技术特征：
1.一种mariner转座酶表达盒，其特征在于，包括一个gapdh基因启动子和mariner转座酶的编码序列，其在猪链球菌中表达mariner转座酶，所述gapdh基因启动子的核苷酸序列如seq id no.14所示，所述转座酶基因mariner的核苷酸序列如seq id no.15所示。2.一种猪链球菌高效转座突变系统，包含由权利要求1所述的mariner转座酶表达盒、抗性表达盒组成的基因片段tn，以及质粒，所述抗性表达盒由抗性基因及两侧的转座酶识别序列组成，两侧的所述转座酶识别序列分别如seq id no.16和seq id no.17所示，抗性表达盒可被mariner转座酶识别后将该抗性表达盒插入至猪链球菌染色体的ta碱基位点。3.根据权利要求2所述的猪链球菌高效转座突变系统，其特征在于，所述抗性表达盒为红霉素抗性表达盒，其核苷酸序列如seq id no.18所示。4.根据权利要求3所述的猪链球菌高效转座突变系统，其特征在于，所述基因片段tn的核苷酸序列如seq id no.2所示。5.根据权利要求4所述的猪链球菌高效转座突变系统，其特征在于，所述质粒为pset4s质粒，所述基因片段tn插入pset4s质粒中形成所述猪链球菌高效转座突变系统，即pset4s-tn质粒。6.根据权利要求5所述的猪链球菌高效转座突变系统，其特征在于，所述pset4s质粒的核苷酸序列如seq id no.1所示，含有如下基因片段：猪链球菌温敏复制元件ts ori、大肠杆菌复制元件cole1 ori、壮观霉素抗性表达盒。7.根据权利要求6所述的猪链球菌高效转座突变系统，其特征在于，所述猪链球菌高效转座突变系统的核苷酸序列如seq id no.3所示。8.如利用权利要求5～7任一项所述的猪链球菌高效转座突变系统的构建方法，其特征在于，其步骤如下：将所述pset4s质粒用限制性内切酶bglii+hindiii双酶切后用dna回收试剂盒回收大片段，人工合成所述基因片段tn，在37℃的条件下利用同源重组酶将酶切后的pset4s质粒与tn片段连接，转化大肠杆菌dh5α感受态，37℃过夜培养，挑选阳性克隆过夜培养。9.如权利要求2～7任一项所述的猪链球菌高效转座突变系统的在猪链球菌转座子突变库构建中的应用。
技术总结
本发明公开了一种猪链球菌高效转座突变系统，所述转座突变系统，即pSET4s-Tn质粒，包括：(一)猪链球菌温敏复制元件Ts ori；(二)大肠杆菌复制元件ColE1ori；(三)Mariner转座酶表达盒；(四)壮观霉素抗性表达盒(Spc
技术研发人员：黄琦 张咏晴 周锐 邱德新 黎璐
受保护的技术使用者：华中农业大学
技术研发日：2022.04.19
技术公布日：2022/7/8