一种脱色、脱苦，醇溶性玉米低聚肽的制备方法及其在酒类中的用途与流程

1.本发明属于保健食品及酒类产品生产加工技术领域，涉及一种可减少酒精性肝脏损伤的醇溶性玉米低聚肽及包含该玉米低聚肽的酒类产品的制备方法。


背景技术：

2.研究发现，人体摄入的酒精90％～95％经肝脏代谢，酒精在体内代谢过程中产生大量有害物质如乙醛。乙醛具有肝细胞毒性，能损伤肝细胞，影响酶的结构及功能，抑制谷胱甘肽(gsh)的生物合成，降低超过氧化物酶(sod)等的活性。此外，乙醇在体内代谢过程中还产生大量丙二醛(mda)等氧化物、过氧化物、自由基与活性氧，导致脂质过氧化、蛋白质氧化、dna损伤和加合物的形成，损害线粒体脂肪酸的β氧化，影响脂肪代谢，致使脂肪在肝细胞内沉积，甘油三酯(tg)升高。乙醇代谢中间产物还能刺激免疫系统，产生tnf-α、il-6等细胞因子，引起肝脏炎症的发生、肝细胞的坏死和凋亡、肝组织的纤维化和肝硬化的发生。因此，长期饮酒造成慢性肝损伤，进一步发展导致酒精性肝炎、肝硬化及肝癌等严重疾病。世界卫生组织已经将酒精列为一类致癌物，据《柳叶刀》报道，全球每年约有上百万人直接死于饮酒，酒精滥用和酒精依赖已经成为当今世界日益严重的公共卫生问题，亟需加以解决。
3.玉米低聚肽是从玉米蛋白中提取出的一类生物活性肽，安全可靠，已经被批准为新资源食品。大量研究表明，玉米低聚肽具有解酒、醒酒及护肝作用，抑制tnf-α、il-6等细胞因子的形成，不仅可以减少酒精对肝脏的损伤，还对酒精肝具有明确的预防及治疗作用，是一种性能优越的护肝活性肽。但是，现有商品玉米低聚肽味苦且呈黄色，醇溶性不好，直接添加到酒中将产生沉淀并改变酒原有的口感、风味及色泽，严重影响酒产品的感观、质量及消费体验，从而限制了玉米低聚肽直接在酒类产品中的应用。
4.目前市场上已有的主流酒类产品不含护肝活性成分，普遍存在严重的酒精性肝损伤风险，长期饮用易导致酒精肝。少数酒类产品虽然包含一些中药护肝成分，但存在口感、风味及色泽等方面的缺陷，市场接受度不高。
5.中国专利文献cn110664983公开了一种包含人参肽、海参肽、牡蛎肽、花生肽、核桃肽、大豆肽及胶原蛋白肽的配制酒制备方法，其中不含玉米低聚肽。中国专利文献cn106834037公开了一种包含玉米低聚肽及葛花、金银花、桔梗提取液的多肽白酒制备方法，但产品带有特殊气味及味道，改变了白酒原有口感及风味，难以被市场普遍接受。中国专利文献cn105639048公开了一种具有醒酒护肝活性的高f值玉米寡肽的工业化生产方法，但该肽不是直接添加在酒中使用，无法知晓其直接添加在酒中使用的效果。
6.此外，目前尚无仅添加玉米低聚肽就可以减少酒精性肝损伤的酒类产品或相关文献或专利的报道。
7.因此，十分有必要开发一种能溶解于酒、不影响酒的原有风味且具有解酒、醒酒及护肝作用、从而能够直接添加到酒中的脱色、脱苦、醇溶性玉米低聚肽以及包含该玉米低聚肽的酒类产品，以有效应对日益严重的酒精性肝病这一全球性公共卫生难题。


技术实现要素：

8.本发明的目的在于提供一种脱色、脱苦，醇溶性玉米低聚肽的制备方法，该玉米低聚肽具有解酒、醒酒及护肝功能，且易溶于乙醇溶液中，其中，易溶是指在体积分数95％乙醇中的溶解度在100g/l以上。
9.本发明的技术方案如下：
10.一种醇溶性玉米低聚肽的制备方法，包括：
11.方法一、非转基因玉米蛋白粉与水混合分散均匀后转移到反应釜中，调节 ph值至8～9，升温至45～65℃，加入碱性蛋白酶进行酶解，期间维持ph值为 8～9，酶解结束后调节ph值至5.5～6.5，升温至80～90℃维持30分钟灭酶活，降温至45～55℃，加入木瓜蛋白酶和/或风味蛋白酶继续酶解，升温至80～100℃灭酶活，离心，将上清液转移至反应釜中，30～50℃下加入粉末活性炭，搅拌，离心机离心，上清液澄清，澄清液经纳滤膜脱盐后浓缩，浓缩液中加入体积分数90～98％食用酒精至酒精体积分数达55～65％，离心除去沉淀，上清液浓缩至无酒精，浓缩液干燥，得白色粉末；
12.或者，
13.方法二、非转基因玉米醇溶蛋白与水混合分散均匀后转移到反应釜中，调节ph值至8～9，升温至50～60℃，加入碱性蛋白酶酶解，期间维持ph值为8～9，酶解结束后调节ph值至5.5～6.5，升温至80～90℃灭酶活，降温至45～55℃，加入木瓜蛋白酶和/或风味蛋白酶继续酶解，升温至80～100℃维持灭酶活，离心机离心，上清液转移至反应釜中，30～50℃下加入粉末活性炭，搅拌，离心，上清液澄清，澄清液经纳滤膜脱盐后浓缩，浓缩液干燥，得白色粉末。
14.根据本发明的实施方案，方法一中，所述非转基因玉米蛋白粉的蛋白含量为50～70％，例如60％。
15.根据本发明的实施方案，方法一中，所述非转基因玉米蛋白粉与水的重量比为1:3～25，例如1:5～15，如1:10。
16.根据本发明的实施方案，方法一中，调节体系为碱性环境所使用的碱为氢氧化钠。
17.根据本发明的实施方案，方法一中，调节体系为酸性环境所使用的酸为盐酸。
18.根据本发明的实施方案，方法一中，碱性蛋白酶的用量为1公斤非转基因玉米蛋白粉使用0.001～0.05公斤碱性蛋白酶，例如1公斤非转基因玉米蛋白粉使用0.08～0.02公斤碱性蛋白酶，如0.01公斤碱性蛋白酶。
19.根据本发明的实施方案，方法一中，碱性蛋白酶的酶解时间为1～8小时，例如4小时。
20.根据本发明的实施方案，方法一中，木瓜蛋白酶和/或风味蛋白酶的用量为1公斤非转基因玉米蛋白粉使用0.001～0.025公斤木瓜蛋白酶和/或风味蛋白酶，例如1公斤非转基因玉米蛋白粉使用0.003～0.01公斤木瓜蛋白酶和/或风味蛋白酶，如0.005公斤木瓜蛋白酶和/或风味蛋白酶。
21.根据本发明的实施方案，方法一中，木瓜蛋白酶和/或风味蛋白酶的酶解时间为1～10小时，例如6小时。
22.根据本发明的实施方案，方法一中，所述粉末活性炭的用量为1公斤非转基因玉米蛋白粉使用0.05～0.3公斤粉末活性炭，例如1公斤非转基因玉米蛋白粉使用0.08～0.2公
斤粉末活性炭，如0.1公斤粉末活性炭。
23.根据本发明的实施方案，方法一中，所述粉末活性炭加入后搅拌的时间为 1～10小时，例如5小时。
24.根据本发明的实施方案，方法二中，所述非转基因玉米醇溶蛋白中蛋白含量为80～99％，例如95％。
25.根据本发明的实施方案，方法二中，所述非转基因玉米醇溶蛋白与水的重量比为1:3～25，例如1:5～15，如1:10。
26.根据本发明的实施方案，方法二中，调节体系为碱性环境所使用的碱为氢氧化钠。
27.根据本发明的实施方案，方法二中，调节体系为酸性环境所使用的酸为盐酸。
28.根据本发明的实施方案，方法二中，碱性蛋白酶的用量为1公斤非转基因玉米醇溶蛋白使用0.001～0.01公斤碱性蛋白酶，例如1公斤非转基因玉米醇溶蛋白使用0.003～0.009公斤碱性蛋白酶，如0.005公斤碱性蛋白酶。
29.根据本发明的实施方案，方法二中，碱性蛋白酶的酶解时间为1～8小时，例如4小时。
30.根据本发明的实施方案，方法二中，木瓜蛋白酶的用量为1公斤非转基因玉米醇溶蛋白使用0.0001～0.0012公斤木瓜蛋白酶，例如1公斤非转基因玉米醇溶蛋白使用0.001～0.009公斤木瓜蛋白酶，如0.002公斤木瓜蛋白酶。
31.根据本发明的实施方案，方法二中，风味蛋白酶的用量为1公斤非转基因玉米醇溶蛋白使用0.0001～0.0012公斤风味蛋白酶，例如1公斤非转基因玉米醇溶蛋白使用0.001～0.009公斤风味蛋白酶，如0.003公斤风味蛋白酶。
32.根据本发明的实施方案，方法二中，木瓜蛋白酶和风味蛋白酶的酶解时间为1～10小时，例如6小时。
33.根据本发明的实施方案，方法二中，所述粉末活性炭的用量为1公斤非转基因玉米醇溶蛋白使用0.05～0.3公斤粉末活性炭，例如1公斤非转基因玉米醇溶蛋白使用0.08～0.2公斤粉末活性炭，如0.1公斤粉末活性炭。
34.根据本发明的实施方案，方法二中，所述粉末活性炭加入后搅拌的时间为 1～10小时，例如5小时。
35.本发明还提供如上所述方法制备得到的玉米低聚肽。
36.根据本发明的实施方案，所述玉米低聚肽在乙醇中为易溶，在95％乙醇中溶解度大于或等于100g/l。
37.本发明还提供如上所述玉米低聚肽在制备含肽酒类组合物中的用途。
38.本发明还提供一种包含如上所述醇溶性玉米低聚肽的酒类组合物。
39.根据本发明的实施方案，所述酒类组合物中酒类选自白酒、啤酒、红酒及各种含酒精的饮品。
40.根据本发明的实施方案，所述酒类组合物中醇溶性玉米低聚肽的含量为 1～20g/l，优选5～15g/l，还优选7～12g/l，例如5g/l，7g/l，8.5g/l，10.5g/l， 11g/l，12g/l。
41.本发明还提供如上所述包含醇溶性玉米低聚肽的酒类组合物的制备方法，包括：将玉米低聚肽与酒类进行搅拌以溶解混合。
42.根据本发明的实施方案，所述酒类选自白酒，啤酒，红酒及各种含酒精的饮品。
43.根据本发明的实施方案，所述搅拌在室温下进行。
44.根据本发明的实施方案，方法还包括溶解混合后进行过滤的步骤，过滤使用pp或pes滤芯。
45.作为一个实施方案，采用如下方法制备如上所述包含醇溶性玉米低聚肽的酒类组合物：
46.称取玉米低聚肽加入到酒中，室温下搅拌充分混合、溶解，静置过夜，用 0.2微米pp或pes滤芯过滤，收集滤液。
47.有益效果
48.本发明提供了一种能易溶于酒、不影响酒的原有风味且具有解酒、醒酒及护肝作用、从而能够直接添加到酒中的玉米低聚肽，具有减少酒精性肝损伤的作用。本发明的方法使用特定用量的粉末活性炭来对非转基因玉米蛋白粉或非转基因玉米醇溶蛋白酶解获得的玉米低聚肽产品进行脱色和脱苦，且任选地进一步使用醇提等步骤，使得所述玉米低聚肽在乙醇中可以达到无色、无味、不影响酒的风味的目的，并且在体积分数95％乙醇中溶解量为100g/l以上。
具体实施方式
49.下文将结合具体实施例对本发明的技术方案做更进一步的详细说明。应当理解，下列实施例仅为示例性地说明和解释本发明，而不应被解释为对本发明保护范围的限制。凡基于本发明上述内容所实现的技术均涵盖在本发明旨在保护的范围内。
50.除非另有说明，以下实施例中使用的原料和试剂均为市售商品，或者可以通过已知方法制备。
51.除非特殊说明，本技术中乙醇浓度％均是指体积分数。
52.实施例一醇溶性无苦味玉米低聚肽的制备
53.100公斤非转基因玉米蛋白粉(蛋白含量60％)与1000公斤纯水通过胶体磨混合分散均匀后转移到2000升反应釜中，加入10公斤氢氧化钠调节ph值至8.5，升温至55℃，加入碱性蛋白酶1公斤，酶解4小时，期间加氢氧化钠维持ph值为 8.5，酶解结束后加盐酸调节ph值至6.0，升温至90℃维持20分钟灭酶活，降温至 50℃，加入木瓜蛋白酶0.5公斤，继续酶解6小时，升温至90℃维持20分钟灭酶活，离心机离心，上清液转移至反应釜中，40℃下加入粉末活性炭10公斤，搅拌5小时，离心机离心，上清液通过陶瓷膜澄清，澄清液经纳滤膜脱盐后浓缩，浓缩液中加体积分数95％食用酒精至酒精质量百分浓度达60％，离心除去沉淀，上清液真空浓缩至无酒精，浓缩液喷雾干燥，得白色粉末，重量28.5公斤。
54.称取1.0克上述玉米低聚肽样品，置于锥形瓶中，加入10ml 95％乙醇，塞紧瓶口，25℃下恒温水浴，电磁搅拌1小时，静置30分钟后观察是否有沉淀，结果发现溶液澄清透明，无沉淀，无悬浮物，表明上述玉米低聚肽全溶于95％乙醇，溶解度大于或等于10克/100ml。
55.经氨基酸分析仪检测，上述玉米低聚肽中各种氨基酸含量(g/100g)如下表 1所示：
56.表1
[0057][0058][0059]
对比例一苦味玉米低聚肽的制备
[0060]
100公斤非转基因玉米蛋白粉(蛋白含量60％)与1000公斤纯水通过胶体磨混合分散均匀后转移到2000升反应釜中，加入10公斤氢氧化钠调节ph值至8.5，升温至55℃，加入碱性蛋白酶1公斤，酶解4小时，期间加氢氧化钠维持ph值为 8.5，酶解结束后加盐酸调节ph值至6.0，升温至90℃维持20分钟灭酶活，离心机离心，上清液通过陶瓷膜澄清，澄清液经纳滤膜脱盐后浓缩，浓缩液喷雾干燥，得淡黄色粉末，重量45.3公斤。
[0061]
实施例二醇溶性无苦味玉米低聚肽的制备
[0062]
100公斤非转基因玉米醇溶蛋白(蛋白含量95％)与1000公斤纯水通过胶体磨混合分散均匀后转移到2000升反应釜中，加入10公斤氢氧化钠调节ph值至 8.5，升温至55℃，加入碱性蛋白酶0.5公斤，酶解4小时，期间加氢氧化钠维持 ph值为8.5，酶解结束后加盐酸调节ph值至6.0，升温至90℃维持20分钟灭酶活，降温至50℃，加入木瓜蛋白酶0.2公斤、风味蛋白酶0.3公斤，继续酶解6小时，升温至90℃维持20分钟灭酶活，离心机离心，上清液转移至反应釜中，40℃下加入粉末活性炭10公斤，搅拌5小时，离心机离心，上清液通过陶瓷膜澄清，澄清液经纳滤膜脱盐后浓缩，浓缩液喷雾干燥，得白色粉末，重量62.8公斤。
[0063]
称取1.0克上述玉米低聚肽样品，置于锥形瓶中，加入10ml 95％乙醇，塞紧瓶口，25℃下恒温水浴，电磁搅拌1小时，静置30分钟后观察是否有沉淀，结果发现溶液澄清透明，无沉淀，无悬浮物，表明上述玉米低聚肽全溶于95％乙醇，溶解度大于或等于100克/l。
[0064]
实施例三玉米低聚肽感观指标对比
[0065]
将上述实施例一、对比例一和实施例二的玉米低聚肽产品(分别对应玉米低聚肽1、2、3号)与商品玉米低聚肽产品4号(中食都庆(山东)生物技术有限公司出品)、5号(武汉
天天好生物制品有限公司出品)进行对比。具体对比结果见如下表2和3。
[0066]
分别取5.00克上述玉米低聚肽产品加纯水至100毫升，配制成质量体积百分浓度为5％的水溶液，人工考察溶液颜色、气味及味道。
[0067]
分别取1.00克上述玉米低聚肽产品加65％的食用酒精至100毫升，配制成玉米低聚肽质量体积百分浓度为1％的醇溶液，人工考察醇溶液的颜色、气味及味道。具体对比结果见如下表2和3。
[0068]
表2玉米低聚肽产品感观指标对比
[0069]
对比项目产品外观产品气味水溶液颜色水溶液气味水溶液味道玉米低聚肽1号白色粉末无气味无色无气味无味玉米低聚肽2号黄色粉末类似发酵气味微黄色类似发酵气味苦味玉米低聚肽3号白色粉末无气味无色无气味无味玉米低聚肽4号棕黄色粉末类似发酵气味黄色类似发酵气味苦味玉米低聚肽5号黄色粉末类似发酵气味黄色类似发酵气味苦味
[0070]
表3玉米低聚肽产品感观指标对比
[0071][0072]
实施例四酱香型玉米低聚肽配制酒的制备
[0073]
称取120克本发明实施例一中制备的玉米低聚肽，加入到10升市售53度酱香型白酒中，室温下搅拌4小时充分混合、溶解，静置过夜。用0.2微米pes滤芯过滤，收集滤液，即制得含本发明玉米低聚肽的酱香型配制酒(无沉淀，玉米低聚肽全溶于酒中，且酒的颜色和味道未改变)。
[0074]
实施例五浓香型玉米低聚肽配制酒的制备
[0075]
称取105克本发明实施例一中制备的玉米低聚肽，加入到10升市售52度浓香型白酒中，室温下搅拌4小时充分混合、溶解，静置过夜。用0.2微米pes滤芯过滤，收集滤液，即制得含本发明玉米低聚肽的浓香型配制酒(无沉淀，玉米低聚肽全溶于酒中，且酒的颜色和味道未改变)。
[0076]
实施例六清香型玉米低聚肽配制酒的制备
[0077]
称取85克本发明实施例一中制备的玉米低聚肽，加入到10升市售53度清香型白酒中，室温下搅拌4小时充分混合、溶解，静置过夜。用0.2微米pes滤芯过滤，收集滤液，即制得
含本发明玉米低聚肽的清香型配制酒(无沉淀，玉米低聚肽全溶于酒中，且酒的颜色和味道未改变)。
[0078]
实施例七兼香型玉米低聚肽配制酒的制备
[0079]
称取110克本发明实施例一中制备的玉米低聚肽，加入到10升市售53度兼香型白酒中，室温下搅拌4小时充分混合、溶解，静置过夜。用0.2微米pes滤芯过滤，收集滤液，即制得含本发明玉米低聚肽的兼香型配制酒(无沉淀，玉米低聚肽全溶于酒中，且酒的颜色和味道未改变)。
[0080]
实施例八玉米低聚肽红酒的制备
[0081]
称取50克本发明实施例一中制备的玉米低聚肽，加入到10升市售红酒中，室温下搅拌4小时充分混合、溶解，静置过夜。用0.2微米pes滤芯过滤，收集滤液，即制得含本发明玉米低聚肽的红酒(无沉淀，玉米低聚肽全溶于酒中，且酒的颜色和味道未改变)。
[0082]
实施例九玉米低聚肽啤酒的制备
[0083]
称取70克本发明实施例一中制备的玉米低聚肽，加入到10升市售啤酒中，室温下搅拌4小时充分混合、溶解，静置过夜。用0.2微米pes滤芯过滤，收集滤液，即制得含本发明玉米低聚肽的啤酒(无沉淀，玉米低聚肽全溶于酒中，且酒的颜色和味道未改变)。
[0084]
实施例十酱香型多肽白酒减轻急性酒精中毒的研究
[0085]
spf级昆明种雄性小鼠80只，体重20
±
2g，适应性饲养一周后随机分为四组，每组20只，组间体重无显著性差异。各组禁食12小时后，各组小鼠每只按15ml/kg 体重分别给予53
°
飞天茅台(简称53
°
飞天茅台)，贵州省仁怀市酱香酒酒业有限公司出品的53
°
酱香基酒(简称53
°
仁怀酱酒)，按实施例四方法制备的飞天茅台肽酒(简称53
°
飞天茅台肽酒)，按实施例四方法制备的53
°
仁怀市酱香酒酒业酱香型肽酒(简称53
°
仁怀酱香肽酒)灌胃。记录小鼠醒酒时间(翻正反应消失到清醒时间)及24小时内的死亡率，采用spss 17.0统计软件对数据进行处理，结果如下表4：
[0086]
表4
[0087]
组别醉酒时间(min)醉酒率(％)醒酒时间(min)死亡率(％)53
°
飞天茅台75.45
±
10.65100280.34
±
72.8710053
°
仁怀酱酒65.45
±
23.36100312.34
±
94.3910053
°
飞天茅台肽酒125.63
±
8.92
**##
20118.27
±
7.28
**##
053
°
仁怀酱香肽酒102.86
±
7.17
**##
20120.23
±
5.45
**##0[0088]
注：与53
°
飞天茅台比较，*p《0.05，**p《0.01；与53
°
仁怀酱酒比较，
#
p《0.05，
##
p《0.01。
[0089]
结果表明：灌胃15ml/kg的飞天茅台及仁怀酱酒，小鼠致死率为100％，而飞天茅台及仁怀酱酒添加本发明的玉米低聚肽后，致死率降为0，而且只有20％的小鼠发生醉酒，而发生醉酒的这一部分小鼠，其醉酒时间延后，醒酒过程缩短。因此，酱香酒添加本发明的玉米低聚肽后，可以减少商品酱香酒造成的急性肝损伤，显著降低商品酱香酒的急性毒性及由此导致的死亡率。
[0090]
实施例十一浓香型多肽白酒减轻急性酒精中毒的研究
[0091]
spf级昆明种雄性小鼠80只，体重20
±
2g，适应性饲养一周后随机分为四组，每组20只，组间体重无显著性差异。各组禁食12小时后，各组小鼠每只按15ml/kg体重分别给予
52
°
五粮液(简称52
°
五粮液)，四川宜宾高州酒业有限责任公司出品的52
°
浓香基酒(简称52
°
高州浓香酒)，按实施例五方法制备的五粮液肽酒(简称52
°
五粮液肽酒)，按实施例五方法制备的52
°
浓香型肽酒(简称52
°
高州浓香肽酒)灌胃。记录小鼠醒酒时间(翻正反应消失到清醒时间)及24小时内的死亡率，采用spss 17.0统计软件对数据进行处理，结果如下表5：
[0092]
表5
[0093]
组别醉酒时间(min)醉酒率(％)醒酒时间(min)死亡率(％)52
°
五粮液62.62
±
16.67100294.24
±
86.4310052
°
高州浓香酒55.26
±
28.65100325.18
±
111.2910052
°
五粮液肽酒108.59
±
10.12
**##
30132.37
±
13.82
**##
052
°
高州浓香肽酒89.49
±
16.75
**##
30150.47
±
19.24
**##0[0094]
注：与52
°
五粮液比较，*p《0.05，**p《0.01；与52
°
高州浓香酒比较，
#
p《0.05，
##
p《0.01。
[0095]
结果表明：灌胃15ml/kg的五粮液及高州浓香酒，小鼠致死率为100％，而五粮液及高州浓香酒添加本发明的玉米低聚肽后，致死率降为0，而且只有30％的小鼠发生醉酒，而发生醉酒的这一部分小鼠，其醉酒时间延后，醒酒过程缩短。因此，浓香酒添加本发明的玉米低聚肽后，可以减少商品浓香酒造成的急性肝损伤，显著降低商品浓香酒的急性毒性及由此导致的死亡率。
[0096]
实施例十二急性酒精中毒小鼠血清alt、ast及肝组织中sod、mda、 gsh测定
[0097]
昆明种雄性小鼠100只，体重20
±
2g，spf级动物房饲养，适应性喂养一周后随机分为五组，每组20只，组间体重无显著性差异。各组禁食12小时后，各组小鼠每只按14ml/kg体重分别给予市售53
°
飞天茅台(简称53
°
飞天茅台)，贵州省仁怀市酱香酒酒业有限公司出品的53
°
酱香酒(简称53
°
仁怀酱酒)，按实施例四方法制备的飞天茅台肽酒(简称53
°
飞天茅台肽酒)，按实施例四方法制备的53
°
仁怀酱香肽酒灌胃(简称53
°
仁怀酱香肽酒)，空白对照组给予同体积的生理盐水。6h后眼球取血，3500r/min离心10min，分离血清，
ꢀ‑
20℃冷冻保存，利用试剂盒测定血清中ast、alt酶活。取肝脏0.3g，冰浴下用生理盐水制备10％组织匀浆液，3500r/min离心15min，取上清，-20℃保存，利用试剂盒测肝组织中sod活性、mda含量和gsh活性。
[0098]
采用spss 17.0统计软件对数据进行处理。
[0099]
急性酒精中毒小鼠血清alt、ast及肝脏中mda、sod、gsh见下表6：
[0100]
表6
[0101]
组别alt(u/l)ast(u/l)mda(μmol/g)sod(u/g)gsh(μmol/g)空白对照组12.36
±
2.1323.45
±
6.120.7250
±
0.032189.326
±
9.74226.78
±
3.2253
°
飞天茅台20.65
±
1.35
**
30.39
±
3.14
**
1.826
±
0.145
**
163.262
±
8.276
**
17.48
±
0.73
**
53
°
仁怀酱酒21.74
±
2.21
**
33.17
±
5.16
**
1.984
±
0.073
**
157.438
±
7.335
**
16.64
±
0.62
**
53
°
飞天茅台肽酒13.68
±
4.21
##
△△
24.57
±
0.82
##
△△
0.926
±
0.024
##
△△
185.742
±
8.225
##
△△
24.48
±
1.16
##
△△
53
°
仁怀酱香肽酒15.02
±
2.13
##
△△
25.03
±
0.95
##
△△
1.052
±
0.106
##
△△
180.469
±
7.274
##
△△
23.93
±
2.78
##
△△
[0102]
注：与空白对照组比较，*p《0.05，**p《0.01；与53
°
飞天茅台比较，
#
p《0.05，
##
p《0.01；与 53
°
仁怀酱酒比较，
△
p《0.05，
△△
p《0.01。
[0103]
实施例十三多肽白酒减轻慢性酒精性肝损伤的研究
[0104]
雄性wistar大鼠50只，体重220～240g，spf级动物房饲养，适应性喂养1周后随机分为五组，除空白对照组给生理盐水外，其余各组均用53
°
白酒或相应的酱香肽酒灌胃，用量为第1周8ml/kg，以后每周增加1ml/kg，直至增加为15ml/kg，连续灌胃8周。末次给酒后禁食12h，麻醉取血，分离血清；取血后迅速剖取肝脏，在肝脏最大叶距边缘0.5cm处取0.5cm
×
0.5cm大小肝组织，用4％的多聚甲醛固定。另取适量肝组织用冰生理盐水冲洗，滤纸吸湿后称取湿重0.3g左右，加入预冷的生理盐水，冰水中制成10％匀浆，4℃ 3500r/min离心10min，提取上清液。
[0105]
取大鼠血清，按试剂盒方法测定alt、ast；取10％肝脏匀浆液，按试剂盒方法测定肝脏sod、gsh、mda。
[0106]
采用spss 17.0统计软件对数据进行处理。
[0107]
实验期间空白对照组大鼠毛发光泽，活动正常，精神状态、进食以及排便情况无异常，体重明显增加；而53
°
飞天茅台及53
°
仁怀酱酒组大鼠毛发不整无光泽，给酒后步态不稳，活动减少，昏睡，进食量减少，大便糖稀，体重增加缓慢；多肽白酒组(53
°
飞天茅台肽酒及53
°
仁怀酱香肽酒)大鼠精神状态、饮食、大便及毛发等情况均远优于53
°
飞天茅台及53
°
仁怀酱酒组，且与空白对照组无明显差别。
[0108]
各组大鼠血清alt、ast及肝脏alt、ast、sod、gsh见下表7。
[0109]
表7
[0110]
组别alt卡门氏单位ast卡门氏单位mda(μmol/g)sod(u/mg)gsh(mg/g)空白对照组32.6
±
4.823.1
±
7.30.43
±
0.16530.76
±
134.285.82
±
1.3853
°
飞天茅台47.2
±
11.2
**
35.5
±
15.2
**
0.61
±
0.27
**
353.41
±
98.32
**
4.29
±
0.53
**
53
°
仁怀酱酒50.3
±
12.6
**
39.8
±
18.2
**
0.70
±
0.17
**
345.75
±
102.14
**
3.92
±
0.81
**
53
°
飞天茅台肽酒37.4
±
5.2
##
△△
30.8
±
12.7
##
△△
0.48
±
0.05
##
△△
502.28
±
128.43
##
△△
5.12
±
1.83
##
△△
53
°
仁怀酱香肽酒39.1
±
4.3
##
△△
31.5
±
9.86
##
△△
0.51
±
0.25
##
△△
498.77
±
126.58
##
△△
4.95
±
1.03
##
△△
[0111]
注：与空白对照组比较，*p《0.05，**p《0.01；与53
°
飞天茅台比较，
#
p《0.05，
##
p《0.01；与 53
°
仁怀酱酒比较，
△
p《0.05，
△△
p《0.01。
[0112]
从表中可以看出，53
°
飞天茅台及53
°
仁怀酱酒组alt、ast及mda明显高于空白对照组，sod及gsh则显著低于空白对照组，具有统计学意义(p＜0.01)，表明53
°
飞天茅台及53
°
仁怀酱酒组小鼠已发生酒精性肝损伤。而两个肽酒组alt、ast及mda明显低于53
°
飞天茅台及53
°
仁怀酱酒组，sod 及gsh则高于53
°
飞天茅台及53
°
仁怀酱酒组，具有统计学意义(p＜0.01)，且与空白对照组无显著性差异，说明肽酒组可以降低酒精对肝脏的损害。
[0113]
以上，对本发明的实施方式进行了说明。但是，本发明不限定于上述实施方式。凡在本发明的精神和原则之内，所做的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。