一种新型免疫调节剂的开发和应用的制作方法

本公开涉及一种免疫调节剂及其应用，特别是抗ccr8抗体及其应用。

背景技术：

1、趋化因子受体8(ccr8)是一种c-c趋化因子受体超家族成员，在活化ii型th细胞表达上调，其配体ccl1/i-309可有效募集活化ii型th细胞，ccl1与ccr8的相互作用(也称为ccl1/ccr8轴)与ii型th细胞介导的免疫应答相关(d'ambrosio,d.,et al.1998.selectiveup-regulation of chemokine receptors ccr4 and ccr8 upon activation ofpolarized human type 2 th cells.j immunol 161(10):5111-5；zingoni,a.,etal.1998.the chemokine receptor ccr8 is preferentially expressed in th2 butnot th1 cells.j immunol 161(2):547-51.)。ccl1可激活ccr8介导的ras/mapk信号通路，促进细胞内钙流释放，并抑制细胞凋亡(denis,c.,et al.2012.c-terminal clipping ofchemokine ccl1/i-309 enhances ccr8-mediated intracellular calcium release andanti-apoptotic activity.plos one 7(3):e34199；louahed,j.,et al.2003.ccr8-dependent activation of the ras/mapk pathway mediates anti-apoptotic activityof i-309/ccl1 and vmip-i.eur j immunol 33(2):494-501)。ccr8对维持调节性t细胞(treg)存活，抑制移植物抗宿主反应(gvhd)也具有重要作用(coghill,j.m.,et al.2013cc chemokine receptor 8 potentiates donor treg survival and is critical forthe prevention of murine graft-versus-host disease.blood 122(5):825-36.)。ccr8+treg被认为是驱动免疫抑制作用的关键细胞，是自身免疫疾病的潜在治疗靶点(barsheshet,y.,et al.2017.ccr8(+)foxp3(+)t(reg)cells as master drivers ofimmune regulation.proc natl acad sci u s a 114(23):6086-6091)。

2、除了维持免疫稳态，treg细胞也被认为是抑制肿瘤免疫的关键因素，和常规t(tconv)细胞数量相比，treg比率偏低的肿瘤患者生存率高，包括卵巢癌、乳腺癌、非小细胞肺癌、肝细胞癌、肾细胞癌、胰腺癌、胃癌、宫颈癌和结肠直肠癌等(bates,g.j.,etal.2006.quantification of regulatory t cells enables the identification ofhigh-risk breast cancer patients and those at risk of late relapse.j clinoncol 24(34):5373-80；curiel,et al.2004；gao,q.,et al.2007.intratumoral balanceof regulatory and cytotoxic t cells is associated with prognosis ofhepatocellular carcinoma after resection.j clin oncol 25(18):2586-93；griffiths,r.w.,et al 2007.frequency of regulatory t cells in renal cellcarcinoma patients and investigation of correlation with survival.cancerimmunol immunother 56(11):1743-53；hiraoka,n.,et al.2006.prevalence of foxp3+regulatory t cells increases during the progression of pancreatic ductaladenocarcinoma and its premalignant lesions.clin cancer res 12(18):5423-34；jordanova,e.s.,et al.2008.human leukocyte antigen class i,mhc class i chain-related molecule a,and cd8+/regulatory t-cell ratio:which variable determinessurvival of cervical cancer patients？clin cancer res 14(7):2028-35；perrone,g.,et al.2008.intratumoural foxp3-positive regulatory t cells are associatedwith adverse prognosis in radically resected gastric cancer.eur j cancer 44(13):1875-82；petersen,r.p.,et al.2006 tumor infiltrating foxp3+regulatory t-cells are associated with recurrence in pathologic stage i nsclcpatients.cancer 107(12):2866-72；sato,et al.2005；sinicrope,f.a.,etal.2009intraepithelial effector(cd3+)/regulatory(foxp3+)t-cell ratio predictsa clinical outcome of human colon carcinoma.gastroenterology 137(4):1270-9)。ruckes t等发现，t细胞淋巴瘤和白血病可通过ccl1自分泌环路方式抵御凋亡(ruckes,t.,et al.2001

3、autocrine antiapoptotic stimulation of cultured adult t-cell leukemiacells by overexpression of the chemokine i-309.blood 98(4):1150-9)。hoelzingerd等显示阻断ccl1可消除treg对肿瘤免疫的抑制作用(hoelzinger,d.b.,et al.2010blockade of ccl1 inhibits t regulatory cell suppressive function enhancingtumor immunity without affecting t effector responses.j immunol 184(12):6833-42)。eruslanov e等发现，尿路上皮癌和肾癌患者肿瘤相关巨噬细胞中ccr8表达增加，肿瘤浸润性cd11b+ccr8+细胞可在自体t淋巴细胞中诱导foxp3的表达，同时还发现原发性肿瘤产生大量ccl1，表明ccl1/ccr8轴是癌症相关炎症的组成部分(eruslanov,e.,etal.2013expansion of ccr8(+)inflammatory myeloid cells in cancer patients withurothelial and renal carcinomas.clin cancer res 19(7):1670-80)。de simone m等在对人结直肠癌或非小细胞肺癌的转录组分析中发现，肿瘤浸润的treg细胞特征性上调ccr8等信号分子的表达，具有高度的免疫抑制性，肿瘤组织中ccr8基因高表达与不良预后相关(de simone,m.,et al.2016

4、transcriptional landscape of human tissue lymphocytes unveilsuniqueness of tumor-infiltrating zingoni,t regulatory cells.immunity 45(5):1135-1147)。plitas g等在乳腺癌中，同样检测到ccr8在肿瘤浸润treg细胞上表达升高，提示通过靶向ccr8去除肿瘤部位的treg细胞，是一种非常有希望的免疫治疗策略(plitas,g.,et al.2016 regulatory t cells exhibit distinct features in human breastcancer.immunity 45(5):1122-1134)。magnuson a等比较来自小鼠结直肠癌、黑色素瘤模型和从早期到晚期不同阶段人结直肠癌患者的肿瘤组织，发现肿瘤浸润treg特征性表达谱具有显著共性，包括ccr8等一系列与treg分化相关的基因上调，抗ccr8抗体可以使治疗后小鼠的肿瘤消退(magnuson,a.m.,et al.2018 identification and validation of atumor-infiltrating treg transcriptional signature conserved across speciesand tumor types.proc natl acad sci u s a 115(45):e10672-e10681)。villarreal d等报道，抗ccr8抗体在结直肠癌小鼠模型中可显著抑制肿瘤生长，抗肿瘤活性与肿瘤特异性t细胞的增加、cd4+和cd8+t细胞浸润增强，以及肿瘤内部cd4+ccr8+tregs显著减少相关(villarreal,d.o.,et al.2018 targeting ccr8 induces protective antitumorimmunity and enhances vaccine-induced responses in colon cancer.cancer res 78(18):5340-5348)。

5、现有疗法中尚无针对肿瘤浸润treg细胞的有效手段。从肿瘤微环境中，实现特异性清除抑制性treg细胞一直是非常大的挑战，例如：使用非岩藻糖化抗ccr4抗体mogamulizumab在清除treg的同时，也显著减少了正常cd4+t细胞和cd8+t细胞(kurose,k.,et al.2015 phase ia study of foxp3+cd4 treg depletion by infusion of ahumanized anti-ccr4 antibody,kw-0761,in cancer patients.clin cancer res 21(19):4327-36)。ccr8在肿瘤浸润treg细胞上表达显著升高，有利于靶向ccr8的抗体区分肿瘤浸润treg细胞与正常t细胞。因此，开发靶向ccr8的单克隆抗体，有效清除肿瘤浸润treg细胞或同时抑制其活性，是目前临床急需的免疫治疗。最近有报道显示，抗ccr8抗体通过去岩藻糖修饰增强抗体依赖细胞介导的细胞毒作用(adcc)，在临床前动物模型中显示了抑瘤作用(andrew lake,michael warren,sonia das,christopher wells,maria scrivens,ernest smith,vito palombella,bijan etemad-gilbertson,pamela holland.2020srf114 is a fully human,ccr8-selective igg1 antibody that induces destructionof tumor tregs through adcc.j immunother cancer 2020；8(suppl 3):a1–a559；campbell,j.r.,et al.2021

6、fc-optimized anti-ccr8 antibody depletes regulatory t cells in humantumor models.cancer res 81(11):2983-2994；dépis,f.,hu,c.,weaver,j.,mcgrath,l.,klebanov,b.,buggé,j.,&shaffer,d.r.(2020).preclinical evaluation of jtx-1811,an anti-ccr8 antibody with enhanced adcc activity,for preferential depletionof tumor-infiltrating regulatory t cells.[abstract].in:proceedings of theannual meeting of the american association for cancer research 2020；2020 apr27-28 and jun 22-24.philadelphia(pa):aacr；cancer res 2020；80(16 suppl):abstract nr 4532.)。

技术实现思路

1、本公开涉及全新的高亲和力ccr8单克隆抗体及人源化抗体，具有阻断ccl1/ccr8轴的中和活性，可抑制ccl1诱导的细胞活化，同时针对人群中低亲和力fcγriiia158f等位基因携带者，通过fc优化增强了adcc效应。在体外药效研究中，新的人源化抗体可有效清除ccr8+细胞，显著抑制人源化小鼠皮下移植瘤模型中mc38、b16/f10和mda-mb-231肿瘤的生长，同时显示了与抗pd-1抗体联用的突出疗效。相对于现有技术，本公开中的ccr8抗体具有全新序列和显著的生物学活性优势。

2、本公开涉及新型抗ccr8抗体或其抗原结合部分，用于抑制ccl1诱导的钙流，提高效应细胞的adcc杀伤活性。进一步地，本公开涉及治疗癌症的新型抗ccr8抗体或其抗原结合部分。

3、在一方面，本公开公开了一种结合ccr8的单克隆抗体或其抗原结合部分。

4、在一方面，本公开提供了编码前述的结合ccr8的抗体或其抗原结合部分的核酸。

5、在一方面，本公开提供了包含前述的核酸的载体。

6、在一方面，本公开提供了包含前述的载体的细胞。

7、在一方面，本公开提供了包含前述的抗体或其抗原结合部分、编码核酸、载体、细胞、组合物。

8、在一方面，本公开提供了治疗与癌症的相关疾病的方法，其包括下述步骤：向所述受试者施用治疗有效量的前述任一方面的抗体或其抗原结合片段、核酸、载体、细胞和/或组合物。

9、在一方面，本公开提供了前述任一方面的抗体或其抗原结合片段、核酸、载体、细胞和/或药物组合物在制备用于治疗受试者患有的癌症的药物中的用途。