一种松香二萜类化合物及其制备方法和应用

1.本发明属于生物医药技术领域。更具体地，涉及一种松香二萜类化合物及其制备方法和应用。


背景技术：

2.胶质瘤是最常见的原发性恶性脑肿瘤，其中多形性胶质母细胞瘤(gbm)为最高级别的恶性胶质瘤(who，iv级)，它是由低级别星形细胞瘤发展而来的。由于gbm具有侵袭性生长、受bbb限制、易产生耐药性及预后差等特点，尽管进行了标准化治疗，gbm患者的5年生存期仍不足10％。并且，由于恶性胶质瘤的致死率高，发生在特殊部位如颅腔会存在肿瘤微环境和血脑屏障对药物摄取的影响，耐药性以及预后不良等诸多因素，抗胶质瘤药物的研发道路漫长且艰难。
3.目前，针对gbm的标准化治疗手段为手术切除结合术后放化疗，此外还有基因治疗和免疫治疗。替莫唑胺(temozolomide,tmz)、顺铂和卡莫司汀等化疗药是重要的临床辅助治疗用药。但是即便执行了标准化治疗，几乎所有gbm患者都会复发，这是由于外科医生难以在不影响正常脑功能的前提下完全地清除高浸润性生长的胶质瘤细胞，而且这些细胞具有增殖速度快、抗凋亡和快速转移等特点，因此术后复发是治疗gbm最大的挑战之一。大多数gbm患者复发后表现出对放疗不敏感并且对化疗易产生耐药。由于化疗所产生的耐药性，gbm患者的中位生存率约为15个月，治疗效果不理想。因此，开发抗脑胶质瘤的药物是十分必要的。如何有效提高药物的血脑屏障渗透率、降低药物毒副作用等问题一直驱动着人们研发新型抗胶质瘤药物。
4.天然产物具有广泛的结构多样性和药理多效性，是发现先导化合物的重要来源，对药物研发有着深远的影响。如中国专利申请公开了圣草酚作为治疗脑胶质瘤药物的应用，通过实验发现，圣草酚可以抑制人脑胶质瘤细胞凋的增殖、迁移和侵袭，并促进人脑胶质瘤细胞凋亡。但该技术方案仅停留在细胞实验层面，目前在胶质瘤的治疗上仍然缺乏效果较好的药物，因此，仍然有必要多开发抑制胶质瘤的有效药物。


技术实现要素：

5.本发明要解决的技术问题是克服现有治疗胶质瘤的药物较少的缺陷和不足，提供一种松香二萜类化合物。
6.本发明的目的是提供所述松香二萜类化合物的制备方法。
7.本发明另一目的是提供所松香二萜类化合物或其药学上可接受的盐在制备抗胶质瘤药物中的应用。
8.本发明上述目的通过以下技术方案实现：
9.天然产物松香酸(abietic acid,aa)和脱氢松香酸(dehydroabietic acid,dhaa)是从松香或歧化松香中得到的三环二萜类含氧化合物，安全性较高，发明人在松香酸和脱氢松香酸的结构基础上，研发得到了多种具有抗癌功效的化合物。
10.一种松香二萜类化合物，所述松香二萜类化合物具有式i或式ii结构：
[0011][0012]
r为其中，r1为氢或卤素；r2为非取代或取代c
1～5
烷氧基，所述取代c
1～5
烷氧基的取代基为苯基、卤代苯基或杂环芳基；r3为非取代或取代胺基，所述取代胺基的取代基为苯基、c
1～5
烷苯基、卤代苯基；r4为苯基、c
1～5
烷苯基、卤代苯基；r5为苯基。
[0013]
优选地，所述r1为氢或卤素；r2为非取代或取代c
1～3
烷氧基，所述取代c
1～3
烷氧基的取代基为苯基、卤代苯基或吡啶；r3为非取代或取代胺基，所述取代胺基的取代基为苯基、c
1～3
烷苯基、卤代苯基；r4为苯基、c
1～3
烷苯基、卤代苯基；r5为苯基。
[0014]
更优选地，所述r1为氢或卤素；r2为非取代或取代甲氧基，所述取代甲氧基的取代基为苯基、卤代苯基或吡啶；r3为非取代或取代胺基，所述取代胺基的取代基为苯基、甲苯基、卤代苯基；r4为苯基、甲苯基、卤代苯基；r5为苯基。
[0015]
具体的，所述r为
[0016]
中的一种。
[0017]
例如，所述松香二萜类化合物具有以下任一结构：
[0018]
[0019]
[0020][0021]
优选地，所述松香二萜类化合物与酸反应得到的在药学上可接受的盐也在本发明的保护范围之内。其中，所述酸为盐酸、硝酸、硫酸或三氟乙酸、磷酸、醋酸、碳酸。
[0022]
另外的，本发明还提供了所述松香二萜类化合物的制备方法，具体包括以下步骤：
[0023][0024]
s1、以aa为起始原料，在酰化试剂、极性有机溶剂的作用下发生酰基化反应得到化合物1，再与化合物r-h在缚酸剂的作用下发生酰胺缩合反应，即得式i化合物；
[0025][0026]
s2、以dhaa为起始原料，在酰化试剂、极性有机溶剂的作用下发生酰基化反应得到化合物化合物2；再与化合物r-h在缚酸剂的作用下发生酰胺缩合反应，即得式i化合物；
[0027]
其中，所述r-h中的r与上述r定义一致。
[0028]
进一步地，所述酰化试剂选自草酰氯、氯化亚砜、二苯氨基甲酰氯中的一种或多种。
[0029]
更进一步地，所述缚酸剂选自三乙胺、吡啶、n,n-二异丙基乙胺中的一种或多种。
[0030]
进一步地，所述极性有机溶剂选自n,n-二甲基甲酰胺、二氯甲烷中的一种或多种。
[0031]
优选地，所述aa或dhaa和酰化试剂的当量比为1:1.5～1.8；反应温度为0℃至室温的条件下发生酰化反应生成化合物1或化合物2。
[0032]
优选地，所述化合物1或化合物2与所述化合物r-h发生酰胺缩合反应，反应温度为室温，反应时间为16～18h。
[0033]
另外的，本发明还提供了所述松香二萜类化合物或其药学上可接受的盐在制备抗
胶质瘤药物中的应用。
[0034]
优选地，所述胶质瘤为由表皮生长因子受体和/或其突变体表达异常引发的胶质瘤。更优选地，所述胶质瘤包括人胶质瘤细胞t98g、人脑星形胶质母细胞瘤细胞u87mg和人神经胶质细胞u251。
[0035]
另外的，本发明还要求保护一种药物组合物，包含所述松香二萜类化合物、其药学上可接受的盐、水合物、溶剂合物、多晶型物、互变异构体、立体异构体或其前药中的一种或多种。
[0036]
优选地，所述药物组合物还包括药学上可接受的辅料和/或载体。
[0037]
优选的，所述辅料包括下列物质中的至少一种：溶剂、抛射剂、增溶剂、稳定剂、助流剂、矫味剂、防腐剂、助悬剂、包衣材料、芳香剂、抗螯合剂、整合剂、渗透促进剂、ph值调节剂、缓冲剂、增塑剂、助溶剂、乳化剂、着色剂、黏合剂、崩解剂、填充剂、润滑剂、润湿剂、渗透压调节剂、表面活性剂、发泡剂、消泡剂、增稠剂、包合剂、保湿剂、吸收剂、释放剂、絮凝剂及反絮凝剂、助滤剂、释放阻滞剂。
[0038]
本发明的药物组合物可制成各种剂型：按剂型的分散系统分类，具体来说可以制成以下制剂：溶液型、胶体溶液型、乳剂型、混悬型、气体分散型、微粒分散型、固体分散型；按照形态分类，具体来说可以制成以下剂型：液体剂型(如芳香水剂、溶液剂、注射剂、合剂、洗剂、搽剂等)，固体剂型(如散剂、丸剂、片剂、膜剂等)，半固体剂型(如软膏剂、栓剂、糊剂等)。
[0039]
本发明具有以下有益效果：
[0040]
本发明提供了一种松香二萜类化合物，经实验证明，所述松香二萜类化合物对胶质瘤细胞具有显著的抗增殖和抗迁移活性，能够在较低浓度条件下达到显著抗胶质瘤增殖的效果，并且能显著抑制肿瘤细胞的迁移，具有较好的肿瘤治疗效果；并且，所述松香二萜类化合物的pka在6～10.5的范围内，具有较好的血脑屏障通透性，有利于进入大脑发挥药效。
附图说明
[0041]
图1为本发明化合物处理t98g细胞24h抑制t98g细胞迁移的显微图。
[0042]
图2为本发明化合物处理t98g细胞24h抑制t98g细胞迁移率统计图，其中数据来自每个浓度组中三个随机区域的平均值，并与对照组比较，**p《0.01。
[0043]
图3为本发明化合物的ph-vkoh(μl)曲线图。
具体实施方式
[0044]
以下结合说明书附图和具体实施例来进一步说明本发明，但实施例并不对本发明做任何形式的限定。除非特别说明，本发明采用的试剂、方法和设备为本技术领域常规试剂、方法和设备。
[0045]
除非特别说明，以下实施例所用试剂和材料均为市购。
[0046]
实施例1：(1r,4ar,4br,10ar)-7-异丙基-1,4a-二甲基-n-(4-(吡啶-2-基甲氧基)苯基)-1,2,3,4,4a,4b,5,6,10,10a-十氢菲-1-甲酰胺的合成(a1)
[0047]
1、4-(吡啶-2-甲氧基)苯胺的合成(1a)
[0048][0049]
在n,n-二甲基甲酰胺(10ml)溶剂中加入4-氨基苯酚(1g，9.16mmol)使之充分溶解后，加入苯甲醛(1.16g，10.91mmol)并常温搅拌20min；随后向该溶剂中依次加入2-(氯甲基)吡啶盐酸盐(0.80g，4.87mmol)和碳酸钾(5.05g，36.53mmol)，并在50℃下反应18h；反应结束后将混合物过滤，弃掉滤渣保留滤液，并用盐酸(2m)将滤液ph调至1～2，用乙酸乙酯和水萃取，收集有机相，将收集的有机相干燥、过滤以及减压蒸除溶剂后，经硅胶柱色谱法进行纯化，以乙酸乙酯和石油醚的混合溶剂(v:v＝1:5)作为流动相洗脱，得到棕色固体化合物1a，收率为52％。
[0050]
1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.55(dt,j＝4.8,1.3hz,1h),7.80(td,j＝7.7,1.8hz,1h),7.48(d,j＝7.8hz,1h),7.36
–
7.25(m,1h),6.79
–
6.69(m,2h),6.58
–
6.46(m,2h),5.02(s,2h),4.68(s,2h).
[0051]
2、(1r,4ar,4br,10ar)-7-异丙基-1,4a-二甲基-n-(4-(吡啶-2-基甲氧基)苯基)-1,2,3,4,4a,4b,5,6,10,10a-十氢菲-1-甲酰胺的合成(a1)
[0052][0053]
在冰浴条件下，向含有松香酸(1g，3.31mmol)的二氯甲烷(25ml)混合溶液中缓慢滴加草酰氯(0.63g，4.97mmol)，再滴加1-2滴n,n-二甲基甲酰胺，转至室温且无水条件下反应4h；待底物完全反应后，经减压蒸除溶剂得到呈橙黄色油状含酰氯的溶液，并加入无水二氯甲烷(10ml)；随后，向化合物1a(0.31mg，1.55mmol)与三乙胺(tea,0.27g，2.64mmol)常温反应10min后的混合液中逐滴加入含酰氯的溶液，无水条件下常温反应18h；待反应完成后经多次萃取，将所收集的有机层经饱和食盐水洗涤、无水硫酸钠干燥、减压旋蒸得到固体粗品，并用硅胶柱层析将其纯化得到棕色固体化合物a1，收率36％，mp：131.5-133.2℃。
[0054]
1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ9.11(d,j＝61.3hz,1h),8.57(ddd,j＝4.8,1.8,1.0hz,1h),7.82(td,j＝7.7,1.8hz,1h),7.56
–
7.38(m,3h),7.33(ddd,j＝7.5,4.8,1.2hz,1h),7.01
–
6.90(m,2h),5.78
–
5.69(m,1h),5.38
–
5.27(m,1h),5.13(s,2h),2.19(p,j＝6.7hz,1h),2.09
–
1.95(m,3h),1.86
–
1.75(m,3h),1.54(td,j＝9.7,4.5hz,3h),1.32
–
1.20(m,6h),1.19
–
1.11(m,3h),0.96(dd,j＝6.8,1.7hz,5h),0.78(s,3h).esi-ms m/z:485.3[m+h]+,c32h40n2o2.
[0055]
实施例2 (1r,4ar,4br,10ar)-n-(3-氯-4-(吡啶-2-基甲氧基)苯基)-7-异丙基-1,4a-二甲基-1,2,3,4,4a,4b,5,6,10,10a-十氢菲-1-甲酰胺的合成(a2)
[0056]
1、3-氯-4-(吡啶-2-甲氧基)苯胺的合成(2a)
[0057][0058]
参照化合物1a的方法，制备化合物2a，得到灰色固体化合物2a，收率为54％。
[0059]
1h nmr(400mhz,chloroform-d)δ8.56(ddd,j＝4.9,1.7,0.9hz,1h),7.73(td,j＝7.7,1.8hz,1h),7.67
–
7.61(m,1h),7.21(ddd,j＝7.2,5.0,1.2hz,1h),6.84
–
6.74(m,2h),6.51(dd,j＝8.7,2.8hz,1h),5.18(s,2h).
[0060]
2、(1r,4ar,4br,10ar)-n-(3-氯-4-(吡啶-2-基甲氧基)苯基)-7-异丙基-1,4a-二甲基-1,2,3,4,4a,4b,5,6,10,10a-十氢菲-1-甲酰胺的合成(a2)
[0061][0062]
化合物a2的合成参照化合物a1的合成方法，得到淡黄色固体化合物a2，收率为31％，mp：71.3-73.5℃。
[0063]
1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ9.26(d,j＝60.0hz,1h),8.58(d,j＝4.9hz,1h),7.86(t,j＝7.7hz,1h),7.78(d,j＝2.6hz,1h),7.59
–
7.45(m,2h),7.38
–
7.32(m,1h),7.18(dd,j＝13.2,8.7hz,1h),5.71(s,1h),5.31(d,j＝5.2hz,1h),5.23(s,2h),2.24
–
2.17(m,1h),2.08
–
1.95(m,3h),1.81(t,j＝12.7hz,4h),1.53(d,j＝10.9hz,4h),1.26
–
1.22(m,5h),1.16(d,j＝3.4hz,2h),0.97(d,j＝6.8hz,5h),0.84(dt,j＝9.9,5.3hz,3h).esi-ms m/z:519.91[m+h]+,c32h39cln2o2.
[0064]
实施例3 (1r,4ar,4br,10ar)-n-(3-氯-4-((3-氟苄基)氧基)苯基)-7-异丙基-1,4a-二甲基-1,2,3,4,4a,4b,5,6,10,10a-十氢菲-1-甲酰胺的合成(a3)
[0065]
1、3-氯-4-(3-氟苄氧基)苯胺的合成(3a)
[0066][0067]
向n,n-二甲基甲酰胺(20ml)中加入2-氯-4-硝基苯酚(1g，5.76mmol)、碳酸钾(0.80g，5.76mmol)和3-氟苄基溴(1.10g，5.82mmol)，在85℃下搅拌3h；随后使用乙酸乙酯
和水萃取该混合物，收集有机层并用饱和食盐水清洗，经无水硫酸钠干燥处理、减压蒸除溶剂后得到淡黄色固体2-氯-1-((3-氟苄基)氧基)-4-硝基苯；
[0068]
向2-氯-1-((3-氟苄基)氧基)-4-硝基苯(1g,3.56mmol)和还原铁(0.60g,10.68mmol)的乙醇(15ml)溶液中，加入氯化钙溶液(0.42g，3.56mmol，1.4ml水)，将混合物在85℃下搅拌8h，然后过滤去除固体，经减压旋蒸除去溶剂，所得固体使用硅胶柱层析，配置洗脱剂乙酸乙酯和正己烷混合溶剂(v:v＝1:3)，得到黄色固体化合物3a，收率为42％。
[0069]
1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ7.42(p,j＝6.7,5.7hz,1h),7.25(dd,j＝12.1,5.3hz,2h),7.14(td,j＝8.7,3.0hz,1h),6.90(dd,j＝9.1,4.8hz,1h),6.72
–
6.59(m,1h),6.46(dt,j＝5.9,2.9hz,1h),5.02(d,j＝5.2hz,2h),4.95(s,2h).
[0070]
2、(1r,4ar,4br,10ar)-n-(3-氯-4-((3-氟苄基)氧基)苯基)-7-异丙基-1,4a-二甲基-1,2,3,4,4a,4b,5,6,10,10a-十氢菲-1-甲酰胺的合成(a3)
[0071][0072]
合成化合物3a后，化合物a3的合成参照化合物a1的合成方法，得到白色固体化合物a3，收率为25％,，mp：68.7-70.6℃。
[0073]
1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ9.26(d,j＝53.0hz,1h),7.77(t,j＝2.8hz,1h),7.55
–
7.41(m,2h),7.33
–
7.24(m,2h),7.21
–
7.12(m,2h),5.71(d,j＝1.9hz,1h),5.36
–
5.28(m,1h),5.19(s,2h),2.19(p,j＝6.8hz,1h),2.04(dt,j＝17.9,4.6hz,2h),1.98
–
1.86(m,2h),1.86
–
1.73(m,3h),1.68(d,j＝18.7hz,1h),1.61
–
1.46(m,3h),1.28
–
1.11(m,7h),0.97(dd,j＝6.8,1.6hz,5h),0.88
–
0.70(m,3h).esi-ms m/z:536.2[m+h]+,c33h39clfno2.
[0074]
实施例4 ((1r,4ar,4br,10ar)-7-异丙基-1,4a-二甲基-1,2,3,4,4a,4b,5,6,10,10a-十氢菲-1-基)(4-苯基哌嗪-1-基)甲酮的合成(a4)
[0075][0076]
化合物a4的合成参照化合物a1的合成方法，得到白色固体化合物a4，收率为16％，mp：104.2-106.5℃。
[0077]
1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ7.22(t,j＝7.7hz,2h),6.93(t,j＝7.6hz,2h),6.81(q,j＝9.6,7.3hz,1h),5.73(d,j＝18.4hz,2h),4.01
–
3.55(m,4h),3.14
–
3.00(m,3h),2.94(s,1h),2.32
–
2.09(m,2h),2.04(t,j＝9.2hz,1h),1.74(dt,j＝42.4,13.8hz,5h),1.61
–
1.48(m,2h),1.37
–
1.07(m,10h),0.96(d,j＝6.9hz,4h),0.89
–
0.63(m,3h).esi-ms m/z:447.1[m+h]+,c30h42n2o.
[0078]
实施例5 (1r,4ar,4br,10ar)-7-异丙基-1,4a-二甲基-n-(6-(苯基氨基)嘧啶-4-基)-1,2,3,4,4a,4b,5,6,10,10a-十氢菲-1-甲酰胺的合成(a5)
[0079]
1、n4-苯基嘧啶-4,6-二胺的合成(4a)
[0080][0081]
向含有4-氨基-6-氯嘧啶(3g，23.16mmol)和苯胺(3.26g，34.97mmol)的异丙醇(30ml)中逐滴加入盐酸(1ml)，在80℃下反应4h；待完全反应后，用饱和碳酸氢钠猝灭反应，经乙酸乙酯和水萃取、饱和氯化钠洗涤有机相，无水硫酸钠干燥以及减压旋蒸后得到大量固体，最后配置石油醚和乙酸乙酯混合溶剂(v:v＝3:1)为流动相对混合物进行硅胶柱层析，纯化后得到白色固体化合物4a，收率为66％。
[0082]
1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.86(s,1h),8.03(s,1h),7.60
–
7.45(m,2h),7.33
–
7.19(m,2h),7.02
–
6.83(m,1h),6.32(s,2h),5.78(d,j＝1.0hz,1h).
[0083]
2、(1r,4ar,4br,10ar)-7-异丙基-1,4a-二甲基-n-(6-(苯基氨基)嘧啶-4-基)-1,2,3,4,4a,4b,5,6,10,10a-十氢菲-1-甲酰胺的合成(a5)
[0084][0085]
化合物a5的合成参照化合物a1的合成方法，得到淡黄色固体化合物a5，收率为29％，mp：99.2-102.4℃。
[0086]
1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ10.11
–
9.67(m,1h),9.65
–
9.37(m,1h),8.35(dd,j＝28.4,10.8hz,1h),7.58(ddd,j＝31.2,21.6,12.8hz,3h),7.41
–
7.17(m,2h),7.06
–
6.87(m,1h),5.69(dd,j＝26.7,12.1hz,1h),5.27(d,j＝25.0hz,1h),2.23
–
2.08(m,2h),1.96(d,j＝23.8hz,2h),1.65
–
1.43(m,6h),1.19(dt,j＝34.8,11.5hz,8h),0.93(dt,j＝20.2,7.0hz,6h),0.81
–
0.71(m,3h).esi-ms m/z:471.4[m+h]+,c30h38n4o.
[0087]
实施例6 (1r,4ar,4br,10ar)-n-(6-氨基嘧啶-4-基)-7-异丙基-1,4a-二甲基-n-苯基-1,2,3,4,4a,4b,5,6,10,10a-十氢菲-1-甲酰胺的合成(a6)
[0088][0089]
参照实施例5合成化合物4a后，化合物a6的合成参照化合物a1的合成方法，得到橙黄色固体化合物a6，收率为22％，mp：131.1-133.1℃。
[0090]
1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.45
–
8.13(m,1h),7.61(d,j＝18.7hz,1h),7.41(t,j＝7.7hz,2h),7.31(t,j＝7.3hz,2h),7.13(dd,j＝12.5,7.3hz,2h),6.83(d,j＝10.2hz,1h),5.85(d,j＝12.3hz,1h),5.74(d,j＝12.4hz,1h),2.36
–
2.13(m,4h),2.07
–
2.01(m,2h),1.77(q,j＝12.2,8.7hz,4h),1.69
–
1.61(m,2h),1.46(d,j＝13.3hz,3h),1.25(d,j＝9.5hz,3h),1.07
–
0.93(m,8h),0.75(s,1h).esi-ms m/z:471.4[m+h]+,c30h38n4o.
[0091]
实施例7 (1r,4ar,4br,10ar)-7-异丙基-1,4a-二甲基-n-(6-(对甲苯氨基))嘧啶-4-基)-1,2,3,4,4a,4b,5,6,10,10a-十氢菲-1-甲酰胺的合成(a7)
[0092]
1、n
4-(对甲苯基)嘧啶-4,6-二胺的合成(5a)
[0093][0094]
化合物5a的合成参照化合物4a的合成方法，得到白色固体化合物5a，收率为61％。
[0095]
1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.73(s,1h),8.00(d,j＝1.0hz,1h),7.40
–
7.31(m,2h),7.12
–
7.02(m,2h),6.27(s,2h),5.73(d,j＝1.0hz,1h),2.24(s,3h).
[0096]
2、(1r,4ar,4br,10ar)-7-异丙基-1,4a-二甲基-n-(6-(对甲苯氨基))嘧啶-4-基)-1,2,3,4,4a,4b,5,6,10,10a-十氢菲-1-甲酰胺的合成(a7)
[0097][0098]
化合物a7的合成参照化合物a1的合成方法，得到白色固体化合物a7，收率为27％，
mp：99.8-101.6℃。
[0099]
1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ9.74(s,1h),9.42(s,1h),8.34(d,j＝1.0hz,1h),7.60
–
7.41(m,3h),7.17
–
7.04(m,2h),5.73(d,j＝16.3hz,2h),2.26(s,3h),1.99
–
1.91(m,3h),1.82
–
1.71(m,5h),1.54(d,j＝11.5hz,4h),1.25
–
1.22(m,5h),0.97(dd,j＝6.8,1.7hz,10h).esi-ms m/z:485.4[m+h]+,c31h40n4o.
[0100]
实施例8 (1r,4ar,4br,10ar)-n-(6-氨基嘧啶-4-基)-7-异丙基-1,4a-二甲基-n-(对甲苯基)-1,2,3,4,4a,4b,5,6,10,10a-十氢菲-1-甲酰胺的合成(a8)
[0101][0102]
参照实施例7合成化合物5a后，化合物a8的合成参照化合物a1的合成方法，得到白色固体化合物a8，收率为21％，mp：86.5-88.4℃。
[0103]
1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.15(d,j＝1.0hz,1h),7.30
–
7.07(m,3h),7.05
–
6.96(m,2h),6.77(s,1h),5.79(d,j＝1.0hz,1h),5.72(s,1h),5.34(s,1h),2.30(s,3h),2.01(d,j＝7.1hz,3h),1.76(t,j＝13.7hz,2h),1.44(s,2h),1.27
–
1.20(m,10h),1.03
–
0.93(m,10h).esi-ms m/z:485.2[m+h]+,c31h40n4o.
[0104]
实施例9 (1r,4ar,4br,10ar)-n-(6-((4-氟苯基)氨基)嘧啶-4-基)-7-异丙基-1,4a-二甲基-1,2,3,4,4a,4b,5,6,10,10a-十氢菲-1-甲酰胺的合成(a9)
[0105]
1、n4-(4-氟苯基)嘧啶-4,6-二胺的合成(6a)
[0106][0107]
化合物6a的合成参照化合物4a的合成方法，得到灰色固体化合物6a，收率为63％。
[0108]
1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.87(s,1h),8.02(d,j＝1.0hz,1h),7.57
–
7.47(m,2h),7.16
–
7.05(m,2h),6.32(s,2h),5.71(d,j＝1.1hz,1h).
[0109]
2、(1r,4ar,4br,10ar)-n-(6-((4-氟苯基)氨基)嘧啶-4-基)-7-异丙基-1,4a-二甲基-1,2,3,4,4a,4b,5,6,10,10a-十氢菲-1-甲酰胺的合成(a9)
[0110][0111]
化合物a9的合成参照化合物a1的合成方法，得到白色固体化合物a9，收率为25％，mp：102.6-104.4℃。
[0112]
1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ9.79(s,1h),9.56(s,1h),8.36(s,1h),7.63(dd,j＝9.1,4.9hz,2h),7.53(d,j＝1.1hz,1h),7.15(t,j＝8.9hz,2h),5.75(s,1h),5.71(s,1h),2.19(dd,j＝11.5,5.1hz,2h),2.09
–
1.92(m,6h),1.77(t,j＝11.6hz,3h),1.54(d,j＝8.1hz,3h),1.24(s,4h),0.97(dd,j＝6.8,1.6hz,9h).esi-ms m/z:489.3[m+h]+,c30h37fn4o.
[0113]
实施例10 (1r,4ar,4br,10ar)-n-(6-氨基嘧啶-4-基)-n-(4-氟苯基)-7-异丙基-1,4a-二甲基-1,2,3,4,4a,4b,5,6,10,10a-十氢菲-1-甲酰胺的合成(a10)
[0114][0115]
参照实施例9合成化合物6a后，化合物a10的合成参照化合物a1的合成方法，得到白色固体化合物a10，收率为20％，mp：112.8-114.6℃。
[0116]
1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.17(d,j＝1.0hz,1h),7.44
–
7.09(m,5h),6.84(s,2h),5.85(d,j＝1.0hz,1h),5.73(d,j＝13.6hz,1h),2.33
–
2.15(m,2h),1.98(dd,j＝24.5,14.1hz,5h),1.85
–
1.70(m,3h),1.45(s,2h),1.24(d,j＝9.2hz,3h),1.04
–
0.94(m,9h),0.75(s,3h).esi-ms m/z:489.3[m+h]+,c30h37fn4o.
[0117]
实施例11 (1r,4ar,4br,10ar)-n-(6-((4-氯苯基)氨基)嘧啶-4-基)-7-异丙基-1,4a-二甲基-1,2,3,4,4a,4b,5,6,10,10a-十氢菲-1-甲酰胺的合成(a11)
[0118]
1、n
4-(4-氯苯基)嘧啶-4,6-二胺的合成(7a)
[0119][0120]
化合物7a的合成参照化合物4a的合成方法，得到淡黄色固体化合物7a，收率为59％。
[0121]
1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ9.03(s,1h),8.05(d,j＝1.0hz,1h),7.69
–
7.53(m,2h),7.37
–
7.24(m,2h),6.38(d,j＝3.4hz,1h),5.76(d,j＝1.0hz,1h).
[0122]
2、(1r,4ar,4br,10ar)-n-(6-((4-氯苯基)氨基)嘧啶-4-基)-7-异丙基-1,4a-二甲基-1,2,3,4,4a,4b,5,6,10,10a-十氢菲-1-甲酰胺的合成(a11)
[0123][0124]
化合物a11的合成参照化合物a1的合成方法，得到白色固体化合物a11，收率为28％，mp：106.9-108.2℃。
[0125]
1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ9.85(s,1h),9.70(d,j＝6.0hz,1h),8.41(q,j＝2.2,1.7hz,1h),7.79
–
7.52(m,3h),7.42
–
7.29(m,2h),5.71(s,1h),5.31(d,j＝5.0hz,1h),2.26
–
2.13(m,2h),1.99(t,j＝7.6hz,3h),1.91
–
1.84(m,1h),1.77(t,j＝11.6hz,2h),1.60
–
1.50(m,3h),1.28
–
1.21(m,4h),1.18
–
1.07(m,3h),1.01
–
0.82(m,6h),0.77(s,3h).esi-ms m/z:505.3[m+h]+,c30h37cln4o.
[0126]
实施例12 ((1r,4ar,4br,10ar)-n-(6-氨基嘧啶-4-基)-n-(4-氯苯基)-7-异丙基-1,4a-二甲基-1,2,3,4,4a,4b,5,6,10,10a-十氢菲-1-甲酰胺的合成(a12)
[0127][0128]
参照实施例11合成化合物7a后，化合物a12的合成参照化合物a1的合成方法，得到
白色固体化合物a12，收率为23％，mp：130.9-132.7℃。
[0129]
1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.20(d,j＝4.1hz,1h),7.81
–
7.55(m,2h),7.46(d,j＝8.6hz,1h),7.35(d,j＝9.5hz,1h),7.13(d,j＝8.7hz,2h),6.85(d,j＝9.4hz,1h),5.90(d,j＝12.5hz,1h),5.72(s,1h),2.35
–
2.14(m,3h),2.09
–
1.93(m,4h),1.77(q,j＝12.7,10.1hz,4h),1.46(s,3h),1.30(s,1h),1.25(d,j＝10.1hz,4h),1.07
–
0.94(m,8h).esi-ms m/z:505.3[m+h]+,c30h37cln4o.
[0130]
实施例13 (1r,4as,10ar)-7-异丙基-1,4a-二甲基-n-(4-(吡啶-2-基甲氧基)苯基)-1,2,3,4,4a,9,10,10a-八氢菲-1-甲酰胺的合成(b1)
[0131][0132]
参考实施例1合成化合物1a后，化合物b1的合成参照化合物a1的合成方法，得到白色固体化合物b1，收率为32％，mp：76.3-77.7℃。
[0133]
1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ9.19(s,1h),8.57(ddd,j＝4.9,1.8,0.9hz,1h),7.82(td,j＝7.7,1.8hz,1h),7.56
–
7.43(m,3h),7.33(ddd,j＝7.6,4.8,1.2hz,1h),7.23
–
7.11(m,1h),7.04
–
6.91(m,3h),6.84(d,j＝2.0hz,1h),5.14(s,2h),2.86
–
2.67(m,3h),2.29(d,j＝12.6hz,1h),2.20(dd,j＝12.4,2.2hz,1h),1.78(s,1h),1.66(d,j＝12.1hz,1h),1.59
–
1.48(m,2h),1.39(s,1h),1.25(d,j＝6.5hz,4h),1.20
–
1.11(m,10h).esi-ms m/z:483.3[m+h]+,c32h38n2o2.
[0134]
实施例14 (1r,4as,10ar)-n-(3-氯-4-(吡啶-2-基甲氧基)苯基)-7-异丙基-1,4a-二甲基-1,2,3,4,4a,9,10,10a-八氢菲-1-甲酰胺的合成(b2)
[0135][0136]
参照实施例1合成化合物2a后，化合物b2的合成参照化合物a1的合成方法，得到白色固体化合物b2，收率为34％，mp：56.8-58.5℃。
[0137]
1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ9.33(s,1h),8.58(d,j＝4.9hz,1h),7.86(t,j＝6.8hz,1h),7.79(d,j＝2.6hz,1h),7.58
–
7.44(m,2h),7.35(dd,j＝7.5,4.8hz,1h),7.18(dd,j＝13.6,8.6hz,2h),6.98(d,j＝7.1hz,1h),6.84(s,1h),5.23(s,2h),2.77(tt,j＝
14.9,7.4hz,2h),2.30(d,j＝12.4hz,1h),2.23
–
2.15(m,1h),1.74(dt,j＝28.1,12.8hz,4h),1.58
–
1.42(m,3h),1.24(d,j＝8.2hz,5h),1.20
–
1.11(m,8h).esi-ms m/z:517.0[m+h]+,c32h37cln2o2.
[0138]
实施例15 (1r,4as,10ar)-n-(3-氯-4-((3-氟苄基)氧基)苯基)-7-异丙基-1,4a-二甲基-1,2,3,4,4a,9,10,10a-八氢菲-1-甲酰胺的合成(b3)
[0139][0140]
参照实施例3合成化合物3a后，化合物b3的合成参照化合物a1的合成方法，得到白色固体化合物b3，收率为28％，mp：62.2-63.8℃。
[0141]
1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ9.33(s,1h),7.79(d,j＝2.5hz,1h),7.55
–
7.40(m,2h),7.28(t,j＝8.0hz,2h),7.21
–
7.12(m,3h),6.97(dd,j＝8.2,2.0hz,1h),6.83(s,1h),5.19(s,2h),2.84
–
2.68(m,4h),2.24(dd,j＝31.6,11.9hz,2h),1.82
–
1.72(m,3h),1.65(d,j＝11.4hz,1h),1.58
–
1.52(m,1h),1.47(d,j＝12.8hz,1h),1.18
–
1.11(m,12h).esi-ms m/z:534.0[m+h]+,c33h37clfno2.
[0142]
实施例16 (((1r,4as,10ar)-7-异丙基-1,4a-二甲基-1,2,3,4,4a,9,10,10a-八氢菲-1-基)(4-苯基哌嗪-1-基))甲酮的合成(b4)
[0143][0144]
化合物b4的合成参照化合物a4的合成方法，得到白色固体化合物b4，收率为35％，mp：124.0-125.8℃。
[0145]
1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ7.20(dt,j＝15.4,8.0hz,3h),6.95(dd,j＝16.3,8.2hz,3h),6.85(s,1h),6.80(t,j＝7.3hz,1h),3.81
–
3.61(m,4h),3.09(s,4h),2.78(t,j＝7.1hz,2h),2.27(d,j＝12.8hz,1h),2.19(d,j＝11.3hz,1h),1.85
–
1.58(m,5h),1.47(d,j＝10.4hz,1h),1.40
–
1.04(m,14h).esi-ms m/z:445.1[m+h]+,c30h40n2o.
[0146]
实施例17 (1r,4as,10ar)-7-异丙基-1,4a-二甲基-n-(6-(苯氨基)嘧啶-4-基)-1,2,3,4,4a,9,10,10a-八氢菲-1-甲酰胺的合成(b5)
[0147][0148]
参照实施例5合成化合物4a后，化合物b5的合成参照化合物a1的合成方法，得到白色固体化合物b5，收率为26％，mp：94.8-96.3℃。
[0149]
1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ9.95(d,j＝48.2hz,1h),9.55(s,1h),8.38(dd,j＝6.5,1.0hz,1h),7.74
–
7.54(m,3h),7.30(dd,j＝8.6,7.3hz,2h),7.17(dd,j＝13.9,8.2hz,1h),6.99(ddd,j＝8.6,6.2,1.8hz,2h),6.82(dd,j＝20.4,2.0hz,1h),2.87
–
2.70(m,3h),2.34(dd,j＝12.5,2.1hz,1h),1.88
–
1.80(m,2h),1.79
–
1.71(m,2h),1.65(d,j＝9.7hz,2h),1.60(s,1h),1.57(s,10h),1.19
–
1.10(m,12h).esi-ms m/z:469.1[m+h]+,c30h36n4o.
[0150]
实施例18 (1r,4as,10ar)-n-(6-氨基嘧啶-4-基)-7-异丙基-1,4a-二甲基-n-苯基-1,2,3,4,4a,9,10,10a-八氢菲-1-甲酰胺的合成(b6)
[0151][0152]
参照实施例5合成化合物4a后，化合物b6的合成参照化合物a1的合成方法，得到白色固体化合物b6，收率为21％，mp：74.7-76.4℃。
[0153]
1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.18(d,j＝6.6hz,1h),7.41(t,j＝7.6hz,2h),7.30(t,j＝7.4hz,1h),7.18
–
7.07(m,3h),6.96(dd,j＝8.2,2.0hz,1h),6.83(s,3h),5.86(s,1h),2.77(ddt,j＝19.5,12.8,5.9hz,2h),2.36
–
2.20(m,1h),1.99(s,2h),1.91(s,1h),1.84(s,1h),1.75(dd,j＝9.5,5.3hz,1h),1.66(t,j＝8.0hz,1h),1.62
–
1.51(m,2h),1.50
–
1.35(m,2h),1.26(d,j＝25.4hz,1h),1.20
–
1.09(m,8h),1.02(s,2h).esi-ms m/z:469.2[m+h]+,c30h36n4o.
[0154]
实施例19 (1r,4as,10ar)-n-(6-氨基嘧啶-4-基)-7-异丙基-1,4a-二甲基-n-苯基-1,2,3,4,4a,9,10,10a-八氢菲-1-甲酰胺的合成(b7)
[0155][0156]
参照实施例7合成化合物5a后，化合物b7的合成参照化合物a1的合成方法，得到白色固体化合物b7，收率为25％，mp：87.5-89.2℃。
[0157]
1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ9.96(s,1h),9.44(s,1h),8.34(t,j＝1.2hz,1h),7.57(d,j＝1.2hz,1h),7.50(dd,j＝8.3,4.1hz,2h),7.18(d,j＝8.2hz,1h),7.11(d,j＝8.3hz,2h),6.98(dd,j＝8.1,2.0hz,1h),6.84(d,j＝2.0hz,1h),2.26(s,3h),1.81
–
1.69(m,2h),1.67
–
1.54(m,4h),1.26
–
1.21(m,8h),1.15(d,j＝6.6hz,10h).esi-ms m/z:483.3[m+h]+,c31h38n4o.
[0158]
实施例20 (1r,4as,10ar)-n-(6-氨基嘧啶-4-基)-7-异丙基-1,4a-二甲基-n-(对甲苯基)-1,2,3,4,4a,9,10,10a-八氢菲-1-甲酰胺的合成(b8)
[0159][0160]
参照实施例7合成化合物5a后，化合物b7的合成参照化合物a1的合成方法，得到白色固体化合物b8，收率为23％，mp：139.7-141.5℃。
[0161]
1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.15(dd,j＝7.0,1.1hz,1h),7.43
–
7.24(m,1h),7.21(dd,j＝8.4,2.8hz,2h),7.12(d,j＝8.2hz,1h),7.07
–
6.90(m,3h),6.83(d,j＝1.9hz,1h),6.77(d,j＝6.4hz,1h),5.80(dd,j＝11.9,1.0hz,1h),2.77(tt,j＝14.8,6.7hz,2h),2.30(s,4h),1.98(d,j＝8.2hz,1h),1.83(d,j＝8.2hz,1h),1.74(t,j＝4.7hz,1h),1.69
–
1.61(m,2h),1.60(d,j＝5.4hz,1h),1.52(d,j＝5.6hz,1h),1.46(s,1h),1.30(s,2h),1.24(d,j＝9.1hz,5h),1.14(s,2h),1.11(s,2h),1.02(s,2h).esi-ms m/z:483.4[m+h]+,c31h38n4o.
[0162]
实施例21 (1r,4as,10ar)-n-(6-((4-氟苯基)氨基)嘧啶-4-基)-7-异丙基-1,4a-二甲基-1,2,3,4,4a,9,10,10a-八氢菲-1-甲酰胺的合成(b9)
[0163][0164]
参照实施例9合成化合物6a后，化合物b9的合成参照化合物a1的合成方法，得到白色固体化合物b9，收率为31％，mp：85.1-87.3℃。
[0165]
1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ10.15
–
9.72(m,1h),9.58(s,1h),8.37(dt,j＝6.6,1.2hz,1h),7.66(ddd,j＝8.7,5.0,3.4hz,2h),7.56(dt,j＝7.1,1.2hz,1h),7.21
–
7.11(m,3h),6.97(td,j＝8.3,2.1hz,1h),6.84(s,1h),2.77(ddq,j＝13.7,7.1,4.0,2.4hz,3h),2.37
–
2.29(m,1h),1.88
–
1.83(m,1h),1.76
–
1.70(m,2h),1.68
–
1.59(m,4h),1.57(d,j＝3.3hz,1h),1.15(d,j＝6.8hz,12h).esi-ms m/z:487.3[m+h]+,c30h35fn4o.
[0166]
实施例22 (1r,4as,10ar)-n-(6-氨基嘧啶-4-基)-n-(4-氟苯基)-7-异丙基-1,4a-二甲基-1,2,3,4,4a,9,10,10a-八氢菲-1-甲酰胺的合成(b10)
[0167][0168]
参照实施例9合成化合物6a后，化合物b10的合成参照化合物a1的合成方法，得到白色固体化合物b10，收率为22％，mp：128.8-130.5℃。
[0169]
1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.37(d,j＝5.3hz,1h),7.69(s,1h),7.35(t,j＝5.8hz,5h),7.12(d,j＝8.2hz,1h),6.96(dd,j＝8.2,1.9hz,1h),6.82(d,j＝1.9hz,1h),5.80(d,j＝14.7hz,1h),1.98(s,2h),1.91(s,1h),1.86
–
1.56(m,9h),1.20
–
1.08(m,12h).esi-ms m/z:487.2[m+h]+,c30h35fn4o.
[0170]
实施例23 (1r,4as,10ar)-n-(6-((4-氯苯基)氨基)嘧啶-4-基)-7-异丙基-1,4a-二甲基-1,2,3,4,4a,9,10,10a-八氢菲-1-甲酰胺的合成(b11)
[0171][0172]
参照实施例11合成化合物7a后，化合物b11的合成参照化合物a1的合成方法，得到白色固体化合物b11，收率为28％，mp：91.3-93.3℃。
[0173]
1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ10.07(s,1h),9.71(s,1h),8.40(s,1h),7.76
–
7.66(m,2h),7.62(s,1h),7.40
–
7.29(m,2h),7.18(d,j＝8.2hz,1h),6.98(d,j＝8.1hz,1h),6.84(s,1h),2.78(dh,j＝14.5,7.7,7.1hz,3h),2.34(d,j＝12.3hz,1h),2.21(d,j＝12.2hz,1h),1.85(d,j＝11.4hz,1h),1.74(t,j＝9.2hz,1h),1.62(dd,j＝22.5,11.2hz,3h),1.24(d,j＝9.9hz,4h),1.15(d,j＝7.1hz,10h).esi-ms m/z:503.2[m+h]+,c30h35cln4o.
[0174]
实施例24 (1r,4as,10ar)-n-(6-氨基嘧啶-4-基)-n-(4-氯苯基)-7-异丙基-1,4a-二甲基-1,2,3,4,4a,9,10,10a-八氢菲-1-甲酰胺的合成(b12)
[0175][0176]
参照实施例11合成化合物7a后，化合物b12的合成参照化合物a1的合成方法，得到白色固体化合物b12，收率为24％，mp：88.2-89.7℃。
[0177]
1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.19(d,j＝6.6hz,1h),7.46(td,j＝5.9,2.6hz,2h),7.21
–
7.08(m,3h),6.96(dd,j＝8.2,2.0hz,1h),6.88(d,j＝6.1hz,2h),6.84(d,j＝2.0hz,1h),5.89(d,j＝11.3hz,1h),2.79(dtd,j＝25.7,13.6,11.5,7.4hz,2h),2.35
–
2.21(m,1h),2.10
–
1.97(m,2h),1.91(s,1h),1.84(s,1h),1.76
–
1.56(m,5h),1.49(d,j＝12.9hz,2h),1.32
–
1.21(m,2h),1.21
–
1.08(m,8h).esi-ms m/z:503.2[m+h]+,c30h35cln4o.
[0178]
实施例25化合物对胶质瘤细胞的抗增殖活性测定
[0179]
实验方法：
[0180]
采用cck-8法探究松香二萜衍生物a1～a12和b1～b12对人胶质瘤细胞t98g、人脑星形胶质母细胞瘤细胞u87mg和人神经胶质细胞u251的抗增殖活性。目前cck-8法(cell counting kit-8)是检测体外细胞增殖和毒性实验最常见的标准方法之一。实验以氟尿嘧
啶(5-fluorouracil,5-fu)、卡莫司汀(carmustine,bcun)和替莫唑胺(temozolomide,tmz)为阳性对照，得到不同的化合物对三种人脑胶质瘤细胞的半数抑制浓度(ic50值)，结果如表1所示。
[0181]
表1目标化合物对不同人脑胶质瘤的抗增殖活性(ic50，μm)
[0182]
[0183]
[0184][0185]
n.d.＝not detected.表示未检测出ic
50
。
[0186]
由表可见，广谱抗肿瘤药物5-fu与bcun对三种胶质瘤细胞t98g、u87mg和u251均未表现出抗增殖活性；而与阳性对照tmz和先导化合物松香酸(aa)、脱氢松香酸(dhaa)的ic50值相比，松香二萜母核与含有不同取代基的n4-苯基嘧啶-4,6-二胺中间体上的仲胺通过缩合反应所得到的衍生物对这三种人脑胶质瘤细胞表现出较好的抗增殖活性，而母核与此类中间体上的伯胺拼合所得的衍生物则对受试细胞几乎没有影响。此外，在这类含4,6-二取代氨基嘧啶类片段的衍生物中，b系列dhaa衍生物比a系列aa衍生物的抗肿瘤活性更强。
[0187]
对于t98g细胞，dhaa衍生物b6、b8、b10和b12的抗增殖活性(ic50值为22.17～71.09μm)远优于阳性药物tmz(ic50＝1477μm)，而tmz与活性最好的化合物b6(ic50＝22.17μm)相比相差了近70倍；此外，aa衍生物a6、a8、a12～a14对t98g细胞也表现出相对较好的活性(ic50值为102.40～235.70μm)，但其活性较弱于相应的dhaa衍生物。对于u251细胞，a和b系列编号为6、8、10、12的化合物均表现出强大的增殖抑制活性(ic50值为11.47～22.56μm)，其中大部分b系列衍生物的活性优于a系列衍生物；而化合物b8对u251细胞的抗肿瘤活性最为突出，其ic50为11.47μm，强于tmz(ic50＝322.60μm)近28倍；此外，经简单修饰的化合物a13和a14也对u251表现出较好的活性(ic50《100μm)。对于u87mg细胞，目标化合物a8、a10、a14、b6、b8、b10和b12均表现出良好的抗细胞增殖活性(ic50值为99.54～295.60μm)，其中化合物b10(ic50＝99.54μm)的活性最强，远优于tmz(ic50》1600μm)的活性。经综合比较，化合物b6、b8、b10和b12对受试的三种人脑胶质瘤细胞均表现出较强的抗增殖活性，并在一定浓度范围内存在剂量依赖性。
[0188]
实施例26化合物抑制t98g细胞迁移测定
[0189]
实验方法：将t98g细胞以5
×
105个/孔的密度接种于6孔板中，并放置在细胞培养箱中培养24h；配置好含不同浓度的化合物(0、5、10、20和40μm)药液；用200μl移液管尖端在单层细胞上进行刮擦划痕并吸弃原培养基，用pbs洗涤以除去掉落的细胞，重复洗涤两次；加入配置好的含不同浓度的化合物药液；在间隔时间为0h和24h时，使用倒置显微镜在每孔多个随机区域(至少三个)中观察并拍摄细胞迁移情况。本实施例以化合物b12为代表进行测试，其余化合物结果与其类似。
[0190]
结果参见图1、图2，由图可见，与溶媒对照组相比，给药组在24h后能明显抑制t98g细胞的迁移，随着给药浓度的升高划痕愈合面积会随之减小，这表明化合物b12以浓度和时间依赖性抑制t98g细胞的迁移。
[0191]
实施例27代表性化合物pka值测定
[0192]
实验方法：配置代表性化合物药物母液(乙腈，1mm，5ml)、乙腈水溶液(v乙腈：v水＝3:7，50ml)、kcl溶液(水，0.15m，10ml)、koh溶液(v乙腈：v水＝3:7，60mm，10ml)、hcl溶液
(v乙腈：v水＝3:7，100mm，10ml)以备用；向15ml烧杯中加入上述配置的乙腈水溶液10ml，使用ph计测定其ph，待数值稳定后记录；向该溶液加入1ml药物母液，测定ph并记录，用无水乙醇浸泡探头30min；重新取10ml乙腈水溶液至25ml烧杯，测定其ph值后，加入1ml kcl溶液，搅拌均匀后测定ph；使用100mm hcl溶液将ph调至2.0，再加入1ml药物母液，待溶液充分搅拌均匀后，使用60mm koh溶液缓慢滴定上述溶液，记录ph值的变化；实验数据通过origin 2021软件处理和绘制。以化合物b6、b8、b10、b12为代表进行测试，其余化合物结果类似。
[0193]
结果参见表2和图3，可见，代表性化合物b6、b8、b10和b12的pka为7.17～7.35，均在理想参数范围内，根据lipinski’s五原则，能够提高bbb渗透性的小分子化合物的pka需在6《pka《10.5范围内，而pka《8的化合物能成为p-糖蛋白(p-gp)底物的可能性极小，表明了这些目标化合物可能具有较好的血脑屏障通透性以进入大脑发挥药效。
[0194]
表2代表性化合物的pka
[0195]
compoundsb6b8b10b12pka7.357.347.357.17
[0196]
上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。