肌肉靶向复合物及其用于治疗强直性肌营养不良的用途的制作方法

本技术涉及用于将分子载荷(例如，寡核苷酸)递送至细胞的靶向复合物及其用途，特别是与疾病治疗相关的用途。参考作为文本文件通过efs-web提交的序列表本技术包含已通过efs-web以ascii格式提交并且在此通过引用整体并入的序列表。在2021年7月8日创建的所述ascii拷贝被命名为d082470038wo00-seq-dwy并且大小为268,942字节。

背景技术：

1、强直性肌营养不良(myotonic dystrophy，dm)是一种显性遗传的遗传疾病，其特征在于肌强直、肌肉损失或变性、肌肉功能减弱、胰岛素抵抗、心律不齐、平滑肌功能障碍和神经系统异常。dm是成年发病的肌营养不良的最常见形式，全世界发病率为全世界8000人中约1人。已经描述了该疾病的两种类型，即1型强直性肌营养不良(dm1)和2型强直性肌营养不良(dm2)。dm1是该疾病的更常见形式，其是由19号染色体上dmpk的3’非编码区中ctg三核苷酸重复的重复扩增(repeat expansion)导致的；dm2是由3号染色体上znf9的第一个内含子中cctg四核苷酸重复的重复扩增导致的。在dm1患者中，ctg三核苷酸重复的重复扩增可包含大于约50至约3,000+的总重复，导致产生有毒的rna重复，其能够形成以高亲和力结合必需的胞内蛋白(例如盲肌样蛋白(muscleblind-like protein))的发夹结构，从而导致蛋白质隔离(protein sequestration)和作为疾病特征的功能丧失表型。除了支持性护理和解决疾病症状的治疗之外，目前尚无用于dm1的有效治疗剂。

技术实现思路

0、发明概述

1、在一些方面中，本公开内容提供了靶向肌细胞以用于将分子载荷递送至这些细胞的复合物。在一些实施方案中，本文中提供的复合物对于递送抑制包含扩增的疾病相关重复的dmpk等位基因的表达或活性的分子载荷特别有用，例如在患有或怀疑患有强直性肌营养不良的对象中。因此，在一些实施方案中，本文中提供的复合物包含与肌细胞表面上的受体特异性结合以用于将分子载荷递送至肌细胞的肌肉靶向剂(例如，肌肉靶向抗体)。在一些实施方案中，复合物通过受体介导的内化被摄取到细胞中，然后分子载荷可被释放以在细胞内部执行功能。例如，经工程化以递送寡核苷酸的复合物可以释放该寡核苷酸，使得该寡核苷酸可以抑制肌细胞中的突变体dmpk表达。在一些实施方案中，通过对连接复合物的寡核苷酸和肌肉靶向剂的共价接头进行内体切割而释放该寡核苷酸。

2、本公开内容的一个方面涉及这样的复合物，所述复合物包含与分子载荷共价连接的抗转铁蛋白受体(transferrin receptor，tfr)抗体，所述分子载荷被配置用于降低dmpk的表达或活性，其中所述抗tfr抗体包含：

3、(i)含有与seq id no：76具有至少95％同一性的氨基酸序列的重链可变区(vh)；和/或含有与seq id no：75具有至少95％同一性的氨基酸序列的轻链可变区(vl)；

4、(ii)含有与seq id no：69具有至少95％同一性的氨基酸序列的重链可变区(vh)；和/或含有与seq id no：70具有至少95％同一性的氨基酸序列的轻链可变区(vl)；

5、(iii)含有与seq id no：71具有至少95％同一性的氨基酸序列的重链可变区(vh)；和/或含有与seq id no：70具有至少95％同一性的氨基酸序列的轻链可变区(vl)；

6、(iv)含有与seq id no：72具有至少95％同一性的氨基酸序列的重链可变区(vh)；和/或含有与seq id no：70具有至少95％同一性的氨基酸序列的轻链可变区(vl)；

7、(v)含有与seq id no：73具有至少95％同一性的氨基酸序列的重链可变区(vh)；和/或含有与seq id no：74具有至少95％同一性的氨基酸序列的轻链可变区(vl)；

8、(vi)含有与seq id no：73具有至少95％同一性的氨基酸序列的重链可变区(vh)；和/或含有与seq id no：75具有至少95％同一性的氨基酸序列的轻链可变区(vl)；

9、(vii)含有与seq id no：76具有至少95％同一性的氨基酸序列的重链可变区(vh)；和/或含有与seq id no：74具有至少95％同一性的氨基酸序列的轻链可变区(vl)；

10、(viii)含有与seq id no：77具有至少95％同一性的氨基酸序列的重链可变区(vh)；和/或含有与seq id no：78具有至少95％同一性的氨基酸序列的轻链可变区(vl)；

11、(ix)含有与seq id no：79具有至少95％同一性的氨基酸序列的重链可变区(vh)；和/或含有与seq id no：80具有至少95％同一性的氨基酸序列的轻链可变区(vl)；或者

12、(x)含有与seq id no：77具有至少95％同一性的氨基酸序列的重链可变区(vh)；和/或含有与seq id no：80具有至少95％同一性的氨基酸序列的轻链可变区(vl)。

13、在一些实施方案中，所述抗体包含：

14、(i)含有seq id no：76的氨基酸序列的vh和含有seq id no：75的氨基酸序列的vl；

15、(ii)含有seq id no：69的氨基酸序列的vh和含有seq id no：70的氨基酸序列的vl；

16、(iii)含有seq id no：71的氨基酸序列的vh和含有seq id no：70的氨基酸序列的vl；

17、(iv)含有seq id no：72的氨基酸序列的vh和含有seq id no：70的氨基酸序列的vl；

18、(v)含有seq id no：73的氨基酸序列的vh和含有seq id no：74的氨基酸序列的vl；

19、(vi)含有seq id no：73的氨基酸序列的vh和含有seq id no：75的氨基酸序列的vl；

20、(vii)含有seq id no：76的氨基酸序列的vh和含有seq id no：74的氨基酸序列的vl；

21、(viii)含有seq id no：77的氨基酸序列的vh和含有seq id no：78的氨基酸序列的vl；

22、(ix)含有seq id no：79的氨基酸序列的vh和含有seq id no：80的氨基酸序列的vl；或者

23、(x)含有seq id no：77的氨基酸序列的vh和含有seq id no：80的氨基酸序列的vl。

24、在一些实施方案中，所述抗体选自fab片段、fab’片段、f(ab’)2片段、scfv、fv和全长igg。在一些实施方案中，所述抗体为fab片段。

25、在一些实施方案中，所述抗体包含：

26、(i)含有与seq id no：101具有至少85％同一性的氨基酸序列的重链；和/或含有与seq id no：90具有至少85％同一性的氨基酸序列的轻链；

27、(ii)含有与seq id no：97具有至少85％同一性的氨基酸序列的重链；和/或含有与seq id no：85具有至少85％同一性的氨基酸序列的轻链；

28、(iii)含有与seq id no：98具有至少85％同一性的氨基酸序列的重链；和/或含有与seq id no：85具有至少85％同一性的氨基酸序列的轻链；

29、(iv)含有与seq id no：99具有至少85％同一性的氨基酸序列的重链；和/或含有与seq id no：85具有至少85％同一性的氨基酸序列的轻链；

30、(v)含有与seq id no：100具有至少85％同一性的氨基酸序列的重链；和/或含有与seq id no：89具有至少85％同一性的氨基酸序列的轻链；

31、(vi)含有与seq id no：100具有至少85％同一性的氨基酸序列的重链；和/或含有与seq id no：90具有至少85％同一性的氨基酸序列的轻链；

32、(vii)含有与seq id no：101具有至少85％同一性的氨基酸序列的重链；和/或含有与seq id no：89具有至少85％同一性的氨基酸序列的轻链；

33、(viii)含有与seq id no：102具有至少85％同一性的氨基酸序列的重链；和/或含有与seq id no：93具有至少85％同一性的氨基酸序列的轻链；

34、(ix)含有与seq id no：103具有至少85％同一性的氨基酸序列的重链；和/或含有与seq id no：95具有至少85％同一性的氨基酸序列的轻链；或者

35、(x)含有与seq id no：102具有至少85％同一性的氨基酸序列的重链；和/或含有与seq id no：95具有至少85％同一性的氨基酸序列的轻链。

36、在一些实施方案中，所述抗体包含：

37、(i)含有seq id no：101的氨基酸序列的重链和含有seq id no：90的氨基酸序列的轻链；

38、(ii)含有seq id no：97的氨基酸序列的重链和含有seq id no：85的氨基酸序列的轻链；

39、(iii)含有seq id no：98的氨基酸序列的重链和含有seq id no：85的氨基酸序列的轻链；

40、(iv)含有seq id no：99的氨基酸序列的重链和含有seq id no：85的氨基酸序列的轻链；

41、(v)含有seq id no：100的氨基酸序列的重链和含有seq id no：89的氨基酸序列的轻链；

42、(vi)含有seq id no：100的氨基酸序列的重链和含有seq id no：90的氨基酸序列的轻链；

43、(vii)含有seq id no：101的氨基酸序列的重链和含有seq id no：89的氨基酸序列的轻链；

44、(viii)含有seq id no：102的氨基酸序列的重链和含有seq id no：93的氨基酸序列的轻链；

45、(ix)含有seq id no：103的氨基酸序列的重链和含有seq id no：95的氨基酸序列的轻链；或者

46、(x)含有seq id no：102的氨基酸序列的重链和含有seq id no：95的氨基酸序列的轻链。

47、在一些实施方案中，抗体不与转铁蛋白受体的转铁蛋白结合位点特异性结合和/或抗体不抑制转铁蛋白与转铁蛋白受体的结合。在一些实施方案中，抗体与人、非人灵长类和啮齿动物的转铁蛋白受体中的两种或更多种的胞外表位具有交叉反应性。在一些实施方案中，所述复合物被配置成促进转铁蛋白受体介导的分子载荷内化到肌细胞中。

48、在一些实施方案中，分子载荷是寡核苷酸。在一些实施方案中，寡核苷酸包含seqid no：148至383和621至638中的至少15个连续核苷酸，其中寡核苷酸中的任意一个或更多个胸苷碱基(t)可任选地是尿苷碱基(u)和/或者任意一个或更多个u可任选地是t。在一些实施方案中，寡核苷酸包含含有seq id no：159、162、172、174、180、182、188、190、195、196、201、203、212、215、218、222、248和264中任一个的序列，其中寡核苷酸中的任意一个或更多个u可任选地是t。在一些实施方案中，寡核苷酸包含seq id no：384至619中任一个的至少15个连续核苷酸之互补区。

49、在一些实施方案中，寡核苷酸介导rna酶h介导的对dmpk mrna转录物的切割。

50、在一些实施方案中，寡核苷酸包含5’-x-y-z-3’式，其中x和z是包含一个或更多个选自以下的2’-经修饰核苷的侧翼区：2’-o-甲基、2’-氟、2’-o-甲氧基乙基和2’，4’-桥联核苷，并且其中y是间隔区且y中的每个核苷均是2’-脱氧核糖核苷。

51、在一些实施方案中，寡核苷酸包含一个或更多个硫代磷酸酯核苷间键联。

52、在一些实施方案中，抗体通过可切割接头与分子载荷共价连接。在一些实施方案中，可切割接头包含缬氨酸-瓜氨酸序列。

53、在一些实施方案中，抗体与分子载荷共价连接，所述共价连接通过与抗体的赖氨酸残基或半胱氨酸残基的缀合进行。

54、在一些实施方案中，降低表达包括降低dmpk的rna水平，任选地其中降低的rna水平存在于细胞核中，任选地其中细胞是肌细胞。在一些实施方案中，dmpk由包含疾病相关重复的等位基因编码。

55、本公开内容的另一方面涉及降低细胞中dmpk表达的方法，该方法包括使细胞与用于促进分子载荷内化到细胞中之有效量的本文公开的复合物接触，任选地，其中细胞是肌细胞。

56、本公开内容的另一方面涉及治疗具有dmpk等位基因的疾病相关重复之扩增的对象的方法，所述dmpk等位基因的疾病相关重复之扩增与强直性肌营养不良相关，所述方法包括向对象施用有效量的本文中公开的复合物。在一些实施方案中，疾病相关重复包含ctg三核苷酸序列的重复单元。在一些实施方案中，复合物经静脉内施用于对象。