一种玉米赤霉烯酮的单克隆抗体、试剂盒及应用的制作方法

本发明属于基因工程，具体涉及一种玉米赤霉烯酮的单克隆抗体、试剂盒及应用。

背景技术：

1、玉米赤霉烯酮(zen)是一种由镰刀菌属的菌种产生的具有雌激素作用的真菌毒素，广泛存在于各种粮食作物中，如玉米、大麦、燕麦、小麦、大米和高粱等，以玉米的阳性检出率最高。zen性质稳定，耐热性较强，具有生殖毒性，可以通过饲料污染畜禽类产品，也可通过被污染的粮食、肉类和奶制品等食品进入人体，引起动物和人的急慢性中毒反应。各国均制定了食品和饲料中zen毒素的限量标准，根据我国gb 13078-2017《饲料卫生标准》中规定，不同饲料原料和饲料产品的最高限量值为0.1mg/kg到1mg/kg不等；gb 2761-2017《食品安全国家标准 食品中真菌毒素限量》中对小麦、小麦粉、玉米、玉米面(渣、片)的限量值规定为60μg/kg。

2、目前，用于分析检测zen的方法主要包括高效液相色谱法、气相色谱法、薄层层析法、酶联免疫吸附检测法(elisa）和放射免疫测定法(ria)等。与物理化学法相比，免疫学检测方法更为简便快速，特别是elisa技术和胶体金技术，具有灵敏度高、成本低、特异性强、简便快速等优点，是目前预防和控制zen最常用的检测方法。但是，目前的zen单克隆抗体用于elisa技术，获得的检测灵敏度较差，特异性较差，使zen检测方法的检测限仍较高，特异性不强。

技术实现思路

1、本发明解决的技术问题是提供一种玉米赤霉烯酮的单克隆抗体、试剂盒及应用，该单克隆抗体与玉米赤霉烯酮结合力强，灵敏度好，特异性强；该试剂盒的检测限更低，检测特异性更好。

2、为了解决上述问题，本发明的一个方面提供一种玉米赤霉烯酮的单克隆抗体，包括轻链和重链，轻链可变区包括cdr1、cdr2、cdr3；重链可变区包括cdr1、cdr2、cdr3；

3、轻链cdr1的氨基酸序列如seq id no.1所示，轻链cdr2的氨基酸序列如seq idno.2所示，轻链cdr3的氨基酸序列如seq id no.3所示；

4、重链cdr1的氨基酸序列如seq id no.4所示，重链cdr2的氨基酸序列如seq idno.5所示，重链cdr3的氨基酸序列如seq id no.6所示。

5、所述seq id no.1的序列结构为：rasqdisnyln。

6、所述seq id no.2的序列结构为：ytsrlhs。

7、所述seq id no.3的序列结构为：qqghtlprt。

8、所述seq id no.4的序列结构为：sygms。

9、所述seq id no.5的序列结构为：tiisggiytyyrdsvrg。

10、所述seq id no.6的序列结构为：yrdryddy。

11、优选地，所述轻链可变区的氨基酸序列如seq id no.7所示。

12、所述seq id no.7的序列结构为：

13、diqmtqttsslsaslgdrvtiscrasqdisnylnwyqqkpdgtvkllifytsrlhsgvpsrfsgsgsgtdfsltisnleqediatyfcqqghtlprtfgggtkleikradaaptvsifppsseqltsggasv。

14、优选地，所述重链可变区的氨基酸序列如seq id no.8所示。

15、所述seq id no.8的序列结构为：

16、mnfglsliflvlvlkgvhcevklvesggglvkpggslklscaasgftfssygmswvrqtpekrlewvatiisggiytyyrdsvrgrftisrdnakntlylqmssltsedtaiyycvryrdryddywgqgttltvssakttassvyplapvcgdttgssvtlgclvkgyfpepvtltwnsgsqs。

17、优选地，编码轻链可变区的基因序列如seq id no.9所示。

18、所述seq id no.9的序列结构为：

19、gatatccagatgacacagactacatcttccctgtctgcctctctgggagacagagtcaccatcagttgcagggcaagtcaggacattagcaattatttaaactggtatcagcagaaaccagatggaactgttaaactcctgatcttttacacatcaagattacactcaggagtcccatcaaggttcagtggcagtgggtctggaacagatttttctctcaccattagcaacctggaacaagaagatattgccacttacttttgccaacagggtcatacgcttcctcggacgttcggtggaggcaccaagctggaaatcaaacgggctgatgctgcaccaactgtatccatcttcccaccatccagtgagcagttaacatctggaggtgcctcagtc。

20、优选地，编码重链可变区的基因序列如seq id no.10所示。

21、所述seq id no.10的序列结构为：

22、atgaacttcgggctcagcttgattttccttgtccttgttttaaaaggtgtccactgtgaagtgaagctggtggagtctgggggaggcttagtgaagcctggagggtccctgaaactctcctgtgcggcctctggattcactttcagtagctatggcatgtcttgggttcgccagactccggagaagaggctggagtgggtcgcaaccattattagtggtggtatttacacctactatcgagacagtgtgagggggcgattcaccatctccagagacaatgccaagaacaccctgtacctgcaaatgagtagtctgacgtctgaagacacggccatttattactgtgttagatatcgcgataggtacgacgactactggggccaaggcaccactctcacagtctcctcagccaaaacaacagcctcatcggtctatccactggcccctgtgtgtggagatacaactggctcctcggtgactctaggatgcctggtcaagggttatttccctgagccagtgaccttgacctggaactctggatcccaatct。

23、本发明的另一个方面提供上述的玉米赤霉烯酮的单克隆抗体在制备检测玉米赤霉烯酮的试剂或试剂盒中的应用。

24、本发明的再一方面提供一种玉米赤霉烯酮的检测试剂，包括上述的玉米赤霉烯酮的单克隆抗体。

25、优选地，所述玉米赤霉烯酮的单克隆抗体通过胶体金标记。

26、本发明的再一方面提供一种检测玉米赤霉烯酮的试剂盒，包括试纸条、微孔条、微孔塞和微孔试剂，所述微孔条中冻干有所述微孔试剂，所述微孔塞设于所述微孔条上，所述微孔试剂为上述的检测玉米赤霉烯酮的试剂。

27、优选地，所述试纸条包括底板，所述底板上沿所述底板的长度方向依次排列设置有样品垫、硝酸纤维素膜、吸水纸；所述硝酸纤维素膜上靠近所述吸水纸的一端设有质控线，靠近所述样品垫的一端设有检测线；所述质控线上喷涂有羊抗鼠igg抗体和色素；所述检测线上喷涂有玉米赤霉烯酮-bsa偶联抗原。

28、优选地，所述羊抗鼠igg抗体和色素的浓度为0.5~1mg/ml；所述玉米赤霉烯酮-bsa偶联抗原浓度为0.1~0.5mg/ml。

29、本发明与现有技术相比，具有以下有益效果：

30、本发明通过玉米赤霉烯酮抗原免疫小鼠，通过杂交瘤技术筛选得到了特异性强的玉米赤霉烯酮单克隆抗体，该玉米赤霉烯酮单克隆抗体能够特异性的与玉米赤霉烯酮结合，与其他真菌毒素的交叉反应极小，用于检测玉米赤霉烯酮的灵敏度高、特异性强。本发明的检测玉米赤霉烯酮的试剂盒检测限低，检测玉米赤霉烯酮的特异性好。