牡丹干细胞在皮肤修复以及抗衰老护肤品中的应用的制作方法

本申请涉及皮肤修复化妆品，尤其涉及牡丹干细胞在皮肤修复以及抗衰老护肤品中的应用。

背景技术：

1、植物干细胞(plant stem cell)是未分化的细胞，具有很强的自我更新和持续分裂能力。植物干细胞培养技术，是在传统组培技术的基础上，以植物干细胞为目标，诱导、分离和培养外植体，建立相应的干细胞培养体系植物干细胞培养技术，不仅丰富了植物培养技术，而且为天然产物的商业化生产，乃至植物生物技术的发展，提供了新的研究方向和契机。另外，将植物干细胞培养技术用于药学制剂，也可以用于制备功能性饮料，还可以用于化妆品中，例如制备护肤液、乳液、营养霜、按摩霜和面膜将具有广阔的应用前景。

技术实现思路

1、有鉴于此，本申请的目的在于至少提供一种牡丹干细胞在在皮肤修复以及抗衰老护肤品中的应用。

2、第一方面，本申请实施例公开了一种牡丹干细胞冻存液，包含牡丹干细胞以及冻存液，所述冻存液包含8～15wt％植物白蛋白、2～2.5wt％甘露醇和1～10wt％二甲基亚砜的植物干细胞完全液体培养基。

3、第二方面，本申请实施例公开了所述的牡丹干细胞冻存液的制备方法，包括以下步骤：

4、获得牡丹幼苗枝杆的形成层组织；

5、将所述形成层组织置于分离培养基中尿培养，促使形成层细胞分离而不脱分化，得到形成层细胞；

6、将所述形成层细胞于继代培养基和分离培养基中交底培养，获得具有小液泡结构的牡丹干细胞；

7、将所述牡丹干细胞悬浮培养，获得所述牡丹干细胞的悬浮液；以及

8、将所述牡丹干细胞的悬浮液与冻存液混合后进行冻存；

9、其中，所述冻存液包含8～15wt％植物白蛋白、2～2.5wt％甘露醇和1～10wt％二甲基亚砜的植物干细胞完全液体培养基。

10、在本申请实施例中，所述牡丹干细胞悬浮培养的步骤具体包括：

11、将分离的牡丹干细胞转接至初始液体培养基中培养15天后，过滤，静置取下层原液，补充第一继代培养基；

12、培养10天后，过滤，静置取下层原液，补充第二继代培养基；

13、培养7天后，过滤，静置取下层原液，补充第三继代培养基；

14、培养7天后，过滤，静置取下层原液，补充第四继代培养基；

15、培养5天后，过滤，静置取下层原液，补充第五继代培养基，最后继续培养5 天，即可得最终的牡丹干细胞悬浮液。

16、在本申请实施例中，所述初始培养基包含2.5wt％蔗糖、0.85mg/l 2,4-d、60mg/l苯丙氨酸、0.03mg/l激动素和50mm柠檬酸钠，该培养基ph为5.0～5.9；

17、所述第一继代培养基包含2.5wt％蔗糖、0.85mg/l 2,4-d、60mg/l苯丙氨酸、0.03mg/l激动素、50mg/l柠檬酸钠、5～7.5mm三七皂甙r1、2.5mm kno3、105μm fe-edta(na)和0.15μm(nh4)6mo7o24，该培养基ph为5.0～5.9。

18、在本申请实施例中，所述第二继代培养基包含2.5wt％蔗糖、0.55mg/l 2,4-d、60mg/l苯丙氨酸、25mg/l柠檬酸钠、0.03mg/l激动素、2.5～5mm三七皂甙r1、 3mm sfps、2.5mm kno3、80～105μm fe-edta(na)和0.15μm(nh4)6mo7o24，该培养基ph为5.0～5.9。

19、在本申请实施例中，所述第三继代培养基包含2.5wt％蔗糖、0.23mg/l 2,4-d、60mg/l苯丙氨酸、25mg/l柠檬酸钠、0.01mg/l激动素、3mm sfps、2.5mm kno3、 65～105μm fe-edta(na)和0.15μm(nh4)6mo7o24，ph为5.0～5.9。

20、在本申请实施例中，所述第四继代培养基包含2.5wt％蔗糖、0.15mg/l 2,4-d、60mg/l苯丙氨酸、25mg/l柠檬酸钠、3mm sfps、2.5mm kno3、105μm fe-edta(na)、 0.15μm(nh4)6mo7o24、1.2mm ca(no3)2，0.25mm k2so4、0.25mm mgso4、2.56μm mnc12、0.12μm znso4、0.14μm cuso4和15.44μm h3bo3，该培养基ph为5.0～5.9。

21、在本申请实施例中，所述第五继代培养基包含0.6mm ca(no3)2，0.75mm k2so4、0.15mm mgso4、1.78μm mnc12、0.06μm znso4、0.08μm cuso4和7.35μm h3bo3，该培养基ph为5.0～5.9。

22、第三方面，本申请实施例公开了包含牡丹干细胞冻存液、或所述的制备方法制得的牡丹干细胞冻存液的乳化液。

23、第四方面，本申请实施例公开了牡丹干细胞冻存液、或所述的制备方法制得的牡丹干细胞冻存液在制备皮肤修复或抗衰老皮肤品中的应用。

24、与现有技术相比，本申请至少具有以下有益效果：

25、本申请通过对牡丹种子进行皿上培养，得其幼苗，再对幼苗的形成层组织进行分离，于分离培养基上成功分离培养得到牡丹干细胞，并且使用了多次继代培养和添加不同的独特培养基以补充干细胞所需营养的技术，使得得到的牡丹干细胞具有表达 sod、cat和prx相关的性能，继而通过体外试验和体内试验这些表达的酶活能够促进角质形成细胞的迁移和角质形成细胞分化相关基因表达，为其促进皮肤屏障功能修复和皮肤抵抗氧化功能提供帮助；并为牡丹干细胞拓展了其在治疗或保健与皮肤屏障受损相关的皮肤疾病及伤口愈合、以及抗衰老应用中具有潜在的应用价值。

技术特征：

1.一种牡丹干细胞冻存液，包含牡丹干细胞以及冻存液，所述冻存液包含8～15wt％植物白蛋白、2～2.5wt％甘露醇和1～10wt％二甲基亚砜的植物干细胞完全液体培养基。

2.权利要求1所述的牡丹干细胞冻存液的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述牡丹干细胞悬浮培养的步骤具体包括：

4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述初始培养基包含2.5wt％蔗糖、0.85mg/l 2,4-d、60mg/l苯丙氨酸、0.03mg/l激动素和50mm柠檬酸钠，该培养基ph为5.0～5.9；

5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述第二继代培养基包含2.5wt％蔗糖、0.55mg/l 2,4-d、60mg/l苯丙氨酸、25mg/l柠檬酸钠、0.03mg/l激动素、2.5～5mm三七皂甙r1、3mm sfps、2.5mm kno3、80～105μm fe-edta(na)和0.15μm(nh4)6mo7o24，该培养基ph为5.0～5.9。

6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述第三继代培养基包含2.5wt％蔗糖、0.23mg/l 2,4-d、60mg/l苯丙氨酸、25mg/l柠檬酸钠、0.01mg/l激动素、3mm sfps、2.5mmkno3、65～105μm fe-edta(na)和0.15μm(nh4)6mo7o24，ph为5.0～5.9。

7.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，所述第四继代培养基包含2.5wt％蔗糖、0.15mg/l 2,4-d、60mg/l苯丙氨酸、25mg/l柠檬酸钠、3mm sfps、2.5mm kno3、105μm fe-edta(na)、0.15μm(nh4)6mo7o24、1.2mm ca(no3)2，0.25mm k2so4、0.25mm mgso4、2.56μmmnc12、0.12μm znso4、0.14μm cuso4和15.44μm h3bo3，该培养基ph为5.0～5.9。

8.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于，所述第五继代培养基包含0.6mm ca(no3)2，0.75mm k2so4、0.15mm mgso4、1.78μm mnc12、0.06μm znso4、0.08μm cuso4和7.35μmh3bo3，该培养基ph为5.0～5.9。

9.一种包含权利要求1所述的牡丹干细胞冻存液、或权利要求2-8任一项所述的制备方法制得的牡丹干细胞冻存液的乳化液。

10.权利要求1所述的牡丹干细胞冻存液、或权利要求2-8任一项所述的制备方法制得的牡丹干细胞冻存液在制备皮肤修复或抗衰老皮肤品中的应用。

技术总结
本申请公开了牡丹干细胞在皮肤修复以及抗衰老护肤品中的应用，并公开了一种包含牡丹干细胞以及冻存液的牡丹干细胞冻存液。该所述冻存液包含8～15wt％植物白蛋白、2～2.5wt％甘露醇和1～10wt％二甲基亚砜的植物干细胞完全液体培养基。本申请还通过对分离的牡丹干细胞进行多次继代培养和添加不同的独特培养基以补充干细胞所需营养的技术，使得得到的牡丹干细胞具有表达SOD、CAT和PRX相关的性能，使其具有促进角质形成细胞的迁移和角质形成细胞分化相关基因表达，拓展了其在治疗或保健与皮肤疾病及伤口愈合、以及抗衰老应用中具有潜在的应用价值。

技术研发人员：朱源源
受保护的技术使用者：广州金天芳颜化妆品有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/12