RAD51抑制剂化合物的晶型及其应用的制作方法

本发明涉及医药领域，特别是涉及作为rad51抑制剂的化合物的晶型，其相应的制备方法、包含所述晶型的药物组合物，以及所述晶型或包含所述晶型的药物组合物在制备用于预防或治疗相关药理学病症的药物中的用途。

背景技术：

1、rad51是真核生物基因。这个基因编码的蛋白质是rad51蛋白家族的一员，它能够帮助修复dna双链断裂。rad51家族成员与细菌reca、古菌rada和酵母rad51同源。从酵母到人类，这种蛋白质在大多数真核细胞中高度保守。在人类中，rad51是一种含有339个氨基酸组成的蛋白质，拥有dna依赖性atp激酶活性。在dna双链断裂(double strand breaks,dsbs)修复过程中，它对同源重组起着重要作用。rad51参与将断裂序列与未受损的同源序列之间的相互转移，使受损区域得以重新合成。

2、dna损伤反应对于维持细胞基因组稳定性和细胞存活发挥着重要作用。dna双链断裂是dna损伤最严重的形式。同源重组修复是体内参与dsbs损伤修复的重要机制之一，其中rad51是体内参与同源重组性dna修复的关键因子。rad51在人类的多种肿瘤组织中高表达，如乳腺癌、非小细胞肺癌、前列腺癌等，与肿瘤的转移和恶化相关(klein et al.,dnarepair(amst).2008may 3；7(5):686-693)。如何有效下调肿瘤组织中的rad51的水平,降低肿瘤细胞的dna损伤修复能力，从而提高肿瘤治疗的疗效具有潜在的临床应用价值。

3、同源重组在dna损伤修复中具有多重作用，包括修复dna双链断裂以及恢复由dna交联剂引起的dna复制阻断的损伤。同源重组通过定位dna的同源片段并从同源模板中复制缺失的遗传信息来修复dna双链断裂。大量研究表明，同源重组在维持基因组稳定性方面至关重要。研究表明，细胞中促进同源重组修复的蛋白质的缺陷与某些dna损伤治疗的敏感性相关。这种敏感作用对dna交联化疗药物和电离辐射尤为显著(takata et al.,mol cellbiol.2001apr；21(8):2858-2866；godthelp et al.,nucleic acids res.2002may15；30(10):2172-2182)。

4、最近有研究小组证明，可以通过对同源重组的部分抑制进一步提高细胞对dna损伤疗法的敏感性。比如，使用对应于另一个旁系同源蛋白的合成肽可以抑制xrcc3(rad51的旁系同源蛋白)。该合成肽使得中华仓鼠卵巢(cho)细胞对顺铂更加敏感，并且抑制了dna损伤所导致的rad51foci的形成(connell et al.,cancer res.2004may 1；64(9):3002-3005)。

5、因此，鉴于dna同源重组修复的相关蛋白的缺陷可以提高细胞对dna损伤治疗的敏感性，需要开发能够抑制rad51活性的小分子。目前cyteir therapeutics,inc.发表了三篇有关rad51抑制剂的化合物专利申请(wo2019014315a1、wo2019051465a1和wo2020186006a1)。

技术实现思路

1、pct/cn2021/076939(申请日2021年2月19日)描述了反式-n-[4-[5-[2-(环丙基磺酰亚胺基)]-4-[(5-氟-2-吡啶基)氨基]苯基]噻唑-2-基]环己基]氨基甲酸异丙酯(化合物(ii))

2、

3、本发明提供了理化性质或药学性质优异的化合物(ii)的晶型，及其制备方法。

4、本发明提供了化合物(ii)的晶型i，所述晶型i以衍射角2θ表示的x-射线粉末衍射图谱，在5.72±0.2°、6.94±0.2°、7.67±0.2°、9.51±0.2°、10.22±0.2°、11.66±0.2°、18.31±0.2°、18.90±0.2°、22.20±0.2°处有衍射峰。

5、在可选实施方案中，所述晶型i，以衍射角2θ表示的x-射线粉末衍射图谱，在5.72±0.2°、6.94±0.2°、7.67±0.2°、9.51±0.2°、10.22±0.2°、11.66±0.2°、15.20±0.2°、15.37±0.2°、16.46±0.2°、18.31±0.2°、18.90±0.2°、20.54±0.2°、22.20±0.2°、22.71±0.2°、27.48±0.2°处有衍射峰。

6、在可选实施方案中，所述晶型i，以衍射角2θ表示的x-射线粉末衍射图谱，在5.72±0.2°、6.94±0.2°、7.67±0.2°、9.51±0.2°、10.22±0.2°、11.66±0.2°、15.20±0.2°、15.37±0.2°、16.46±0.2°、16.64±0.2°、18.31±0.2°、18.90±0.2°、20.54±0.2°、22.20±0.2°、22.71±0.2°、24.57±0.2°、25.33±0.2°、26.07±0.2°、26.21±0.2°、26.71±0.2°、27.48±0.2°处有衍射峰。

7、在可选实施方案中，所述晶型i，以衍射角2θ表示的x-射线粉末衍射图谱，在5.72±0.2°、6.94±0.2°、7.67±0.2°、9.51±0.2°、10.22±0.2°、11.66±0.2°、13.55±0.2°、13.94±0.2°、15.20±0.2°、15.37±0.2°、16.46±0.2°、16.64±0.2°、17.52±0.2°、18.00±0.2°、18.31±0.2°、18.90±0.2°、20.54±0.2°、20.98±0.2°、21.67±0.2°、22.20±0.2°、22.71±0.2°、24.57±0.2°、25.33±0.2°、26.07±0.2°、26.21±0.2°、26.71±0.2°、26.92±0.2°、27.48±0.2°、28.11±0.2°、31.17±0.2°、33.82±0.2°处有衍射峰。

8、在可选实施方案中，所述晶型i，以衍射角2θ表示的x-射线粉末衍射图谱，在5.72±0.2°、6.94±0.2°、7.67±0.2°、9.51±0.2°、10.22±0.2°、11.66±0.2°、13.03±0.2°、13.55±0.2°、13.94±0.2°、15.20±0.2°、15.37±0.2°、15.90±0.2°、16.46±0.2°、16.64±0.2°、17.52±0.2°、18.00±0.2°、18.31±0.2°、18.90±0.2°、20.54±0.2°、20.98±0.2°、21.34±0.2°、21.67±0.2°、22.20±0.2°、22.71±0.2°、23.53±0.2°、24.57±0.2°、25.33±0.2°、26.07±0.2°、26.21±0.2°、26.71±0.2°、26.92±0.2°、27.48±0.2°、28.11±0.2°、29.15±0.2°、29.46±0.2°、30.31±0.2°、31.17±0.2°、32.55±0.2°、33.82±0.2°、34.62±0.2°、35.84±0.2°处有衍射峰。

9、在可选实施方案中，所述晶型i以衍射角2θ表示的x-射线粉末衍射图谱基本上如图1所示。

10、在可选实施方案中，所述晶型i通过单晶衍射结构分析确定属于三斜晶系，p1空间群，其晶胞参数和晶胞体积为：α＝71.47(3)°，β＝71.36(3)°，γ＝80.56(3)°，

11、本发明还提供了制备前述任一项晶型i的方法一，包括：将化合物(ii)加入溶剂(i)中，室温溶解或加热溶解，溶清后，冷却析晶，即得。

12、在可选实施方案中，所述方法一中溶剂(i)选自乙醇、正丙醇、异丙醇、2-丁酮、乙酸乙酯、乙酸甲酯、2-甲基四氢呋喃、四氢呋喃、乙腈、4-甲基-2-戊酮、乙酸和丙酸中的一种或多种，优选乙酸乙酯、乙酸甲酯、正丙醇、2-甲基四氢呋喃、四氢呋喃或2-丁酮中的一种或多种，更优选自乙腈、乙酸乙酯、正丙醇或2-丁酮中的一种或多种。

13、在可选实施方案中，所述方法一中溶剂(i)的体积(ml)为化合物(ii)重量(g)的5～150倍，优选10～50倍，更优选20～35倍。

14、在可选实施方案中，所述方法一中采用加热溶解的方式，所述加热温度为50～80℃，优选60～80℃，例如可以是60℃、70℃或77℃。

15、本发明还提供了制备前述任一项晶型i的方法二，包括：将化合物(ii)加入良溶剂中，室温溶解或加热溶解后，再向其中加入反溶剂，析出晶体，即得。

16、在可选实施方案中，所述方法二中的良溶剂选自四氢呋喃、二氯甲烷、正丙醇、乙酸和丙酸中的一种或多种，优选四氢呋喃或二氯甲烷。

17、在可选实施方案中，所述方法二中的反溶剂选自水、异丙醚、甲基叔丁醚、乙醚、乙酸异丙酯、乙酸丁酯、环己烷和甲苯中的一种或多种，优选甲基叔丁醚、环己烷或甲苯中的一种或多种。

18、在可选实施方案中，所述方法二中良溶剂的体积(ml)为化合物(ii)重量(g)的1～50倍，优选5～20倍，更优选10～15倍；所述良溶剂与反溶剂的体积比为1：(0.5～20)，优选1：(0.5～10)，更优选1：(0.5～7)。

19、在可选实施方案中，所述方法二中采用室温溶解的方式。

20、本发明还涉及一种药物组合物，其包含前述任一项所述的化合物(ii)的晶型i，以及药学上可接受的辅料。

21、本发明还涉及由前述任一项所述的化合物(ii)的晶型i制备而成的药物组合物。

22、本发明还涉及前述任一项所述的化合物(ii)的晶型i在制备用于预防或治疗已知或可显示抑制rad51会产生有益效应的疾病或病症的药物的用途。

23、本分明还涉及一种预防或治疗已知或可显示抑制rad51会产生有益效应的疾病或病症的方法，其包括给予所需的个体治疗有效量的前述任一项所述的化合物(ii)的晶型i，或包含其的药物组合物。

24、本发明所述的已知或可显示抑制rad51会产生有益效应的疾病或病症包括但不限于肿瘤(如淋巴瘤、乳腺癌、非小细胞肺癌、前列腺癌等)和自身免疫病(如风湿性关节炎、炎症性肠炎和系统性红斑狼疮)等。

25、本发明的药物组合物中含有的化合物(ii)的晶型i的治疗有效量选自0.01mg/kg到50mg/kg体重，以单独或分开剂量的形式。

26、本发明的化合物(ii)晶型i的典型给药途径包括但不限于口服、直肠、局部、吸入、肠胃外、舌下、阴道内、鼻内、眼内、腹膜内、肌内、皮下、静脉内给药。

27、在可选的实施方案中，药物组合物是口服形式。对于口服给药，可以通过将活性化合物与本领域熟知的药学上可接受的辅料混合，来配制该药物组合物。这些辅料能使本发明的化合物被配制成片剂、丸剂、锭剂、糖衣剂、胶囊剂、液体、凝胶剂、浆剂、悬浮剂等，用于对患者的口服给药。

28、可以通过常规的混合、填充或压片方法来制备固体口服组合物。例如，可通过下述方法获得：将所述的活性化合物与固体辅料混合，任选地碾磨所得的混合物，如果需要则加入其它合适的辅料，然后将该混合物加工成颗粒，得到了片剂或糖衣剂的核心。适合的辅料包括但不限于：粘合剂、稀释剂、崩解剂、润滑剂、助流剂、甜味剂或矫味剂等。

29、术语定义和说明

30、除非另有说明，本发明中所用的术语具有下列含义，本发明中记载的术语定义，包括其作为实例的定义、示例性的定义、优选的定义、表格中记载的定义、实施例中的定义等，可以彼此之间任意组合和结合。一个特定的术语在没有特别定义的情况下不应该被认为是不确定的或不清楚的，而应该按照本领域普通的含义去理解。当本文中出现商品名时，意在指代其对应的商品或其活性成分。

31、术语“约”在本发明中用于指近似地、在……左右、大略地或大约。当术语“约”与数字范围结合使用时，通过扩大所陈述的数字范围的上下限值来对该范围来进行修饰。除非另作说明，否则术语“约”在本文中用于以10％偏差的数字值修饰所陈述的值的上限和下限。

32、除非另作说明，否则术语“包括(comprise)”、“含有(comprise)”或“包含(comprise)”及其英文变体例如comprises或comprising应理解为开放的、非排他性的意义，即“包括但不限于”。

33、本发明中提到的“可选实施方案”或“实施方案”是指在至少一实施方案中包括与该实施方案所述的相关的具体参考要素、结构或特征。因此，本发明中不同位置出现的短语“可选实施方案”或“实施方案”不必全部指同一实施方案。此外，具体要素、结构或特征可以任何适当的方式在一个或多个实施方案中结合。

34、本发明所述室温是指20±5℃。

35、本发明中所述的范围“m～n”表示m到n之间的任意实数组合的缩略表示，其中m和n都是实数。例如，数值范围“20～35”表示本文中已经列出了其中的20、20.5、21、21.5、22、22.5、23、23.5、24、24.5、25、25.5、26、26.5、27、27.5、28、28.5、29、29.5、30、30.5、31、31.5、32、32.5、33、33.5、34、34.5或35，“20～35”只是这些数值组合的缩略表示。

36、本发明中所述的“x-射线粉末衍射图谱”为使用cu-kα辐射测量得到。

37、本发明中所述的“x-射线粉末衍射图谱或xrpd图谱”是指根据布拉格公式2d sinθ＝nλ(式中，d为晶面间距，θ为衍射角，λ为入射x射线的波长，衍射的级数n为任何正整数，一般取一级衍射峰，n＝1)，当x射线以掠角θ(入射角的余角，又称为布拉格角)入射到晶体或部分晶体样品的某一具有d点阵平面间距的原子面上时，就能满足布拉格方程，从而测得了这组x射线粉末衍射图。

38、对于同种化合物的同种晶型，其xrpd图谱的峰位置在整体上具有相似性，相对强度误差可能较大。还应指出的是，在混合物的鉴定中，由于含量下降等因素会造成部分衍射线的缺失，此时，无需依赖高纯试样中观察到的全部衍射峰，甚至一个衍射峰也可能对给定的晶体而言是特征性的。

39、本发明中所述的“2θ或2θ角度”是指衍射角，θ为布拉格角，单位为°或度。

40、本领域技术人员认识到对于同一化合物的给定结晶形式的xrpd峰位置和/或强度的测量数据将在误差范围内变化。本发明中的2θ值涵盖了适当的误差范围，通常该误差范围是由“±”表示。例如，本发明中用具体角度值±0.2°表示的2θ值即代表其中的具体角度值具有±0.2°的误差浮动范围，即5.72±0.2°2θ表示2θ在5.52至5.92范围内。取决于样品制备技术、应用于仪器的校准技术、人类操作偏差等，本领域技术人员认识到对于xrpd衍射角的适当的误差范围可为±0.2°、±0.15°、±0.1°、±0.05°或更小，且峰强度允许一定的可变性。当用于描述xrpd图时，术语“基本上相同”或“基本上如……所示”是指包括至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％或至少99％的衍射角在±0.2°2θ的标准偏差范围内的衍射峰的图。

41、本发明中所述干燥温度一般为20℃～100℃，优选25℃-70℃，更优选40℃～60℃，可以常压干燥，也可以减压干燥。优选地，干燥是在减压下干燥。

42、术语“药学上可接受的辅料”是指对有机体无明显刺激作用，而且不会损害该活性化合物的生物活性及性能的那些辅料。合适的辅料是本领域技术人员熟知的，例如碳水化合物、蜡、水溶性和/或水可膨胀的聚合物、亲水性或疏水性材料、明胶、油、溶剂、水等。

43、术语“个体”是哺乳动物。在部分实施方案中，所述个体是小鼠。在部分实施方案中，所述个体是人。

44、术语“治疗”一般是指获得需要的药理和/或生理效应。该效应部分或完全稳定或治愈疾病和/或由于疾病产生的副作用，可以是治疗性的。本发明中的“治疗”涵盖了对患者疾病的任何治疗，包括：(a)抑制疾病的症状，即阻止其发展；或(b)缓解疾病的症状，即导致疾病或症状退化。

45、术语“有效量”意指(i)治疗或预防特定疾病、病况或障碍，(ii)减轻、改善或消除特定疾病、病况或障碍的一种或多种症状，或(iii)预防或延迟本文中所述的特定疾病、病况或障碍的一种或多种症状发作的本发明化合物的用量。构成“治疗有效量”的本发明化合物的量取决于该化合物、疾病状态及其严重性、给药方式以及待被治疗的哺乳动物的年龄而改变，但可例行性地由本领域技术人员根据其自身的知识及本公开内容而确定。

46、术语“施用”表示使用本领域技术人员已知的多种方法和递送系统中的任一种，向主体物理引入包含治疗剂的组合物。

47、本发明的晶型也可以是同位素标记的。本发明还包括与本文中记载的那些相同的，但一个或多个原子被原子量或质量数不同于自然中通常发现的原子量或质量数的原子置换的同位素标记的本发明化合物。可结合到本发明化合物的同位素的实例包括氢、碳、氮、氧、磷、硫、氟、碘和氯的同位素，诸如分别为2h、3h、11c、13c、14c、13n、15n、15o、17o、18o、31p、32p、35s、18f、123i、125i和36cl等。

48、某些同位素标记的本发明化合物(例如用3h及14c标记的那些)可用于化合物和/或底物组织分布分析中。氚化(即3h)和碳-14(即14c)同位素对于由于它们易于制备和可检测性是尤其优选的。正电子发射同位素，诸如15o、13n、11c和18f可用于正电子发射断层扫描(pet)研究以测定底物占有率。通常可以通过与公开于下文的方案和/或实施例中的那些类似的下列程序，通过同位素标记试剂取代未经同位素标记的试剂来制备同位素标记的本发明化合物。

49、此外，用较重同位素(诸如氘(即2h))取代可以提供某些由更高的代谢稳定性产生的治疗优点(例如增加的体内半衰期或降低的剂量需求)，并且因此在某些情形下可能是优选的，其中氘取代可以是部分或完全的，部分氘取代是指至少一个氢被氘取代。本发明实验所用仪器的测试条件：

50、1、单晶x-射线结晶学测量

51、(1)设备名称：单晶衍射仪

52、检测器型号：bruker d8 advance

53、光源：ga kα

54、波长：1.34139

55、(2)设备名称：偏振光显微镜

56、仪器型号：奥林巴斯bx53

57、光源：led

58、目镜倍数：10倍

59、2、x-射线粉末衍射谱(x-ray powder diffraction,xrpd)

60、仪器型号：bruker d8 focus

61、射线：cu kα，kα11.54060；kα21.54439

62、kα1/kα2：2

63、狭缝(°)：2.5

64、扫描方式：θ/2θ，扫描范围：3-40°

65、停留时间(秒)：0.12

66、扫描步长(°2θ)：0.01

67、电压：40kv，电流：40ma

68、本发明提供的化合物(ii)的晶型i纯度高、溶解性好、稳定性好，同时其还具有制备方法简便、结晶条件温和、结晶度高、稳定性好和不易吸湿等优点，适合制备成为所期望的药物组合物。

69、本发明的化合物可以通过本领域技术人员所熟知的多种合成方法来制备，包括下面列举的具体实施方式、其与其他化学合成方法的结合所形成的实施方式以及本领域技术上人员所熟知的等同替换方式，优选的实施方式包括但不限于本发明的实施例。

70、本发明具体实施方式的化学反应是在合适的溶剂中完成的，所述的溶剂须适合于本发明的化学变化及其所需的试剂和物料。为了获得本发明的化合物，有时需要本领域技术人员在已有实施方式的基础上对合成步骤或者反应流程进行修改或选择。