一种含有降嘌呤的枯草芽孢杆菌纳豆亚种菌株的组合物及其应用的制作方法

本发明涉及微生物，特别是涉及一种含有降嘌呤的枯草芽孢杆菌纳豆亚种菌株的组合物及其应用。

背景技术：

1、高尿酸血症是一种慢性代谢性疾病，除因尿酸结晶引发痛风外，还可能发展为肾病、尿路结石、心脑血管紊乱等。健康状态下，人体尿酸的产生和排泄保持着动态平衡。尿酸来源包括外源性富含嘌呤的食物，以及内源性嘌呤核苷酸分解代谢生成。人体内尿酸除了2/3由肾脏排泄，还有约1/3从肠道排泄。尿酸的肠道代谢障碍是导致高尿酸血症的重要因素。

2、临床常用的治疗高尿酸血症药物的作用之一为抑制尿酸产生，如非布司他的作用机制即为通过抑制黄嘌呤氧化酶的活性，阻碍嘌呤向尿酸转化，从而减少尿酸的生成。但这类药物都有着不同程度的副反应，如胃肠道反应、肝功能损害、心血管不良反应等。再如苯溴马龙，抑制肾脏尿酸转运蛋白回吸收尿酸，增加尿酸排泄，但其对肾脏有较大的副作用。另外，由于化药的毒副作用，目前有30-50％的痛风患者无药可治。因此，非常有必要开发一种疗效可靠、毒副作用小的治疗方式。

3、与传统治疗药物相比，微生态制剂的应用给高尿酸血症的治疗带来了新的发展：其一，补充具有分解嘌呤/嘌呤前体功能的菌群，通过减少肠道嘌呤吸收，阻止嘌呤在肠道内向尿酸转化，达到降低血尿酸的治疗目的；其二，痛风患者肠道菌群失调导致嘌呤代谢不平衡和肠道尿酸排泄受阻，这可能是高尿酸症状的重要原因。目前微生态制剂的一个重要开发方向是促进肠道菌群平衡的恢复。

4、目前筛选微生态制剂的技术手段，主要是在体外缓冲液体系中测试目标菌株降解或转化嘌呤类化合物的能力。值得注意的是，肠道环境远比体外缓冲液体系复杂。人体肠道为低氧环境，含氧量低于4％。另外肠道环境中通常营养较丰富，存在多种氮源，且有胆汁和胰酶的影响，均可能会干扰目标菌株的生长代谢、及对嘌呤类分子的利用与转化。但是在现有的筛选流程中，较少考虑这些因素，因此需要进一步评估筛选出的菌株在模拟体内环境的条件下是否发挥作用。

5、综上所述，有必要筛选出更多能在人体肠道环境中具有分解嘌呤/嘌呤前体能力，同时有助于肠道菌群向相对健康的方向进行平衡的细菌。

技术实现思路

1、本发明的目的在于针对现有技术的现状及存在的不足，提供一种具有降解嘌呤类化合物能力的枯草芽孢杆菌，并显著降低高尿酸血症小鼠的血尿酸水平。本发明的枯草芽孢杆菌来源于可食用纳豆产品，人体服用安全性高，作为降低血尿酸的新型可食用型菌株，在制备药品和/或其他相关产品方面具有广阔的应用前景。

2、为实现上述目的，本发明采用以下技术方案：

3、第一方面，本发明提供一种可口服用于降低血尿酸的组合物，含有可降解嘌呤类化合物的枯草芽孢杆菌，所述枯草芽孢杆菌的微生物分类命名为枯草芽孢杆菌纳豆亚种(bacillus subtilis subsp.natto)。所述组合物中的枯草芽孢杆菌在低氧条件下(氧含量≦1.0％，和/或1～2％，和/或2～3％，和/或3～4％)，以及在含胰酶和胆盐的模拟肠道环境中，对嘌呤化合物具有降解和利用能力，可减少嘌呤类化合物吸收入血，在体内转化成尿酸，或减少这些嘌呤类化合物在肠道内转化成尿酸，以免再吸收入血导致体内尿酸水平升高。所述嘌呤类化合物包括嘌呤碱基(腺嘌呤、鸟嘌呤、黄嘌呤、次黄嘌呤)、嘌呤核苷(鸟苷、腺苷、黄嘌呤核苷、肌苷)、嘌呤核苷酸(鸟苷酸、腺苷酸、肌苷酸)中的一种或以上。

4、优选地，上述组合物包含枯草芽孢杆菌纳豆亚种kbsn-1,kbsn-2,kbsn-3,kbsn-8菌株中的至少一种。

5、进一步优选地，上述组合物包含分类名称为枯草芽孢杆菌纳豆亚种(bacillussubtilis subsp.natto)kbsn-2菌株，于2022年4月21日在中国典型培养物保藏中心保藏，保藏编号为cctcc no:m 2022444；保藏地址为中国.武汉.武汉大学。

6、更进一步优选地，上述组合物的活性成分包含有效量的枯草芽孢杆菌纳豆亚种kbsn-2菌株，其含有枯草芽孢杆菌纳豆亚种kbsn-2的孢子数的量不低于104cfu/g或104cfu/ml组合物。

7、第二方面，本发明提供一株可食用纳豆产品来源的枯草芽孢杆菌菌株，其分类名称为枯草芽孢杆菌纳豆亚种(bacillus subtilis subsp.natto)kbsn-2菌株，于2022年4月21日在中国典型培养物保藏中心保藏，保藏编号为cctcc no:m 2022444；保藏地址为中国.武汉.武汉大学。

8、第三方面，本发明提供了一种食品，其包含第二方面所述的保藏编号为cctcc no:m 2022444枯草芽孢杆菌纳豆亚种菌株。

9、第四方面，本发明提供了一种食品添加剂，其包含第二方面所述的保藏编号为cctcc no:m 2022444枯草芽孢杆菌纳豆亚种菌株。

10、第五方面，本发明提供了一种微生物制剂，其包含第二方面所述的保藏编号为cctcc no:m 2022444枯草芽孢杆菌纳豆亚种菌株。

11、第六方面，本发明提供了一种保健品，其包含第二方面所述的保藏编号为cctccno:m 2022444枯草芽孢杆菌纳豆亚种菌株。

12、第七方面，本发明提供了一种药物组合物，其包含第二方面所述的保藏编号为cctcc no:m 2022444枯草芽孢杆菌纳豆亚种菌株。

13、第八方面，本发明提供第一方面所述的组合物或第二方面所述的枯草芽孢杆菌纳豆亚种在制备减少肠道嘌呤吸收的药物或食品中的应用。

14、第九方面，本发明提供第一方面所述的组合物或第二方面所述的枯草芽孢杆菌纳豆亚种在制备预防和治疗高尿酸血症和/或痛风的药物或食品中的应用。

15、优选地，上述应用中，所述的药物是供口服的剂型。

16、优选地，上述应用中，所述剂型是选自于下列所构成的群组：溶液、悬浮液、乳剂、粉末、锭剂、丸剂、糖浆、口含锭、片剂、口嚼胶、浓浆以及胶囊。

17、优选地，上述应用中，所述的食品，包括普通食品，保健食品，或特殊医学用途配方食品。

18、第十方面，本发明提供第一方面所述的组合物或第二方面所述的枯草芽孢杆菌纳豆亚种菌株在降低饮食品中嘌呤类化合物的应用。

19、第十一方面，本发明提供一种抑制饮食品来源嘌呤类化合物摄入的方法，其包括使饮食品的原料或中间产品与第一方面所述的组合物、第二方面所述枯草芽孢杆菌纳豆亚种菌株和/或其处理物接触的工序。

20、第十二方面，本发明提供一中降低饮食品中嘌呤类化合物的制造方法，其包括使饮食品的原料或中间产品与第一方面所述的组合物、第二方面所述枯草芽孢杆菌纳豆亚种菌株和/或其处理物接触的工序。

21、本发明的有益效果

22、本发明从纳豆(粉)、稻草、其它枯草、土壤等中分离菌株。挑取可以在含嘌呤类化合物的培养基平板上生长的菌落。经过16s rdna测序和纳豆发酵试验鉴定为可用于制备纳豆的枯草芽孢杆菌或枯草芽孢杆菌纳豆亚种。在嘌呤类化合物的培养基中分别接种这些菌株，观测其生长状况。挑选可在复合嘌呤培养平板上快速生长的菌株，模拟肠道环境，检测在有其他氮源存在、同时限制于低氧条件(氧含量≦1.0％，和/或1～2％，和/或2～3％，和/或3～4％)下，这些菌株消耗培养基中嘌呤类化合物的能力，筛选出降解能力强且降解速度快的枯草芽孢杆菌纳豆亚种菌株。

23、选取在体外筛选中具有显著降解嘌呤类化合物的枯草芽孢杆菌纳豆亚种的菌株及其组合物，对高尿酸血症模型小鼠进行灌胃治疗，观察对小鼠血清尿酸值的影响，结果发现能够显著抑制血清尿酸值上升的枯草芽孢杆菌纳豆亚种。

24、本发明筛选到的枯草芽孢杆菌纳豆亚种kbsn-2菌株，在高尿酸血症的鼠模型的降尿酸效果试验显示，上述菌株显示出明显的降血尿酸效果。因此，具有降解嘌呤类化合物能力的枯草芽孢杆菌纳豆亚种菌株作为降低血尿酸和痛风治疗的新手段，在不降低生活品质(低嘌呤饮食)条件下，显著减少食源性嘌呤的吸收，达到低嘌呤饮食的效果。

25、所选菌具有消耗肠道内氧气的能力。抑制需氧的病原菌生长，促进兼性厌氧或厌氧的乳杆菌及双歧杆菌增殖，有助于肠道菌群向相对健康的方向进行平衡，进一步帮助肠道内嘌呤与尿酸代谢正常化，帮助血尿酸正常化。

26、本发明筛选到的枯草芽孢杆菌纳豆亚种kbsn-2菌株，降低肠道嘌呤类化合物的吸收，起到降低尿酸生成的作用，与临床化药治疗方式相比，无毒副作用，安全性更高，具有广阔的应用前景。