淫羊藿苷用于保护激素性股骨头坏死蛋白质模型构建方法与流程

本发明涉及中药淫羊藿用途，尤其涉及利用中药淫羊藿中的有效药理成分淫羊藿苷用于保护激素性股骨头坏死的蛋白质模型构建。

背景技术：

1、股骨头坏死是骨科常见病、疑难病，是青壮年致残的常见原因。随着糖皮质激素在临床的广泛应用，激素性股骨头坏死的发病率逐年升高，其发病快，病程短，发病人群多为年轻人，对社会的危害程度非常大。近年来研究提示骨微血管内皮细胞损伤及功能障碍在激素性股骨头坏死的发生发展中具有重要作用，股骨头坏死根本原因是股骨头内微循环障碍，由多种细胞组成调控网络维持股骨头内微环境的平衡及稳态，其中血管内皮细胞起到重要的作用，具有物质交换、传递和合成各种血管活性物质、维持血管的舒缩状态、防止血小板粘着聚集及抗血栓等多种功能。血管内皮细胞受各种病理刺激后，导致血管内皮损伤及血管渗透性增高是造成激素性股骨头坏死的重要影响因素。

2、目前激素性股骨头坏死患者多为年轻人，一旦发生股骨头坏死，临床缺乏确实有效的药物治疗，病情进展到终末期，不得不接受全髋关节置换术，国内外大量研究均证实年轻患者实行全髋关节置换术的效果不佳，绝大多数患者面临多次翻修的后果，给患者造成极大的痛苦及经济负担，因此对此类患者寻求切实有效的预防、干预措施和保存股骨头治疗很有必要。

3、现有淫羊藿苷是中药淫羊藿的有效药理成分，具有抗炎、抗骨质疏松、促血管生成、改善微循环障碍等作用。研究发现淫羊藿具有抑制活性氧对血管内皮细胞的氧化作用，增加血管内皮细胞对乏氧损伤的抵抗，及上调一氧化氮对抗血管的收缩，增加骨内血流量等广泛的药理作用。实验研究发现淫羊藿对不同类型骨质疏松大鼠模型均有骨代谢调节作用，其药理机制可能与升高护骨素、骨形成蛋白、骨桥蛋白、转化生长因子等相关成骨基因的表达促进成骨细胞的分化，并抑制肿瘤坏死因子、白细胞介素6、dickkopf-1蛋白的表达从而减少骨吸收。而蛋白质是自然界所有一切生命活动的执行者和体现者，其组成庞大而复杂却又有相对独立的代谢过程，在生物机体内部具有对外界因素反应的能力、其存在广泛的相互作用。为此本申请采用淫羊藿中的淫羊藿苷预处理骨微血管内皮细胞，探讨了145种细胞因子在激素诱导损伤骨微循环内皮细胞的表达变化，经实验结果证实淫羊藿苷具有预防及治疗激素性股骨头坏死的作用，为临床应用淫羊藿苷防治激素性股骨头坏死提供了实验依据。

技术实现思路

1、本申请实施例通过提供淫羊藿苷用于保护激素性股骨头坏死蛋白质模型构建方法，淫羊藿苷可以明显调节血管形成、炎症过程、和凋亡过程中关键的细胞内信号传导因子的表达变化，证实淫羊藿苷具有预防及治疗激素性股骨头坏死的的作用，为临床应用淫羊藿苷防治激素性股骨头坏死提供了实验依据。

2、本申请实施例提供了淫羊藿苷用于保护激素性股骨头坏死蛋白质模型构建方法，首先对人股骨头bmecs进行分离、鉴定以及培养，获得待检测的人股骨头骨微循环内皮细胞作为检测样品，紧接着采用蛋白质芯片对培养的人股骨头骨微循环内皮细胞进行检测；通过蛋白芯片检测相关蛋白表达，经由图像分析和计算机软件对蛋白质图像进行分析，得到以下结果：淫羊藿苷干预组与单纯激素损伤组比较有34个差异蛋白点，表达下调18个，表达上调16个；单纯激素损伤组和正常对照组比较有28个差异蛋白质点，表达下调19个，表达上调9个。其中与血管形成过程相关的明显表达蛋白质有vegf、g-csf、akt、ena-78、i-tac；其中与炎症过程过程相关的明显表达蛋白质有il-4、mcp-2、tnf-α；与细胞凋亡过程相关的明显表达蛋白质有bax、cleaved-caspase 3、cytoc、hsp70、bcl-w，为淫羊藿苷保护激素性股骨头坏死蛋白质模型的构建提供了依据。

3、进一步的采用淫羊藿苷预处理骨微血管内皮细胞，运用蛋白质组学的方法，研究血管形成、炎症过程、和凋亡、坏死过程中关键的细胞内信号传导因子的表达变化，进一步在蛋白质水平探索淫羊藿苷保护股骨头坏死的作用机制，为淫羊藿苷更好地应用于缺血性股骨头坏死的临床治疗提供理论基础。

4、本申请实施例中提供的一个或多个技术方案，至少具有如下技术效果或优点：淫羊藿苷可以明显调节血管形成、炎症过程、和凋亡过程中关键的细胞内信号传导因子的表达变化，证实淫羊藿苷具有预防及治疗激素性股骨头坏死的的作用，为临床应用淫羊藿苷防治激素性股骨头坏死提供了实验依据。

技术特征：

1.淫羊藿苷用于保护激素性股骨头坏死蛋白质模型构建方法，其特征在于：具体包括以下过程：

2.如权利要求1所述的淫羊藿苷用于保护激素性股骨头坏死蛋白质模型构建方法，其特征在于：所述蛋白芯片检测骨微循环内皮细胞蛋白表达，通过图像分析和计算机对蛋白质图像进行分析，其中淫羊藿苷干预组与单纯激素损伤组比较有34个差异蛋白点，表达下调18个，表达上调16个；单纯激素损伤组和正常对照组比较有28个差异蛋白质点，表达下调19个，表达上调9个。

技术总结
本发明公开了淫羊藿苷用于保护激素性股骨头坏死蛋白质模型构建方法，包括以下过程：对人股骨头BMECs进行分离、鉴定以及培养，获得待检测样品；接着采用蛋白质芯片对样品进行检测；通过蛋白芯片检测蛋白表达，经由图像分析和计算机对蛋白质图像进行分析，得到淫羊藿苷与血管形成过程相关的明显表达蛋白质有VEGF、G‑CSF、AKT、ENA‑78、I‑TAC；与炎症过程相关的明显表达蛋白质有IL‑4、MCP‑2、TNF‑α；与细胞凋亡过程相关的明显表达蛋白质有Bax、cleaved‑caspase 3、cytoC、HSP70、Bcl‑w；淫羊藿苷可以明显调节血管形成、炎症过程、和凋亡过程中关键的细胞内信号传导因子的表达变化，证实淫羊藿苷具有预防及治疗激素性股骨头坏死的的作用，为临床应用淫羊藿苷防治激素性股骨头坏死提供了实验依据。

技术研发人员：张启栋,郭万首,王卫国,丁冉,黄诚
受保护的技术使用者：中日友好医院（中日友好临床医学研究所）
技术研发日：
技术公布日：2024/2/6