一种分离的抗原结合蛋白及其用途的制作方法

本技术涉及生物医药领域，具体的涉及一种分离的抗原结合蛋白及其用途。

背景技术：

1、肿瘤是一种严重威胁人类健康的疾病，其中肝癌是危害很广泛的一种恶性肿瘤。由乙肝病毒引起的肝癌具有潜伏期长的特点，一旦发现往往已至晚期，而且发病后进展快速、治疗预后差。

2、磷脂酰肌醇蛋白聚糖3(glypican3,gpc3)是一种细胞膜表面的硫酸乙酰肝素蛋白多糖，存在于多种肿瘤之中，在肝癌中尤为常见。近年来，随着分子生物学、基因组学及蛋白质组学的进展，陆续问世了一系列的分子靶向药物，用于肝癌的救治。分子靶向治疗是以肿瘤细胞过度表达的某些标志性分子为靶点，选择针对性的阻断剂，进行有效地干预，从而达到抑制肿瘤生长、进展及转移的效果。相对于手术、放疗、化疗三大传统治疗手段，分子靶向治疗能高效并选择性地杀伤肿瘤细胞，减少对正常组织的损伤。但是目前利用分子靶向技术进行肿瘤治疗的效果仍不尽人意，有较多需要改进之处。

技术实现思路

1、本技术提供一种分离的抗原结合蛋白，其包含氨基酸序列如seq id no:53所示的vh中的至少一个cdr；且其包含氨基酸序列如seq id no:49所示的vl中的至少一个cdr。

2、在某些实施方式中，所述分离的抗原结合蛋白具有下述性质中的一种或多种：

3、1)能够以6×10-9m或更低的kd与gpc3蛋白相结合，其中所述kd值通过octet测定；

4、2)在facs测定中，能够特异性结合hepg2细胞和/或huh7细胞表面的gpc3蛋白；和，

5、3)能够抑制肿瘤生长和/或肿瘤细胞增殖。

6、在某些实施方式中，所述gpc3蛋白包含人gpc3蛋白。

7、在某些实施方式中，所述人gpc3蛋白包含如seq id no:74所示的氨基酸序列。

8、在某些实施方式中，所述肿瘤包括gpc3阳性的肿瘤。

9、在某些实施方式中，所述gpc3阳性的肿瘤包括肝癌。

10、在某些实施方式中，所述分离的抗原结合蛋白包含氨基酸序列如seq id no:53所示的vh中的hcdr1。

11、在某些实施方式中，所述分离的抗原结合蛋白包含氨基酸序列如seq id no:53所示的vh中的hcdr2。

12、在某些实施方式中，所述分离的抗原结合蛋白包含氨基酸序列如seq id no:53所示的vh中的hcdr3。

13、在某些实施方式中，所述hcdr1包含x1yx2mh所示的氨基酸序列，其中x1可以为d或a，x2可以为a或e。

14、在某些实施方式中，所述hcdr1包含seq id no:4和12中任一项所示的氨基酸序列。

15、在某些实施方式中，所述hcdr2包含seq id no:20所示的氨基酸序列。

16、在某些实施方式中，所述hcdr2包含seq id no:5、10和13中任一项所示的氨基酸序列。

17、在某些实施方式中，所述hcdr3包含x1x2x3x4x5x6x7x8x9x10x11所示的氨基酸序列，其中x1可以为d或t，x2可以为h或r，x3可以为t或f，x4可以为i或y，x5可以为g或s，x6可以为v或y，x7可以为g或a，x8可以为a、y或h，x9可以为f或空白，x10可以为d或空白，x11可以为i或空白。

18、在某些实施方式中，所述hcdr3包含seq id no:6、11和14中任一项所示的氨基酸序列。

19、在某些实施方式中，所述分离的抗原结合蛋白包含氨基酸序列如seq id no:49所示的vl中的lcdr1。

20、在某些实施方式中，所述分离的抗原结合蛋白包含氨基酸序列如seq id no:49所示的vl中的lcdr2。

21、在某些实施方式中，所述分离的抗原结合蛋白包含氨基酸序列如seq id no:49所示的vl中的lcdr3。

22、在某些实施方式中，所述lcdr1包含x1x2x3x4sx5vx6x7x8x9yx10x11x12x13所示的氨基酸序列，其中x1可以为t或r，x2可以为g或s，x3可以为t或s，x4可以为s或q，x5可以为d或l，x6可以为g或h，x7可以为g或s，x8可以为y或n，x9可以为n或g，x10可以为v或t，x11可以为s或y，x12可以为空白或l，x13可以为空白或h。

23、在某些实施方式中，所述lcdr1包含seq id no:1和7中任一项所示的氨基酸序列。

24、在某些实施方式中，所述lcdr2包含x1x2sx3rx4s所示的氨基酸序列，其中x1可以为d或k，x2可以为v或g，x3可以为n、y或q，x4可以为p或g。

25、在某些实施方式中，所述lcdr2包含seq id no:2、8和15中任一项所示的氨基酸序列。

26、在某些实施方式中，所述lcdr3包含x1x2x3x4x5x6x7x8x9x10所示的氨基酸序列，其中x1可以为s或g，x2可以为s或q，x3可以为y或s，x4可以为a或g，x5可以为s或l，x6可以为g或t，x7可以为s或p，x8可以为t或p，x9可以为l或t，x10可以为v或空白。

27、在某些实施方式中，所述lcdr3包含seq id no:3和9中任一项所示的氨基酸序列。

28、在某些实施方式中，所述分离的抗原结合蛋白包括抗体或其抗原结合片段。

29、在某些实施方式中，所述抗原结合片段包括fab，fab’，f(ab)2、fv片段、f(ab’)2，scfv，di-scfv和/或dab。

30、在某些实施方式中，所述分离的抗原结合蛋白的所述vl包括框架区l-fr1，l-fr2，l-fr3，和l-fr4。

31、在某些实施方式中，所述l-fr1的c末端与所述lcdr1的n末端直接或间接相连，且所述l-fr1包含seq id no:22和30中任一项所示的氨基酸序列。

32、在某些实施方式中，所述l-fr1包含seq id no:22和30中任一项所示的氨基酸序列。

33、在某些实施方式中，所述l-fr2位于所述lcdr1与所述lcdr2之间，且所述l-fr2包含seq id no:23和31中任一项所示的氨基酸序列。

34、在某些实施方式中，所述l-fr2包含seq id no:23和31中任一项所示的氨基酸序列。

35、在某些实施方式中，所述l-fr3位于所述lcdr2与所述lcdr3之间，且所述l-fr3包含seq id no:24和32中任一项所示的氨基酸序列。

36、在某些实施方式中，所述l-fr3包含seq id no:24和32中任一项所示的氨基酸序列。

37、在某些实施方式中，所述l-fr4的n末端与所述lcdr3的c末端相连，且所述l-fr4包含seq id no:25和33中任一项所示的氨基酸序列。

38、在某些实施方式中，所述l-fr4包含seq id no:25和33中任一项所示的氨基酸序列。

39、在某些实施方式中，所述分离的抗原结合蛋白的所述vl包含seq id no:46-48中任一项所示的氨基酸序列。

40、在某些实施方式中，所述分离的抗原结合蛋白包括抗体轻链恒定区，且所述抗体轻链恒定区包括人igκ恒定区。

41、在某些实施方式中，所述抗体轻链恒定区包含seq id no:54所示的氨基酸序列。

42、在某些实施方式中，所述分离的抗原结合蛋白包含抗体轻链lc，且所述lc包含seqid no:56-58中任一项所示的氨基酸序列。

43、在某些实施方式中，所述分离的抗原结合蛋白的所述vh包括框架区h-fr1，h-fr2，h-fr3，和h-fr4。

44、在某些实施方式中，所述h-fr1的c末端与所述hcdr1的n末端直接或间接相连，且所述h-fr1包含seq id no:26和34中任一项所示的氨基酸序列。

45、在某些实施方式中，所述h-fr1包含seq id no:26和34中任一项所示的氨基酸序列。

46、在某些实施方式中，所述h-fr2位于所述hcdr1与所述hcdr2之间，且所述h-fr2包含seq id no:27和35中任一项所示的氨基酸序列。

47、在某些实施方式中，所述h-fr2包含seq id no:27和35中任一项所示的氨基酸序列。

48、在某些实施方式中，所述h-fr3位于所述hcdr2与所述hcdr3之间，且所述h-fr3包含seq id no:28和36中任一项所示的氨基酸序列。

49、在某些实施方式中，所述h-fr3包含seq id no:28和36中任一项所示的氨基酸序列。

50、在某些实施方式中，所述h-fr4的n末端与所述hcdr3的c末端相连，且所述h-fr4包含seq id no:29和37中任一项所示的氨基酸序列。

51、在某些实施方式中，所述h-fr4包含seq id no:29和37中任一项所示的氨基酸序列。

52、在某些实施方式中，所述分离的抗原结合蛋白的所述vh包含seq id no:50-52中任一项所示的氨基酸序列。

53、在某些实施方式中，所述分离的抗原结合蛋白包括抗体重链恒定区，且所述抗体重链恒定区源自人igg重链恒定区。

54、在某些实施方式中，所述分离的抗原结合蛋白包括抗体重链恒定区，且所述抗体重链恒定区源自人igg1重链恒定区。

55、在某些实施方式中，所述抗体重链恒定区包含seq id no:55所示的氨基酸序列。

56、在某些实施方式中，所述分离的抗原结合蛋白包含抗体重链hc，且所述hc包含seqid no:59-61中任一项所示的氨基酸序列。

57、本技术还提供分离的一种或多种核酸分子，其编码本技术所述的分离的抗原结合蛋白。

58、本技术还提供一种载体，其包含本技术所述的核酸分子。

59、本技术还提供一种细胞，其包含本技术所述的核酸分子或本技术所述的载体。

60、本技术还提供制备本技术所述的分离的抗原结合蛋白的方法，所述方法包括在使得所述分离的抗原结合蛋白表达的条件下，培养本技术所述的细胞。

61、本技术还提供一种药物组合物，其包含本技术所述的分离的抗原结合蛋白、本技术所述的核酸分子、本技术所述的载体和/或本技术所述的细胞，以及任选地药学上可接受的佐剂。

62、本技术还提供本技术所述的分离的抗原结合蛋白、本技术所述的核酸分子、本技术所述的载体、本技术所述的细胞和/或本技术所述的药物组合物在制备药物中的用途，所述药物用于预防、缓解和/或治疗肿瘤。

63、本技术还提供本技术所述的分离的抗原结合蛋白、本技术所述的核酸分子、本技术所述的载体、本技术所述的细胞和/或本技术所述的药物组合物，其用于预防、缓解和/或治疗肿瘤。

64、本技术还提供预防、缓解或治疗肿瘤的方法，所述方法包括向有需要的受试者施用本技术所述的分离的抗原结合蛋白、本技术所述的核酸分子、本技术所述的载体、本技术所述的细胞和/或本技术所述的药物组合物。

65、本技术还提供检测样品中gpc3的方法，所述方法包括施用本技术所述的分离的抗原结合蛋白。

66、本领域技术人员能够从下文的详细描述中容易地洞察到本技术的其它方面和优势。下文的详细描述中仅显示和描述了本技术的示例性实施方式。如本领域技术人员将认识到的，本技术的内容使得本领域技术人员能够对所公开的具体实施方式进行改动而不脱离本技术所涉及发明的精神和范围。相应地，本技术的附图和说明书中的描述仅仅是示例性的，而非为限制性的。