一种lncRNA及其下游级联物质在芳香化酶抑制剂耐药ER阳性乳腺癌中的用途

本发明涉及肿瘤分子生物学领域，更具体地，涉及一种lncrna及其下游级联物质在芳香化酶抑制剂耐药er阳性乳腺癌中的用途。

背景技术：

1、乳腺癌中约有75％的类型表达雌激素受体(estrogen receptor，er)，称之为er阳性乳腺癌，其发生、发展主要依赖雌激素的刺激。因此，剥夺雌激素信号成为er阳性乳腺癌激素疗法的主要内容。第三代芳香化酶抑制剂(aromatase inhibitor，ai)是当今临床上绝经后 er阳性乳腺癌患者的标准一线用药，其疗效相对于他莫昔芬更具优势。该优势尤其体现于绝经后女性，其发生卵巢萎缩，由于外周组织中的芳香化酶催化肾上腺分泌的雄激素前体，是雌激素的最主要来源，在治疗初期，ai通过特异性引起芳香化酶失活以抑制内源性雌激素产生，从而影响乳腺癌细胞的失控增殖。然而在临床上ai治疗的有效率仅为25％～45％，多数患者在治疗后期出现明显的耐药现象，引起疾病进展、复发。因此，ai继发性耐药的发生极大地限制了其治疗的有效性。尽管目前已经有不少针对ai耐药的研究，但ai耐药的分子机制还尚不明确，仍然无法给出相应有效的治疗靶点、技术方案。现有技术亟需对乳腺癌ai 耐药的发生机制进行深入研究，以获取有望诊断ai耐药、逆转ai耐药、增强ai治疗疗效的产品或治疗方案等，提高er阳性乳腺癌的治疗敏感性，改善患者预后。

技术实现思路

1、本发明旨在克服上述现有技术的至少一种不足，提供一种长链非编码rna(lncrna)及其下游级联物质在诊断、治疗ai耐药er阳性乳腺癌中的用途，该长链非编码rna能作为一种标志物，以诊断er阳性乳腺癌对ai的耐药性及对应患者的预后，同时，该长链非编码 rna促进下游的ptbp1与ldha 3’utr结合反应使相应er阳性乳腺癌细胞进行不依赖雌激素的增殖，基于该内容，提供相应的长链非编码rna及其下游结合反应的抑制剂能实现相应的杀伤、治疗效果，提高该类ai耐药乳腺癌的ai治疗疗效。

2、本发明的一个目的在于提供上述长链非编码rna在制备诊断er阳性乳腺癌ai耐药、预后评估er阳性乳腺癌ai治疗、治疗ai耐药er阳性乳腺癌的产品中的用途，所述长链非编码rna为dio3os。在本发明的一个实施例中，长链非编码rna dio3os在长期雌激素剥夺(lted)er阳性乳腺癌细胞、ai耐药er阳性乳腺癌组织中特异性上调，且其与患者不良预后显著相关，通过该长链非编码rna能够实现相应的诊断用途。更进一步地，通过敲低长链非编码rna dio3os，还能起到抑制包括lted细胞不依赖雌激素生长和增殖的作用，实现相应的治疗效果。同样的，对于实际的ai耐药er阳性乳腺癌细胞，其同样不依赖于雌激素，该长链非编码rna的敲除也有利于实现对应的治疗。

3、本发明的再一个目的在于提供一种er阳性乳腺癌ai耐药诊断标志物，包括lncrnadio3os。

4、本发明的再一个目的在于提供一种长链非编码rna的检测试剂在制备诊断er阳性乳腺癌ai耐药的产品中的用途，所述长链非编码rna为dio3os。

5、进一步地，所述诊断er阳性乳腺癌ai耐药的产品包括实时荧光定量pcr检测试剂。

6、在本发明的一个实施例中，通过针对dio3os的检测试剂，包括荧光定量pcr检测试剂，能够对dio3os的表达量进行检测，结合前述的该长链非编码rna标志物作用，该检测试剂能用于制备诊断er阳性乳腺癌ai耐药的产品。

7、进一步地，所述诊断er阳性乳腺癌ai耐药的产品含有基于长链非编码rna dio3os核苷酸序列设计的用于检测所述长链非编码rnadio3os的特异性引物。在本发明的一个以上实施例中，通过采用长非编码rna对应特异性引物的实时荧光定量pcr能够成功进行dio3os的检测。

8、进一步地，所述特异性引物包括如下所述引物：

9、dio3os_forward：5’-aagcccagcccaataggaa-3’(序列如seqidno.1所示)；dio3os_reverse：5’-ggcccaagaaacagcaaca-3’(序列如seqidno.2所示)。

10、本发明的再一个目的在于提供dio3os抑制剂在制备抑制ai耐药er阳性乳腺癌有氧糖酵解、治疗ai耐药er阳性乳腺癌、增强er阳性乳腺癌对ai治疗敏感性和/或降低ldharna稳定性的产品中的用途。在本发明的一个实施例中，通过沉默dio3os的表达，能够抑制相应的lted细胞有氧糖酵解，抑制不依赖于雌激素的lted乳腺癌细胞的生长和增殖，同样的，其有利于增强er阳性乳腺癌对ai治疗的敏感性。

11、进一步地，dio3os抑制剂包括基于dio3os：entrez geneid:64150所含序列设计的抑制剂。进一步地，dio3os：entrez geneid:64150对应为ensembl id：enst00000554735.1。

12、进一步地，dio3os抑制剂包括沉默dio3os表达的lna、sirna和/或shrna。

13、进一步地，dio3os抑制剂包括基于dio3os：entrez geneid:64150所含序列设计的沉默dio3os表达的lna、sirna、shrna；

14、进一步地，dio3os抑制剂包括沉默dio3os表达的lna、sirna、shrna。在本发明的一个实施例中，通过lna诱导rnase-h介导的降解，以有效沉默dio3os的表达。通过 shrna也能有效沉默dio3os的表达。

15、进一步地，lna包括：

16、lna-1：5’-agaaagagtgtggatc-3’(序列如seqidno.3所示)；和/或，lna-2： 5’-gacaaacggccagtgg-3’(序列如seqidno.4所示)；和/或，lna-3： 5’-ggttagtcactgtaga-3’(序列如seqidno.5所示)；和/或，lna-4： 5’-ccattcaccagcactc-3’(序列如seqidno.6所示)；和/或，lna-5： 5’-ccgaggtgtggagtgt-3’(序列如seqidno.7所示)；

17、和/或，

18、shrna包括：shrna-1，序列为5’-cagtgactaacccaaacca-3’(序列如seqidno.8 所示)；和/或，shrna-2，序列为5’-cctcgggactccataatat-3’(序列如seqidno.9 所示)；和/或，shrna-3，序列为5’-gcacctgatccacactctt-3’(序列如seqidno.10 所示)。

19、本发明的再一个目的在于提供一种表达载体，含有lncrnadio3os基因片段。

20、进一步地，为携带t7启动子且含有lncrna dio3os的pcdna3.1载体。

21、本发明的再一个目的在于提供一种慢病毒载体，含有靶向lncrna dio3os的shrna；进一步地，靶向lncrnadio3os的shrna包括：shrna-1，序列为5’ -cagtgactaacccaaacca-3’(序列如seqidno.8所示)；和/或，shrna-2，序列为 5’-cctcgggactccataatat-3’(序列如seqidno.9所示)；和/或，shrna-3，序列为 5’-gcacctgatccacactctt-3’(序列如seqidno.10所示)。

22、本发明的再一个目的在于提供ptbp1抑制剂在制备抑制ai耐药er阳性乳腺癌有氧糖酵解代谢、治疗ai耐药er阳性乳腺癌、增强ai耐药er阳性乳腺癌对ai治疗敏感性和/ 或降低ldha rna稳定性的药剂中的用途。在本发明的一个实施例中，本发明人发现长链非编码rnadio3os主要是促进ptbp1与ldha 3’utr结合而促进ldhamrna稳定性，从而促进糖酵解过程，以保障不依赖于雌激素的乳腺癌细胞的生长和增殖。本发明人通过抑制ptbp1基因的表达，能够有效地抑制雌激素非依赖性乳腺癌细胞的有氧糖酵解代谢过程，也能起到抑制相应乳腺癌细胞生长、增殖的作用，起到有效的治疗效果。同样的，对于ai 耐药er阳性乳腺癌细胞这一雌激素非依赖性乳腺癌细胞，也能起到相应的治疗、增强ai 敏感性效果。

23、进一步地，ptbp1抑制剂包括基于ptbp1：entrez geneid：5725所含序列设计的抑制剂。

24、进一步地，ptbp1抑制剂包括沉默ptbp1表达的sirna；进一步地，ptbp1抑制剂包括基于ptbp1：entrez geneid：5725所含序列设计的沉默ptbp1表达的sirna。

25、进一步地，沉默ptbp1表达的sirna包括：

26、si-ptbp1-1：5’-gcacaguguugaagaucautt-3’(序列如seqidno.11所示)；

27、和/或，si-ptbp1-2：5’-cccaaagccucuuuauucutt-3’(序列如seqidno.12所示)；和/或，si-ptbp1-3：5’-gccucaacgucaaguacaatt-3’(序列如seqidno.13所示)；和/或，si-ptbp1-4：5’-cccucauugaccugcacaatt-3’(序列如seqidno.14所示)。

28、本发明的再一个目的在于提供一种药物组合物，含有dio3os抑制剂和/或ptbp1抑制剂；进一步地，及药学上可接受的载体。

29、本发明的再一个目的在于提供一种药物组合物，含有ldharna稳定性破坏剂。ldharna稳定性破坏剂包括dio3os抑制剂和/或ptbp1抑制剂。.

30、进一步地，药物组合物为er阳性乳腺癌治疗药物；进一步地，所述er阳性乳腺癌为ai耐药er阳性乳腺癌。

31、与现有技术相比，本发明的有益效果为：提供了一种雌激素非依赖性er阳性乳腺癌细胞生长、增殖的关键调控因素，长链非编码rna dio3os，并研究了其作用机制，发现了与其结合的ptbp1以及该蛋白对ldhamrna的关键作用。基于该主要研究路线，本发明人发现其能作为er阳性乳腺癌ai耐药以及er阳性乳腺癌ai治疗预后的预测标志物，有望利用该长链非编码rna实现相应的诊断，从而尽早为对应患者调整治疗策略，以提高相应的治疗效果。同时，本技术发明人还通过敲低dio3os、ptbp1以进一步研究该长链非编码 rna及ptbp1在促进雌激素非依赖性er阳性乳腺癌细胞生长、增殖中的作用，发现通过敲低dio3os、ptbp1能有效抑制雌激素非依赖性乳腺癌细胞(如lted细胞)的生长、增殖，起到一定的杀伤治疗作用。本技术还具体阐明了dio3os、ptbp1与ldha之间的关系，基于本发明研究内容，有望进一步基于该关键长非编码rna提供有效地增强er阳性乳腺癌的ai治疗敏感性的治疗策略。有望应用于临床中以提高ai耐药er阳性乳腺癌的治疗效果，延长患者生存期，减少或避免患者的复发，提高生存率。