技术特征：
1.一种核酸多色荧光探针s-aunss@sio
2-p，其特征在于，包括由二氧化硅包覆的对称金纳米星、靶标固定链和靶标识别链；其中，所述二氧化硅包覆的对称金纳米星的直径为260～300nm；所述靶标固定链选自p53固定链、bax固定链和cyt c固定链中的一种或多种；所述靶标识别链选自p53识别链、bax识别链和cyt c适体链中的一种或多种；所述靶标固定链和靶标识别链通过碱基互补配对进行连接；所述p53固定链、bax固定链或cyt c固定链标记有羧基基团，所述p53识别链、bax识别链或cyt c适体链标记有不同的荧光基团。2.根据权利要求1所述的核酸多色荧光探针s-aunss@sio
2-p，其特征在于，所述不同的荧光基团选自fam、tamra和cy5中的一种或多种。3.根据权利要求1所述的核酸多色荧光探针s-aunss@sio
2-p，其特征在于，所述p53固定链序列：5
’‑
cooh-aaaaagctttgaggtgc-3’；bax固定链：5
’‑
cooh-aaaaaagaggcggggg-3’；cyt c固定链：5
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cooh-aaaaagcaacaacgtac-3’；p53识别链：5
’‑
gcacaaacacgcacctcaaagc-荧光基团-3’；bax识别链：5
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ctcagagctggtgggccccccgcctct-荧光基团-3’；cyt c适体链：5
’‑
ccgtgtctggggccgaccggcgcattgggtacgttgttgc-荧光基团-3’。4.根据权利要求1所述的核酸多色荧光探针s-aunss@sio
2-p，其特征在于，所述二氧化硅包覆的对称金纳米星通过以下方法制备得到：s1：将pvp溶液加热至回流，加入haucl4·
3h2o的deg溶液并反应，反应结束，清洗并固液分离取固相，并将固相分散于有机溶剂中，得到i-aunps溶液；s2：向pvp溶液中加入dma溶液和盐酸溶液搅拌混合均匀，加入s1中所得i-aunps溶液，然后加入haucl4溶液，加热反应得到对称金纳米星；s3：将ctac加入s2中所得对称金纳米星的水溶液并搅拌，加入naoh溶液，并将teos至少分三次加入，反应得到所述二氧化硅包覆的对称金纳米星。5.如权利要求1-4中任一项所述的核酸多色荧光探针s-aunss@sio
2-p的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)将二氧化硅包覆的对称金纳米星进行氨基化，得到所述氨基官能化的二氧化硅包覆的对称金纳米星s-aunss@sio2；(2)取靶标固定链，并加入edc和nhs并孵育，加入氨基官能化的二氧化硅包覆的对称金纳米星进行反应，得到cdna修饰的s-aunss@sio2；(3)将靶标识别链与步骤(2)所得cdna修饰的s-aunss@sio2混合孵育，得到所述核酸多色荧光探针s-aunss@sio
2-p。6.如权利要求1-4中任一项所述的核酸多色荧光探针s-aunss@sio
2-p在定量或定性检测p53 mrna、baxmrna或cyt c中的应用。7.如权利要求1-5中任一项所述的核酸多色荧光探针s-aunss@sio
2-p在检测活细胞中实时原位监测p53介导的细胞凋亡通路的应用。8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，检测方法：将含有s-aunss@sio
2-p的培养基用于孵育细胞，然后加入含有毒素的培养基进行孵育，荧光成像采集数据。
9.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述细胞包括人宫颈癌细胞hela、人结直肠腺癌细胞caco-2、人肝癌细胞hepg2和人乳腺癌细胞中的一种或多种。10.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述毒素选自t-2毒素、黄曲霉毒素b1、呕吐毒素、玉米赤霉烯酮和赭曲霉毒素中的一种或多种。
技术总结
本发明公开了核酸多色荧光探针及制备与在实时原位观察P53介导的细胞凋亡通路顺序激活中的应用。在S-AuNSs@SiO2表面通过酰胺键修饰P53固定链、Bax固定链以及Cyt c固定链，通过互补配对准则连接上修饰有不同荧光基团的互补链、适配体链，构建多色荧光探针。在靶标存在下，DNA双链被迫解开，荧光团从体系中释放出来使猝灭的荧光恢复。由于具有20个对称“热点”，可产生更强的局部电场，基于S-AuNSs的探针表现出更好的光学性能。本发明的S-AuNSs@SiO
技术研发人员：马小媛 李晨彪 陈沛芳 王周平
受保护的技术使用者：江南大学
技术研发日：2022.04.08
技术公布日：2022/8/5