1.本发明涉及汉防已甲素制备工艺的技术领域，尤其涉及一种高提取率和高纯度的汉防已甲素的制备方法。
背景技术：
2.汉防己甲素，又名粉防己碱，是我国自主研发的药物。研究证实汉防己甲素是天然的非选择性钙通道阻滞剂，又是钙调蛋白的拮抗剂，具有抗炎、抗纤维化、减毒及抗肿瘤等药理作用。临床上用于关节痛、神经痛；与小剂量放射合并用于肺癌；亦可用于单纯硅肺ⅰ期、ⅱ期、ⅲ期及各期煤硅肺，临床疗效显著。
3.汉防己甲素主要是从防己药材中提取纯化而成，而提取纯化的方法多种多样，常见的主要有冷苯法和氯仿萃取法两种工艺，两种方法从防己中提取汉防己甲素和汉防己乙素通常采用有机溶剂如乙醇或甲醇等，溶媒使用量较大，成品汉防己甲素的纯度较低为90％左右。
4.根据防己药材细胞壁的构成特点，利用生物酶解破壁工艺，将防己细胞壁水解，从而使防己植物细胞内的汉防己甲素、汉防己乙素等生物碱最大限度地溶出，提高提取效率，同时制备高品质的汉防己甲素，纯度提高至97％以上。
技术实现要素：
5.针对现有对防己提取工艺存在的提取率不高和生物碱纯度不高的问题，本发明通过在对防己提取前使用果胶酶和半纤维素酶进行酶解来提高对防己中生物碱的提取率，通过在助滤剂滑石粉的作用下使用滤布进行多次过滤，提高生物碱的纯度。
6.为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：
7.一种汉防已甲素的制备方法，包括如下步骤：
8.(1)制备防己粉末；
9.(2)将防己粉末与水混合，调节ph为3-4，加入果胶酶和半纤维素酶，酶解反应3-5h后，在助滤剂滑石粉的作用下使用滤布过滤得第一滤液和滤渣；
10.(3)将乙醇和第一滤液搅拌混合，回流处理后得提取液，提取液经减压浓缩和放置后过滤得第一沉淀；
11.(4)将第一沉淀在酸水中溶解成溶解液，溶解液在助滤剂滑石粉的作用下使用滤布过滤得第二滤液；其中，酸水的ph＝2-3；
12.(5)将乙醇和第二滤液搅拌混合，回流处理后，经减压浓缩和放置后过滤得第二沉淀；
13.(6)将第二沉淀在苯中溶解，过滤得苯溶解液，对苯溶解液进行浓缩处理得浓缩膏；
14.(7)将浓缩膏加入丙酮溶液，溶解后，进行浓缩处理和放置。
15.具体的，防己粉末的粒度100-200目。
16.具体的，步骤(2)中，使用柠檬酸调节ph。
17.具体的，步骤(2)中，果胶酶和半纤维素酶重量之和与防己粉末的比例为1：(100-150)。
18.具体的，果胶酶和半纤维素酶重量之比为1：(10-15)。
19.具体的，步骤(3)中，乙醇的浓度为80-95％，减压浓缩至原体积的5-10％，放置16-20h。
20.具体的，步骤(5)中，乙醇的浓度为80-95％，减压浓缩至原体积的5-10％，放置16-20h。
21.具体的，步骤(6)中，溶解温度为12-14℃。
22.具体的，步骤(7)中，浓缩膏与丙酮溶液体积比为1：(10-15)。
23.具体的，步骤(7)中，溶解时间为2-3h。
24.本发明通过使用果胶酶和半纤维素酶对防己进行酶解，通过果胶酶和半纤维素酶的互补作用，能分解防己内部的细胞结构，释放出更多的生物碱，制得的提取液中汉防己甲素含量高，高效率的利用防己，降低成本。另外。通过在助滤剂滑石粉的作用下使用滤布对提取液进行多次过滤和配合其他过滤处理，能去除提取液中的其他杂质，提高制成的汉防己甲素的纯度。
具体实施方式
25.下面对颠茄流浸膏的制备方法做详细说明
26.一种汉防已甲素的制备方法，包括如下步骤：
27.(1)制备防己粉末；
28.(2)将防己粉末与水混合，调节ph为3-4，加入果胶酶和半纤维素酶，酶解反应3-5h后，在助滤剂滑石粉的作用下使用滤布过滤得第一滤液和滤渣；具体ph可以为3或4等，酶解反应时间可以是3h、4h或5h等。
29.(3)将乙醇和第一滤液搅拌混合，回流处理后得提取液，提取液经减压浓缩和放置后过滤得第一沉淀；
30.(4)将沉淀在酸水中溶解成溶解液，溶解液在助滤剂滑石粉的作用下使用滤布过滤得第二滤液；其中，酸水的ph＝2-3；
31.(5)将乙醇和第二滤液搅拌混合，回流处理后，经减压浓缩和放置后过滤得第二沉淀；
32.(6)将第二沉淀在苯中溶解，过滤得苯溶解液，对苯溶解液进行浓缩处理得浓缩膏；
33.(7)将浓缩膏加入丙酮溶液，溶解后，进行浓缩处理和放置。
34.具体的，防己粉末的粒度100-200目。其中，防己粉末的粒度可以是100目、120目、160目、180目或200目等。
35.具体的，步骤(2)中，使用柠檬酸调节ph。
36.具体的，步骤(2)中，果胶酶和半纤维素酶重量之和与防己粉末的比例为1：(100-150)。更具体的，该重量比可以是1:100、1:120、1:160、1:180或1:200等
37.具体的，果胶酶和半纤维素酶重量之比为1：(10-15)。更具体的，该重量比可以是
1:10、1:12或1:15等。
38.具体的，步骤(3)中，乙醇的浓度为80-95％，减压浓缩至原体积的5-10％，放置16-20h。乙醇的浓度可以为80％、85％、90％或95％等，减压浓缩至原体积的5％、6％、7％、8％或10％等，放置时间可以是16h、18h或20h。
39.具体的，步骤(5)中，乙醇的浓度为80-95％，减压浓缩至原体积的5-10％，放置16-20h。更具体的，乙醇的浓度可以为80％、85％、90％或95％等，减压浓缩至原体积的5％、6％、7％、8％或10％等，放置时间可以是16h、18h或20h。
40.具体的，步骤(6)中，溶解温度为12-14℃。更具体的，溶解温度可以是12℃或14℃。
41.具体的，步骤(7)中，浓缩膏与丙酮溶液体积比为1：(10-15)。更具体的，浓缩膏与丙酮溶液体积比为1：10、1:13或1:15。
42.具体的，步骤(7)中，溶解时间为2-3h。溶解时间可以是2h或3h。
43.下面列举实施例和对比例对汉防己甲素的制备方法进行说明。
44.实施例1
45.一种汉防已甲素的制备方法，包括如下步骤：
46.(1)制备防己粉末；
47.(2)将防己粉末与水混合，调节ph为3-4，加入果胶酶和半纤维素酶，酶解反应3-5h后，在助滤剂滑石粉的作用下使用滤布过滤得第一滤液和滤渣；
48.(3)将乙醇和第一滤液搅拌混合，回流处理后得提取液，提取液经减压浓缩和放置后过滤得第一沉淀；
49.(4)将沉淀在酸水(ph＝2)中溶解成溶解液，溶解液在助滤剂滑石粉的作用下使用滤布过滤得第二滤液；
50.(5)将乙醇和第二滤液搅拌混合，回流处理后，经减压浓缩和放置后过滤得第二沉淀；
51.(6)将第二沉淀在苯中溶解，过滤得苯溶解液，对苯溶解液进行浓缩处理得浓缩膏；
52.(7)将浓缩膏加入丙酮溶液，溶解后，进行浓缩处理和放置。
53.实施例2
54.一种汉防已甲素的制备方法，包括如下步骤：
55.(1)制备粒度为100目的防己粉末；
56.(2)将防己粉末与水混合，调节ph为3，加入果胶酶和半纤维素酶，酶解反应3h后，在助滤剂滑石粉的作用下使用滤布过滤得第一滤液和滤渣；其中，果胶酶和半纤维素酶重量之和与防己粉末的比例为1：100，果胶酶和半纤维素酶重量之比是1:10；
57.(3)将浓度为80％的乙醇和第一滤液搅拌混合，回流处理后得提取液，提取液经减压浓缩只原体积的5％，放置16h后过滤得第一沉淀；
58.(4)将第一沉淀在酸水(ph＝3)中溶解成溶解液，溶解液在助滤剂滑石粉的作用下使用滤布过滤得第二滤液；
59.(5)将浓度为80％的乙醇和第二滤液搅拌混合，回流处理后，减压浓缩只原体积的5％，放置16h后过滤得第二沉淀；
60.(6)将第二沉淀在苯中12℃下溶解，过滤得苯溶解液，对苯溶解液进行浓缩处理得
浓缩膏；
61.(7)将浓缩膏加入丙酮溶液，浓缩膏与丙酮溶液体积比为1：10。溶解2h后，进行浓缩处理和放置，析出结晶汉防己甲素。
62.实施例3
63.一种汉防已甲素的制备方法，包括如下步骤：
64.(1)制备粒度为150目的防己粉末；
65.(2)将防己粉末与水混合，调节ph为4，加入果胶酶和半纤维素酶，酶解反应5h后，在助滤剂滑石粉的作用下使用滤布过滤得第一滤液和滤渣；其中，果胶酶和半纤维素酶重量之和与防己粉末的比例为1：130，果胶酶和半纤维素酶重量之比是1:12；
66.(3)将浓度为90％的乙醇和第一滤液搅拌混合，回流处理后得提取液，提取液经减压浓缩只原体积的7％，放置17h后过滤得第一沉淀；
67.(4)将第一沉淀在酸水(ph＝2.5)中溶解成溶解液，溶解液在助滤剂滑石粉的作用下使用滤布过滤得第二滤液；
68.(5)将浓度为90％的乙醇和第二滤液搅拌混合，回流处理后，减压浓缩只原体积的7％，放置17h后过滤得第二沉淀；
69.(6)将第二沉淀在苯中13℃下溶解，过滤得苯溶解液，对苯溶解液进行浓缩处理得浓缩膏；
70.(7)将浓缩膏加入丙酮溶液，浓缩膏与丙酮溶液体积比为1：12。溶解3h后，进行浓缩处理和放置，析出结晶汉防己甲素。
71.实施例4
72.一种汉防已甲素的制备方法，包括如下步骤：
73.(1)制备粒度为200目的防己粉末；
74.(2)将防己粉末与水混合，调节ph为3.5，加入果胶酶和半纤维素酶，酶解反应4h后，在助滤剂滑石粉的作用下使用滤布过滤得第一滤液和滤渣；其中，果胶酶和半纤维素酶重量之和与防己粉末的比例为1：150，果胶酶和半纤维素酶重量之比是1:15；
75.(3)将浓度为95％的乙醇和第一滤液搅拌混合，回流处理后得提取液，提取液经减压浓缩只原体积的10％，放置20h后过滤得第一沉淀；
76.(4)将第一沉淀在酸水(ph＝3)中溶解成溶解液，溶解液在助滤剂滑石粉的作用下使用滤布过滤得第二滤液；
77.(5)将浓度为95％的乙醇和第二滤液搅拌混合，回流处理后，减压浓缩只原体积的10％，放置20h后过滤得第二沉淀；
78.(6)将第二沉淀在苯中14℃下溶解，过滤得苯溶解液，对苯溶解液进行浓缩处理得浓缩膏；
79.(7)将浓缩膏加入丙酮溶液，浓缩膏与丙酮溶液体积比为1：15。溶解2.5h后，进行浓缩处理和放置，析出结晶汉防己甲素。
80.实施例5
81.一种汉防已甲素的制备方法，包括如下步骤：
82.(1)制备粒度为110目的防己粉末；
83.(2)将防己粉末与水混合，调节ph为4.5，加入果胶酶和半纤维素酶，酶解反应4.5h
后，在助滤剂滑石粉的作用下使用滤布过滤得第一滤液和滤渣；其中，果胶酶和半纤维素酶重量之和与防己粉末的比例为1：140，果胶酶和半纤维素酶重量之比是1:14；
84.(3)将浓度为85％的乙醇和第一滤液搅拌混合，回流处理后得提取液，提取液经减压浓缩只原体积的8％，放置19h后过滤得第一沉淀；
85.(4)将第一沉淀在酸水(ph＝2)中溶解成溶解液，溶解液在助滤剂滑石粉的作用下使用滤布过滤得第二滤液；
86.(5)将浓度为85％的乙醇和第二滤液搅拌混合，回流处理后，减压浓缩只原体积的8％，放置19h后过滤得第二沉淀；
87.(6)将第二沉淀在苯中14℃下溶解，过滤得苯溶解液，对苯溶解液进行浓缩处理得浓缩膏；
88.(7)将浓缩膏加入丙酮溶液，浓缩膏与丙酮溶液体积比为1：14。溶解3h后，进行浓缩处理和放置，析出结晶汉防己甲素。
89.对比例1
90.一种汉防已甲素的制备方法，包括如下步骤：
91.(1)制备粒度为150目的防己粉末；
92.(2)将防己粉末与浓度为75％的乙醇混合均匀，回流处理后得提取液，提取液经减压浓缩只原体积的7％，放置17h后过滤得第一沉淀；
93.(3)将第一沉淀在酸水(ph＝2)中溶解成溶解液，溶解液在助滤剂滑石粉的作用下使用滤布过滤得第二滤液；
94.(4)将浓度为75％的乙醇和第二滤液搅拌混合，回流处理后，减压浓缩只原体积的7％，放置17h后过滤得第二沉淀；
95.(5)将第二沉淀在苯中13℃下溶解，过滤得苯溶解液，对苯溶解液进行浓缩处理得浓缩膏；
96.(6)将浓缩膏加入丙酮溶液，浓缩膏与丙酮溶液体积比为1：12。溶解3h后，进行浓缩处理和放置，析出结晶汉防己甲素。
97.对比例2
98.一种汉防已甲素的制备方法，包括如下步骤：
99.(1)制备粒度为150目的防己粉末；
100.(2)将防己粉末与水混合，调节ph为4，加入果胶酶和半纤维素酶，酶解反应5h后得酶解液；其中，果胶酶和半纤维素酶重量之和与防己粉末的比例为1：130，果胶酶和半纤维素酶重量之比是1:12；
101.(3)将浓度为70％的乙醇和酶解液搅拌混合，回流处理后得提取液，提取液经减压浓缩只原体积的7％，放置17h后过滤得第一沉淀；
102.(4)将第一沉淀在苯中13℃下溶解，过滤得苯溶解液，对苯溶解液进行浓缩处理得浓缩膏；
103.(5)将浓缩膏加入丙酮溶液，浓缩膏与丙酮溶液体积比为1：12。溶解3h后，进行浓缩处理和放置，析出结晶汉防己甲素。
104.对比例3
105.一种汉防已甲素的制备方法，包括如下步骤：
106.(1)制备粒度为150目的防己粉末；
107.(2)将防己粉末与浓度为75％的乙醇混合均匀，回流处理后得提取液，提取液经减压浓缩只原体积的7％，放置17h后过滤得第一沉淀；
108.(4)将第一沉淀在苯中13℃下溶解，过滤得苯溶解液，对苯溶解液进行浓缩处理得浓缩膏；
109.(5)将浓缩膏加入丙酮溶液，浓缩膏与丙酮溶液体积比为1：12。溶解3h后，进行浓缩处理和放置，析出结晶汉防己甲素。
110.将实施例1-5和对比例1-3制备的提取液和汉防己甲素晶体，采用高压液相检测提取液中的汉防己甲素的含量，计算提取率；用高压液相检测汉防己甲素晶体中的汉防己甲素含量，计算纯度。
111.表1实施例1-5和对比例1-3的提取液的提取率(％)和汉防己甲素晶体的纯度(％)
[0112] 提取率纯度实施例193.197.7实施例295.497.0实施例393.697.1实施例494.398.6实施例594.698.7对比例175.292.1对比例292.582.3对比例375.581.9
[0113]
从表1中可以看出，实施例1-5制成的提取液中汉防己甲素含量高，提取率都在93％以上，而对比例1和对比例3的提取率在75％左右；实施例1-5制成的汉防己甲素晶体的纯度都在97％以上，而对比例2-3的纯度在82％左右。这是因为实施例1-5通过使用果胶酶和半纤维素酶对防己进行酶解，通过果胶酶和半纤维素酶的互补作用，能分解防己内部的细胞结构，释放出更多的生物碱，制得的提取液中汉防己甲素含量高，高效率的利用防己，降低成本。另外。通过在助滤剂滑石粉的作用下使用滤布对提取液进行多次过滤和配合其他过滤处理，能去除提取液中的其他杂质，提高制成的汉防己甲素的纯度。
[0114]
以上所述仅为本发明的优选实施例，并非因此限制本发明的专利范围，凡是利用本发明说明书内容所作的等效结构或等效流程变换，或直接或间接运用在其他相关的技术领域，均同理包括在本发明的专利保护范围。