一种氮杂双环[3.1.0]己烷衍生物及其制备方法和用途

1.本发明属于生物医药领域，具体涉及一种氮杂双环[3.1.0]己烷衍生物及其制备方法和用途。


背景技术：

[0002]
新型冠状病毒肺炎“covid-19”是由新型冠状病毒sars-cov-2引起的急性传染病。新型冠状病毒基因在宿主细胞内将产生2个重叠的转录翻译产物，多聚蛋白1a与1ab。多聚蛋白经过主蛋白酶和木瓜样蛋白酶的水解后才能产生一系列具有生物功能的蛋白单体，从而完成病毒的复制和包装。以蛋白酶为靶点的抗病毒药物在hiv和hcv药物开发中取得巨大的成功，如利托那韦、达芦那韦、特拉匹韦等化合物。因此新型冠状病毒的主蛋白酶是个理想的药物开发靶点。目前针对新冠主蛋白酶的药物基本都是注射用药，急需开发可口服的抗新冠药物。
[0003]
博赛泼维(boceprevir)是由美国先灵葆雅(schering-plough)公司研发(该公司于2009年11月与默克药厂合并)的一种hcv蛋白酶抑制剂。2011年5月13日美国食品药品管理局(fda)批准该药上市，用于某些成人患者慢性丙型肝炎的治疗。该药为口服制剂，商品名为victrelis。
[0004]
前期研究发现博赛泼维对新型冠状病毒蛋白酶的半数抑制浓度ic50为12.43μm，在细胞水平上对新型冠状病毒的半数抑制浓度ec50为15.57μm。博赛泼维具有口服制剂的优势，但是抗病毒活性仍需进一步提高。
[0005][0006]
基于现在的研究状况，目前急需研发具有高抗新冠病毒活性的可口服药物。


技术实现要素：

[0007]
有鉴于此，本发明的目的是提供一种氮杂双环[3.1.0]己烷衍生物及其制备方法和用途，该化合物即具备较高的抗新冠病毒活性，又具有可口服的性质优势。
[0008]
为实现上述发明目的，本发明技术方案如下：
[0009]
一方面，本发明提供一种式(i)所示的化合物或其立体异构体、几何异构体、互变异构体、氮氧化物、水合物、溶剂化物、药学上可接受的盐或前药；
[0010][0011]
其中，r1选自烷基、烷胺基、烷氧基，r2选自取代或未取代的烷基、环烷基、芳基、杂环基烷基，r3选自-cho或-ch(oh)so3na。
[0012]
进一步地，r1选自c
1-8
烷基、c
1-8
烷胺基、c
1-8
烷氧基，r2选自取代或未取代的c
1-8
烷基、c
3-5
环烷基、苯基、含氧和/或氮的5-6元杂环基。
[0013]
进一步地，r1选自c
1-8
烷胺基、c
1-8
烷氧基，r2选自取代或未取代的c
1-8
烷基。
[0014]
进一步地，r1选自c
1-8
烷胺基、c
1-8
烷氧基，r2选自取代或未取代的c
1-8
烷基。
[0015]
进一步地，r1选自c
1-6
烷胺基、c
1-6
烷氧基，r2选自取代或未取代的c
1-6
烷基，所述取代基选自烷基、烷氧基、卤代烷基、苯基、芳杂环基、杂环基中的至少一种。
[0016]
进一步地，r1选自c
2-5
烷胺基、c
2-5
烷氧基，r2选自取代或未取代的c
1-4
烷基，所述取代基选自烷基、苯基、芳杂环基、杂环基中的至少一种。
[0017]
进一步地，r1选自c
3-4
烷胺基、c
3-4
烷氧基，r2选自取代或未取代的c
1-2
烷基，所述取代基选自烷基、苯基中的至少一种。
[0018]
进一步地，r1选自c
3-4
烷胺基、c
3-4
烷氧基，r2选自苯基取代的c
1-2
烷基。
[0019]
进一步地，所述式(i)所示的化合物选自
[0020]
进一步地，所述式(i)所示的化合物选自进一步地，所述式(i)所示的化合物选自
[0021]
进一步地，所述式(i)所示的化合物选自进一步地，所述式(i)所示的化合物选自
[0022]
除非有说明，本文所用的术语“烷基”包括具有特定数目碳原子的支链和直链饱和的脂肪烃基团，包括所有异构体。烷基的常用缩写例如甲基可以用“me”或ch3表示，乙基可以用“et”或ch2ch3表示，丙基可以用“pr”或ch2ch2ch3表示，丁基可以用“bu”或ch2ch2ch2ch3表示等。例如“c
1-4
烷基”(或“c
1-c4烷基”)是指具有特定数目碳原子的直链或支链烷基，包括所有异构体。c
1-4
烷基包括正、异、仲和叔丁基、正和异丙基，乙基和甲基。术语“c
1-10
烷基”等具有类似的含义。
[0023]
术语“烷氧基”表示通过氧桥连接的标明数目碳原子的直链和支链烷基。
[0024]
术语“卤素”(或“卤代”)是指氟、氯、溴和碘(或者称为氟代(f)、氯代(cl)、溴代(br)和碘代(i))。
[0025]
术语“芳基”是指芳香的单和多碳环系统，其中在多环系统中各个碳环是稠合的或通过单键相互连接。一般芳基包括苯基、萘基和亚联苯基。
[0026]
术语“杂环”是指碳原子及非碳原子构成的环状结构，环中的非碳原子举例如氮、氧和硫等。一般杂环基包括吡啶、喹啉、托烷、吩噻嗪、苯并二氮杂卓、呋喃、吡唑酮和嘧啶。
[0027]
术语“芳杂环”是指5或6元单环芳香环或7-12元双环，其由碳原子和一个或多个选自n、o和s的杂原子构成。芳杂环举例包括吡啶基、吡咯基、吡嗪基、嘧啶基、哒嗪基、噻吩基(或噻吩基(thiophenyl))、噻唑基、呋喃基、咪唑基、吡唑基、三唑基、四唑基、唑基、异唑基、二唑基、噻唑基、异噻唑基和噻二唑基、苯并三唑基、吲哚基、异吲哚基、吲唑基、二氢吲哚基、异二氢吲哚基、喹喔啉基、喹唑啉基、噌啉基、色满基、异色满基、四氢喹啉基、喹啉基、四氢异喹啉基、异喹啉基、2，3-二氢苯并呋喃基、2，3-二氢苯并-1，4-二烯基、咪唑并(2，1-b)(1，3)噻唑和苯并-1，3-间二氧杂环戊烯基。
[0028]
除非明确说明，本文列出的所有范围是包含性的。例如，“n的数值为0-2之间的整数”是指n可以是0、1或2。
[0029]
术语“药学上可接受的盐”是指由药学可接受的无毒碱或酸制备的盐。当本发明的化合物是酸性时，其相应的盐可以容易地由无机碱或有机碱制备。衍生自这种无机碱的盐包括铝、铵、钙、铜(铜和亚铜)、铁、亚铁、锂、镁、锰(锰和亚锰)、钾、钠、锌等盐。优选的为铵、钙、镁、钾和钠等盐。由有机碱制备的盐包括来源于天然和合成来源的伯胺、仲胺和叔胺。可以形成盐的药学可接受的有机无毒碱包括精氨酸、甜菜碱、咖啡因、胆碱、n，n
′‑
二苄基亚乙基二胺、二乙基胺、2-二乙氨基乙醇、2-二甲氨基乙醇、乙醇胺、乙二胺、n-乙基吗啉、n-乙基哌啶、葡萄糖胺、氨基葡萄糖、组氨酸、哈胺(hydrabamine)、异丙胺、二环己基胺、赖氨酸、甲基葡萄糖胺、吗啉、哌嗪、哌啶、聚胺树脂、普鲁卡因、嘌呤类、可可碱、三乙胺、三甲胺、三丙胺、氨丁三醇等。当本发明的化合物是碱性时，其相应的盐可以容易地由无机酸或有机酸制备。这种酸包括例如乙酸、苯磺酸、苯甲酸、樟脑磺酸、柠檬酸、乙磺酸、富马酸、葡糖酸、谷氨酸、氢溴酸、盐酸、羟乙基磺酸、乳酸、马来酸、苹果酸、扁桃酸、甲磺酸、粘酸、硝酸、扑酸、泛酸、磷酸、琥珀酸、硫酸、酒石酸、对甲苯磺酸等。
[0030]
术语“溶剂化物”是指由溶质(即式i化合物)或其药学可接受的盐和不妨碍溶质生物活性的溶剂形成的可变化学计量的复合物。溶剂的实例包括但不限于水、乙醇和乙酸。当溶剂是水时，该溶剂化物称为水合物。水合物包括但不限于半、一、一倍半、二和三水合物。
[0031]
术语“前药”是本发明化合物的功能性衍生物，其在体内容易转化为需要的化合物。
[0032]
另一方面，本发明提供上述化合物的制备方法，包括以下合成路线：
[0033][0034]
其中，r1、r2具有与前述相同的定义。
[0035]
再一方面，本发明提供一种药物组合物，包含式(i)所示的化合物或其立体异构体、几何异构体、互变异构体、氮氧化物、水合物、溶剂化物、药学上可接受的盐或前药，以及一种或多种可药用载体、稀释剂、赋形剂。
[0036]
在药物组合物中，术语“组合物”包括包含活性成分和组成载体的惰性成分(药学可接受的赋形剂)的产品，以及任何由两种或多种成分的组合、络合或者聚集、或一种或多种成分的分解、或由一种或多种成分的其它类型反应或相互作用直接或间接地得到的产品。因此，本发明的药物组合物包括任何通过混合式i化合物、其它活性成分和药学可接受的赋形剂制备的组合物。
[0037]
活性成分可以以固体剂型或液体剂型口服给药，所述固体剂型例如胶囊、片剂、锭剂、糖锭剂、颗粒和粉剂，所述液体剂型例如酏剂、糖浆剂、乳剂、分散体和混悬液。
[0038]
当本发明的化合物逐步给药或与其它治疗剂结合给药时，可以使用和前述相同的剂型。当药物以物理组合给药时，剂型和给药途径应根据组合药物的相容性选择。本发明的化合物可以作为唯一活性成分或与第二活性成分组合给药，所述第二活性成分包括其已知可用于提高患者促红细胞生成素水平的活性成分。
[0039]
最后，本发明提供式(i)所示的化合物或其立体异构体、几何异构体、互变异构体、氮氧化物、水合物、溶剂化物、药学上可接受的盐或前药，或者上述药物组合物在制备治疗sars-cov-2引起的急性传染病的药物中的用途。
[0040]
进一步地，所述sars-cov-2引起的急性传染病为新型冠状病毒肺炎。
[0041]
本发明的有益效果为：
[0042]
提出一种新的化合物，具有较高的抗新冠病毒活性，可以有效治疗和预防sars-cov-2引起的急性传染病或相关病症，尤其是新型冠状病毒肺炎。同时，具有可口服的优势，为开发可口服的抗新冠药物提供新思路。
附图说明
[0043]
图1为实施例制备的化合物b与新型状病毒主蛋白酶的复合物晶体结构；
[0044]
图2为实施例制备的化合物a与新型冠状病毒主蛋白酶的复合物晶体结构；
[0045]
图3为化合物a的表征谱图；
[0046]
图4为化合物b的表征谱图；
[0047]
图5为化合物c的表征谱图；
[0048]
图6为化合物d的表征谱图；
[0049]
图7为化合物e的表征谱图。
具体实施方式
[0050]
以下非限制性实施例可以使本领域的普通技术人员更全面的理解本发明，但不以任何方式限制本发明。下述内容仅仅是对本技术要求保护的范围的示例性说明，本领域技术人员可以根据所公开的内容对本技术的发明作出多种改变和修饰，而其也应当属于本技术要求保护的范围之中。
[0051]
下面以具体实施例的方式对本发明作进一步的说明。本发明实施例中所使用的各种化学试剂如无特殊说明均通过常规商业途径获得。
[0052]
实施例1化合物a的合成
[0053]
试验方法：
[0054][0055]
在100ml圆底烧瓶中加入化合物1(230mg，1.0mmol)，化合物2(169mg，1.0mmol)，hobt(202mg，1.5mmol)，然后加入二氯甲烷50ml，反应液在冰水浴条件下搅拌30分钟。然后加入dipea(348μl，2mmol)。称取edci(288mg，1.5mmol)溶于10ml二氯甲烷中，用滴液漏斗加入到反应液中。滴加完毕，撤去冰水浴，反应液继续在室温下反应18小时。反应结束后向圆底烧瓶中加入30ml蒸馏水，搅拌10分钟。将液体转移到分液漏斗中，收集下层有机相，然后用1m hcl和饱和nacl溶液洗有机相，用无水na2so4干燥有机相。干燥30分钟后，过滤旋干。用快速液相制备色谱仪纯化，0-100％正己烷：乙酸乙酯梯度洗脱，点板收集目标产物，旋干得
到368mg白色固体化合物3，产率96％。1h nmr(500mhz,methanol-d4)δ4.24(s,1h),4.18(s,1h),3.97(d,j＝10.4hz,1h),3.79(dd,j＝10.4,5.4hz,1h),3.63(s,3h),1.45(dd,j＝7.5,5.3hz,1h),1.36(d,j＝7.6hz,1h),1.16(s,9h),0.93(d,j＝26.7hz,11h),0.82(d,j＝2.9hz,3h).
[0056]
在100ml圆底烧瓶中加入化合物3(381mg，1.0mmol)，然后加入四氢呋喃10ml，甲醇10ml，反应液在冰水浴条件下搅拌30分钟。然后向反应液中滴加1m lioh溶液(3ml，3mmol)。滴加完毕，撤去冰水浴，反应液继续在室温下反应18小时。反应结束后，向圆底烧瓶中加入30ml蒸馏水，然后加入1m盐酸溶液调整ph值到3，向圆底烧瓶中加入50ml乙酸乙酯，搅拌10分钟。将液体转移到分液漏斗中，收集上层有机相，然后用50ml乙酸乙酯萃取水相2次，合并有机相，用无水na2so4干燥有机相。干燥30分钟后，过滤旋干得到330mg白色固体化合物4，产率90％。
[0057]
在25ml圆底烧瓶中加入化合物5(286mg，1.0mmol)，然后加入三氟乙酸4ml和二氯甲烷4ml，室温搅拌3小时，旋干浓缩得到化合物6。
[0058]
在100ml圆底烧瓶中加入化合物4(367mg，1.0mmol)，化合物6(186mg，1.0mmol)，hatu(418mg，1.1mmol)，然后加入n,n-二甲基甲酰胺20ml，反应液在冰水浴条件下搅拌30分钟。然后向反应液中滴入dipea(550μl，3mmol)，滴加完毕，撤去冰水浴，反应液继续在室温下反应18小时。反应结束后向圆底烧瓶中加入30ml蒸馏水和50ml水，搅拌10分钟。将液体转移到分液漏斗中，收集上层有机相，然后用1m hcl和饱和nacl溶液洗有机相，用无水na2so4干燥有机相。干燥30分钟后，过滤旋干。用快速液相制备色谱仪纯化，0-10％二氯甲烷：甲醇梯度洗脱，点板收集目标产物，旋干得到417mg白色固体化合物7，产率78％。
[0059]1h nmr(500mhz,methanol-d4)δ4.46(dd,j＝12.1,3.8hz,1h),4.19(d,j＝29.4hz,2h),3.94(d,j＝10.3hz,1h),3.85(dd,j＝10.2,5.5hz,1h),3.64(s,3h),3.19
–
3.12(m,1h),2.56(tdd,j＝10.6,8.4,3.8hz,1h),2.23(dddd,j＝15.1,8.8,6.9,2.2hz,1h),2.11
–
2.01(m,1h),1.74
–
1.64(m,2h),1.47(dd,j＝7.7,5.2hz,1h),1.34(d,j＝7.7hz,1h),1.24
–
1.17(m,4h),1.16(s,10h),0.97(s,3h),0.89(s,9h),0.85(s,3h).
[0060]
在100ml圆底烧瓶中加入化合物7(535mg，1.0mmol)，然后加入无水甲醇10ml，反应液在冰水浴条件下搅拌30分钟。然后向反应液中加入硼氢化钠粉末(296mg，8mmol)。加样完毕，撤去冰水浴，反应液继续在室温下反应3小时。反应结束后，向圆底烧瓶中加入30ml蒸馏水，然后加入50ml二氯甲烷，搅拌10分钟。将液体转移到分液漏斗中，收集下层有机相，然后用饱和nacl溶液洗有机相，用无水na2so4干燥有机相。干燥30分钟后，过滤旋干得到405mg白色固体化合物8，产率80％。
[0061]1h nmr(500mhz,methanol-d4)δ7.32
–
7.26(m,4h),7.25
–
7.21(m,1h),4.49(dd,j＝9.4,4.8hz,1h),4.31(s,1h),4.02(dtd,j＝11.7,5.6,3.4hz,1h),3.91(d,j＝3.1hz,2h),3.56(d,j＝5.5hz,2h),3.31
–
3.28(m,1h),3.08(dd,j＝14.1,4.7hz,1h),2.74(dd,j＝14.1,9.4hz,1h),2.69
–
2.61(m,1h),2.42
–
2.33(m,1h),1.98(ddd,j＝13.9,11.9,3.8hz,1h),1.78(dq,j＝12.4,9.1hz,1h),1.61
–
1.53(m,2h),1.50(s,1h),1.35(s,9h),1.32(s,1h),1.27(s,1h),1.09(s,3h),1.00(s,3h).
[0062]
在100ml圆底烧瓶中加入化合物8(507mg，1.0mmol)，然后加入二氯甲烷20ml。然后向反应液中加入戴斯-马丁试剂粉末(848mg，2mmol)。反应液在室温下反应3小时。反应结束
后过滤浓缩，用快速液相制备色谱仪纯化，0-10％二氯甲烷：甲醇梯度洗脱，点板收集目标产物，旋干得到414mg白色固体化合物a，产率82％。
[0063]1h nmr(500mhz,dmso-d6)δ9.45(s,1h),8.57(d,j＝7.7hz,1h),7.64(s,1h),7.29
–
7.25(m,4h),7.19(s,1h),4.25(d,j＝16.3hz,2h),4.18(ddd,j＝11.6,7.7,3.9hz,1h),3.91
–
3.77(m,j＝6.9,6.0hz,2h),3.18
–
3.06(m,2h),2.89(dd,j＝14.0,4.0hz,1h),2.69(dd,j＝14.0,10.1hz,1h),2.43
–
2.34(m,1h),2.20
–
2.12(m,1h),1.94
–
1.86(m,1h),1.66
–
1.58(m,2h),1.54(dd,j＝7.8,4.5hz,1h),1.38(d,j＝7.6hz,1h),1.28(s,9h),1.22(s,2h),1.04(s,3h),0.92(s,3h).
[0064]
实施例2化合物b的合成
[0065]
试验方法：
[0066][0067]
在100ml圆底烧瓶中加入化合物9(230mg，1.0mmol)，化合物2(169mg，1.0mmol)，hobt(202mg，1.5mmol)，然后加入二氯甲烷50ml，反应液在冰水浴条件下搅拌30分钟。然后加入dipea(348μl，2mmol)。称取edci(288mg，1.5mmol)溶于10ml二氯甲烷中，用滴液漏斗加入到反应液中。滴加完毕，撤去冰水浴，反应液继续在室温下反应18小时。反应结束后向圆底烧瓶中加入30ml蒸馏水，搅拌10分钟。将液体转移到分液漏斗中，收集下层有机相，然后用1m hcl和饱和nacl溶液洗有机相，用无水na2so4干燥有机相。干燥30分钟后，过滤旋干。用快速液相制备色谱仪纯化，0-100％正己烷：乙酸乙酯梯度洗脱，点板收集目标产物，旋干得到358mg白色固体化合物10，产率86％。1h nmr(500mhz,methanol-d4)δ7.22
–
7.06(m,6h),4.39(dd,j＝8.3,6.2hz,1h),4.22(s,1h),3.82(d,j＝10.3hz,1h),3.67(s,1h),3.61(s,3h),3.54(dd,j＝10.4,5.4hz,1h),2.92(dd,j＝13.9,6.2hz,1h),2.68(dd,j＝13.9,8.3hz,1h),1.42(dd,j＝7.5,5.3hz,1h),1.34(d,j＝7.4hz,1h),1.29(s,2h),1.25(s,9h),1.19(s,2h),0.95(s,3h),0.87(s,3h).
[0068]
在100ml圆底烧瓶中加入化合物10(416mg，1.0mmol)，然后加入四氢呋喃10ml，甲醇10ml，反应液在冰水浴条件下搅拌30分钟。然后向反应液中滴加1m lioh溶液(3ml，
3mmol)。滴加完毕，撤去冰水浴，反应液继续在室温下反应18小时。反应结束后，向圆底烧瓶中加入30ml蒸馏水，然后加入1m盐酸溶液调整ph值到3，向圆底烧瓶中加入50ml乙酸乙酯，搅拌10分钟。将液体转移到分液漏斗中，收集上层有机相，然后用50ml乙酸乙酯萃取水相2次，合并有机相，用无水na2so4干燥有机相。干燥30分钟后，过滤旋干得到382mg白色固体化合物11，产率95％。
[0069]
在25ml圆底烧瓶中加入化合物5(286mg，1.0mmol)，然后加入三氟乙酸4ml和二氯甲烷4ml，室温搅拌3小时，旋干浓缩得到化合物6。
[0070]
在100ml圆底烧瓶中加入化合物11(402mg，1.0mmol)，化合物6(186mg，1.0mmol)，hatu(418mg，1.1mmol)，然后加入n,n-二甲基甲酰胺20ml，反应液在冰水浴条件下搅拌30分钟。然后向反应液中滴入dipea(550μl，3mmol)，滴加完毕，撤去冰水浴，反应液继续在室温下反应18小时。反应结束后向圆底烧瓶中加入30ml蒸馏水和50ml水，搅拌10分钟。将液体转移到分液漏斗中，收集上层有机相，然后用1m hcl和饱和nacl溶液洗有机相，用无水na2so4干燥有机相。干燥30分钟后，过滤旋干。用快速液相制备色谱仪纯化，0-10％二氯甲烷：甲醇梯度洗脱，点板收集目标产物，旋干得到399mg白色固体化合物12，产率70％。
[0071]1h nmr(500mhz,methanol-d4)δ7.21
–
7.06(m,6h),4.45(dd,j＝11.8,3.9hz,1h),4.37(dd,j＝9.4,4.8hz,1h),4.25(s,1h),3.83
–
3.74(m,2h),3.64(s,3h),3.60(s,1h),3.23(d,j＝2.4hz,1h),2.95(dd,j＝14.1,4.6hz,1h),2.62(ddd,j＝12.6,8.9,3.8hz,1h),2.59
–
2.50(m,1h),2.24(dddd,j＝12.0,8.8,6.2,3.0hz,1h),2.12
–
2.02(m,1h),1.79
–
1.65(m,2h),1.48(dd,j＝7.7,4.9hz,1h),1.39(d,j＝7.6hz,1h),1.23(s,9h),1.16(s,1h),0.99(s,3h),0.95(s,1h),0.90(s,3h).
[0072]
在100ml圆底烧瓶中加入化合物12(570mg，1.0mmol)，然后加入无水甲醇10ml，反应液在冰水浴条件下搅拌30分钟。然后向反应液中加入硼氢化钠粉末(296mg，8mmol)。加样完毕，撤去冰水浴，反应液继续在室温下反应3小时。反应结束后，向圆底烧瓶中加入30ml蒸馏水，然后加入50ml二氯甲烷，搅拌10分钟。将液体转移到分液漏斗中，收集下层有机相，然后用饱和nacl溶液洗有机相，用无水na2so4干燥有机相。干燥30分钟后，过滤旋干得到461mg白色固体化合物13，产率80％。
[0073]1h nmr(500mhz,methanol-d4)δ7.21
–
7.06(m,6h),4.45(dd,j＝11.8,3.9hz,1h),4.37(dd,j＝9.4,4.8hz,1h),4.25(s,1h),3.83
–
3.74(m,2h),3.64(s,3h),3.60(s,1h),3.23(d,j＝2.4hz,1h),2.95(dd,j＝14.1,4.6hz,1h),2.62(ddd,j＝12.6,8.9,3.8hz,1h),2.59
–
2.50(m,1h),2.24(dddd,j＝12.0,8.8,6.2,3.0hz,1h),2.12
–
2.02(m,1h),1.79
–
1.65(m,2h),1.48(dd,j＝7.7,4.9hz,1h),1.39(d,j＝7.6hz,1h),1.23(s,9h),1.16(s,1h),0.99(s,3h),0.95(s,1h),0.90(s,3h).
[0074]
在100ml圆底烧瓶中加入化合物13(542mg，1.0mmol)，然后加入二氯甲烷20ml。然后向反应液中加入戴斯-马丁试剂粉末(848mg，2mmol)。反应液在室温下反应3小时。反应结束后过滤浓缩，用快速液相制备色谱仪纯化，0-10％二氯甲烷：甲醇梯度洗脱，点板收集目标产物，旋干得到410mg白色固体化合物b，产率76％。
[0075]1h nmr(500mhz,methanol-d4)δ7.21
–
7.06(m,6h),4.45(dd,j＝11.8,3.9hz,1h),4.37(dd,j＝9.4,4.8hz,1h),4.25(s,1h),3.83
–
3.74(m,2h),3.64(s,3h),3.60(s,1h),3.23(d,j＝2.4hz,1h),2.95(dd,j＝14.1,4.6hz,1h),2.62(ddd,j＝12.6,8.9,3.8hz,1h),
2.59
–
2.50(m,1h),2.24(dddd,j＝12.0,8.8,6.2,3.0hz,1h),2.12
–
2.02(m,1h),1.79
–
1.65(m,2h),1.48(dd,j＝7.7,4.9hz,1h),1.39(d,j＝7.6hz,1h),1.23(s,9h),1.16(s,1h),0.99(s,3h),0.95(s,1h),0.90(s,3h).
[0076]
实施例3化合物c的合成
[0077]
化合物c的合成步骤同化合物a、b的合成，仅改变起始原料的结构，使其得到化合物c相应结构。终产率42％。
[0078]
1h nmr(500mhz,dmso-d6)δ9.45(s,1h),8.57(d,j＝7.7hz,1h),7.64(s,1h),7.29
–
7.25(m,4h),7.19(s,1h),4.25(d,j＝16.3hz,2h),4.18(ddd,j＝11.6,7.7,3.9hz,1h),3.91
–
3.77(m,j＝6.9,6.0hz,2h),3.18
–
3.06(m,2h),2.89(dd,j＝14.0,4.0hz,1h),2.69(dd,j＝14.0,10.1hz,1h),2.43
–
2.34(m,1h),2.20
–
2.12(m,1h),1.94
–
1.86(m,1h),1.66
–
1.58(m,2h),1.54(dd,j＝7.8,4.5hz,1h),1.38(d,j＝7.6hz,1h),1.28(s,9h),1.22(s,2h),1.04(s,3h),0.92(s,3h).
[0079]
实施例4化合物d的合成
[0080]
在100ml圆底烧瓶中加入化合物a(505mg，1.0mmol)、亚硫酸氢钠(124mg，1.2mmol)。然后向圆底烧瓶中加入4ml乙酸乙酯、2ml乙醇和0.8ml水。反应液在40℃下反应3小时。反应结束后过滤浓缩得到淡黄色油状液体。然后加入10ml乙酸乙酯，过滤后得到白色固体d，产率68％。
[0081]
实施例5化合物e的合成
[0082]
在100ml圆底烧瓶中加入化合物c(539mg，1.0mmol)、亚硫酸氢钠(124mg，1.2mmol)。然后向圆底烧瓶中加入4ml乙酸乙酯、2ml乙醇和0.8ml水。反应液在40℃下反应3小时。反应结束后过滤浓缩得到淡黄色油状液体。然后加入10ml乙酸乙酯，过滤后得到白色固体e，产率72％。
[0083]
表1.化合物a-e的表征参数
[0084]
[0085]
[0086][0087]
结果检测
[0088]
1、化合物对主蛋白酶抑制活性的评价
[0089]
试验方法：
[0090]
分别用pbs溶液稀将10mm的博赛泼维、化合物a-e溶液释成100μm、20μm、4μm、0.8μm、0.16μm、0.032μm、0.0064μm、0.00128μm溶液。
[0091]
在黑色96孔板分别加入10μl的不同浓度的化合物溶液，每个浓度重复3个孔，再加入30μl的3μm新型冠状病毒主蛋白酶溶液。同时设对照组：阴性对照组为加入10μl pbs溶液和30μl的3μm新型冠状病毒主蛋白酶溶液，重复3个孔；空白对照组为加入40μl pbs缓冲液，重复3个孔。然后将黑色96孔板放入37度培养箱孵育30分钟。然后向每个孔中加入10μl的20μm底物(dabcyl-tsavlqsgfrkme-edans)溶液，立即用酶标仪测量60分钟内每分钟的荧光值(ex 340nm、em 490nm)，每个孔共测量61次。
[0092]
用graphpad prism软件绘制横坐标为时间、纵坐标为荧光值的蛋白酶反应曲线图，并计算30分钟内酶反应速率v。阴性对照的酶反应速率作为v
max
，将加入不同浓度化合物后的酶反应速率作为v
x
，空白对照的荧光变化速率为v0，则不同浓度化合物对酶反应活性的抑制率为1-(v
x-v0)/(v
max-v0)
×
100％。然后用graphpad prism分析作图后得到化合物对主蛋白酶的ic
50
值。
[0093]
2、化合物在细胞水平对新冠病毒的抑制效果
[0094]
试验方法：
[0095]
分别用dmem培养基将10mm的博赛泼维、化合物a-e溶液用pbs溶液稀释成200μm、40μm、8μm、1.6μm、0.32μm、0.064μm、0.0128μm、0.00256μm溶液。用dmem培养基将100％的dmso稀释成1％dmso培养基溶液作为空白对照。
[0096]
在生物安全柜内用dmem稀释sars-cov-2病毒至0.01moi。将长满vero细胞的96孔板拿至生物安全柜。向96孔板每个孔中加入100μl的0.01moi病毒溶液，同时向3个孔加入100μl的dmem(作为未感染组)，放入到co2培养箱中培养2h。在生物安全柜内将病毒上清液吸弃，并用pbs清洗，然后向不同孔中加入100μl不同化合物的培养基溶液和100μl 1％dmso培养基溶液。同时，向未感染组和未加入药物组加入含1％dmso的培养基溶液。每个浓度梯度重复3遍。将细胞培养板移出生物安全柜，放入co2培养箱中，5％co2、37℃培养。48小时后裂解细胞，提取rna，进行rt-pcr检测ct值。
[0097]
结果如表2所示。
[0098]
表2.
[0099][0100]
可以看出，本技术提供的化合物具有高抗新冠病毒活性，作为口服类药物，明显高于现有药物博赛泼维。
[0101]
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。