

31、本发明提供了一种融合蛋白，所述融合蛋白包括氨基酸序列如seq id no.1所示的多肽，或者，与seq id no.1所示氨基酸序列具有80％以上同源性，且能够与幽门螺杆菌caga抗体特异性结合的衍生多肽；所述融合蛋白能够与幽门螺杆菌caga抗体特异性结合，在幽门螺杆菌caga抗体检测中具有极高的应用前景；所述融合蛋白表达量较高，均一纯度较高，稳定不容易变性。

技术特征：

1.一种融合蛋白，其特征在于，所述融合蛋白包括：

2.一种核酸分子，其特征在于，所述核酸分子编码权利要求1所述的融合蛋白。

3.如权利要求2所述的核酸分子，其特征在于，所述核酸分子的核苷酸序列如seq idno.2所示。

4.一种重组质粒，其特征在于，所述重组质粒携带权利要求2或3所述的核酸分子。

5.一种宿主细胞，其特征在于，所述宿主细胞携带权利要求2或3所述的核酸分子；

6.一种制备权利要求1所述的融合蛋白的方法，其特征在于，所述方法为先将权利要求5所述的宿主细胞接种至培养基中进行发酵，得到发酵液，然后从发酵液中分离得到权利要求1所述的融合蛋白。

7.一种幽门螺杆菌caga抗体检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒以权利要求1所述的融合蛋白作为幽门螺杆菌caga抗体的检测抗原。

8.一种检测幽门螺杆菌caga抗体的方法，其特征在于，所述方法使用权利要求7所述的幽门螺杆菌caga抗体检测试剂盒对待测样本进行检测。

9.如权利要求8所述的方法，其特征在于，所述待测样品为全血或血清。

10.权利要求1所述的融合蛋白或权利要求7所述的试剂盒或权利要求8或9所述的方法在检测幽门螺杆菌caga抗体方面的应用。

技术总结
本发明涉及融合蛋白及其在幽门螺杆菌CagA抗体检测中的应用，属于生物技术领域。本发明提供了一种融合蛋白，所述融合蛋白包括氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的多肽，或者，与SEQ ID NO.1所示氨基酸序列具有80％以上同源性，且能够与幽门螺杆菌CagA抗体特异性结合的衍生多肽；所述融合蛋白能够与幽门螺杆菌CagA抗体特异性结合，在幽门螺杆菌CagA抗体检测中具有极高的应用前景。

技术研发人员：王蕾,欧卫军,朱益丹,陈兰兰
受保护的技术使用者：南通伊仕生物技术股份有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/13