裂环乌苏烷型三萜类化合物及其药物组合物治疗神经炎症的用途

本发明属于医药，涉及到裂环乌苏烷型三萜类化合物、其药物组合及预防和治疗神经炎症的用途。经药理实验证实，裂环乌苏烷型三萜类成分可以通过调节mapk/nf-κb/nlrp3通路，抑制炎症因子的分泌，从而抑制神经炎症。动物实验还证明了该类成分可以抑制脂多糖导致的小鼠急性神经炎症，对神经炎症相关疾病具有治疗和预防作用。

背景技术：

1、神经炎症是由各种致病菌或毒素等刺激引发的中枢神经系统的应激反应，是一种较为常见的病理过程。然而，持续不断的炎症反应会改变神经元的内环境稳态，诱导神经退行性疾病的产生[1]。神经炎症广泛存在于阿尔兹海默病、帕金森综合症和肌萎缩性侧索硬化症等神经退行性疾病的发生发展过程，而且神经炎症所产生的神经毒素又反过来可以进一步诱发或加重病情[2]。小胶质细胞和星形胶质细胞在神经炎症的发生发展过程起到了重要作用。致炎因素通过激活nf-κb和mapk通路，释放大量炎症因子和炎症介质，如inos，il-1β，il-6和tnf-α等，加重炎症反应[3]。

2、临床常用的抗神经炎药物主要为甾体类药物和非甾体类药物。前者长期服用易破坏体内的水、盐等的代谢平衡，引起类肾上腺皮质功能亢进综合症，副作用很大；后者主要通过抑制cox蛋白的活性产生抗炎效果，但会引起胃肠道、肾脏和肝脏损伤等不良反应[4]。因此，亟待开发具有良好抗神经炎活性兼低毒性的药物。

3、天然来源的小分子一直是药物研发的重要领域，黄酮苷类、茋类和木脂素类等多酚类成分可以通过调控tlr4信号通路减轻神经炎症[5]。裂环三萜是一类结构骨架较为新颖的三萜类成分，目前在约80种植物发现了该类成分的存在。根据常见的裂环位置，可分为2,3-裂环三萜、3,4-裂环三萜、18,19-裂环三萜和其他位置裂环三萜。根据裂环前的结构类型又可将每类分为乌苏烷、齐墩果烷、羽扇豆烷、何伯烷和木栓烷等类型[6]。药理活性研究显示，裂环三萜类成分具有抗炎[7]、抗菌[8]、抗病毒[9]和细胞毒[10]等方面的活性。然而，对它们的抗神经炎活性报道较少。

4、经研究发现，裂环乌苏烷型三萜类成分可以通过下调mapk/nf-κb/nlrp3通路蛋白，抑制脂多糖诱导的bv-2细胞中tnf-α和il-1β等炎症因子的分泌。同时，该类成分还能减轻脂多糖导致的小鼠急性神经炎症。到目前为止，尚未发现裂环乌苏烷型三萜类成分预防或治疗神经炎症的文献报道和发明专利。

5、参考文献

6、[1]tohidpour a,morgun av,boitsova eb,malinovskaya na,martynova gp,khilazheva ed,natalia vk,gertsog g e,salmina ab.neuroinflammation andinfection:molecular mechanisms associated with dysfunction of neurovascularunit[j].front.cell.infect.m.,2017,7:276.

7、[2]ransohoff rm.how neuroinflammation contributes toneurodegeneration[j].science,2016,353(6301):777–783.

8、[3]colonna m,butovsky o.microglia function in the central nervoussystem during health and neurodegeneration[j].annu.rev.immunol.,2017,35:441–468.

9、[4]vonkeman he,laar mvd.nonsteroidal anti-inflammatory drugs:adverseeffects and their prevention[j].semin.arthritis rheu.,2010,39(4):294–312.

10、[5]rahimifard m,maqbool f,moeini-nodeh s,niaz k,abdollahi m,braidy n,nabavi sm,nabavi sf.targeting the tlr4 signaling pathway by polyphenols:anovel therapeutic strategy for neuroinflammation[j].ageing res.rev.,2017,36:11–19.

11、[6]李若斐.四季青化学成分的研究[d].北京：中国医学科学院药物研究所，2018.

12、[7]muhammad i,sayed kae,mossa js,al-said ms,el-feraly fs,clark am,hufford cd,oh s,mayer ams.bioactive 12-oleanene triterpene and secotriterpeneacids from maytenus undata[j].j.nat.prod.,2000,63(5):605–610.

13、[8]caldwell cg,franzblau sg,suarez e,timmermann bn.oleananetriterpenes from junellia tridens[j].j nat prod,2000,63(12):1611–1614.

14、[9]wei y,ma cm,chen dy,hattori m.anti-hiv-1protease triterpenoidsfrom stauntonia obovatifoliola hayata subsp.intermedia[j].phytochemistry,2008,69(9):1875–1879.

15、[10]liu wj,peng yy,chen h,liu xf,liang jy,sun jb.triterpenoidsaponins with potential cytotoxic activities from the root bark of ilexrotunda thunb[j].chem biodivers,2017,14(2):e1600209.

技术实现思路

1、本发明解决的技术问题在于提供裂环乌苏烷型三萜类化合物或其药学上可接受的盐以及它们在制备抗神经炎症药物中的用途。

2、为解决本发明的技术问题，本发明提供了如下技术方案：

3、本发明技术方案的第一方面是提供了裂环乌苏烷型三萜类化合物或其药学上可接受的盐，其特征在于，具有如下通式：

4、

5、r1为氢、羟基或乙酰氧基；r2和r3独立地选自氢、甲基、乙酰基、葡萄糖基、木糖基或阿拉伯糖基；r4为甲基、羟甲基、甲氧亚甲基(-ch2och3)、乙酰氧亚甲基(-ch2oocch3)或甲氧羰基(-cooch3)；r5为氢、甲基、葡萄糖基、木糖基或阿拉伯糖基；r6和r7独立地选自氢、羟基或羰基；r8为氢、羟基或羰基；r9为羟基、羰基或葡萄糖基；r10和r11独立地选自氢、羟基或甲氧基；r12为氢、甲基或异戊烯基苷。

6、优选的化合物包括但不限于：

7、

8、本发明技术方案的第二方面是提供了8个裂环乌苏烷型三萜类化合物的制备方法：

9、冬青干燥叶(ilex chinensis)采用5–10倍量的70％乙醇回流提取2–3次，每次2–3h，减压蒸馏得粗提物。加适量水使浸膏分散均匀，采用体积与水相同的乙酸乙酯萃取2–3次，分别得到乙酸乙酯部位和水部位。乙酸乙酯部位经硅胶和/或葡聚糖凝胶lh-20柱色谱分离，分别采用石油醚–丙酮和/或ch2cl2–ch3oh(–h2o)溶剂系统洗脱，得到亚组分。采用高效液相-正相硅胶柱制备，以ch2cl2–ch3oh(–h2o)为流动相洗脱，制备得到化合物4和5。经检识，化合物4和5均以一对差向异构体的形式存在。因此，采用手性分离系统，以异丙醇–正己烷为流动相完成了它们的拆分，分别得到光学纯产物4a，4b和5a，5b。采用高效液相-反相硅胶柱制备分离，以ch3oh–h2o或ch3cn–h2o溶剂系统洗脱，制备得到化合物2a，2b和3。水部位经大孔树脂hp-20和/或mci树脂柱色谱分离，采用c2h5oh–h2o溶剂系统洗脱，得到亚部位。亚部位再经反相硅胶和/或葡聚糖凝胶lh-20柱色谱分离，分别以ch2cl2–ch3oh-h2o或ch3oh–h2o为流动相洗脱，得到各组分。采用高效液相-反相硅胶柱制备分离，以ch3oh–h2o或ch3cn–h2o溶剂系统洗脱，制备得到化合物1。

10、本发明技术方案的第三方面是提供了一种药物组合物，其中包括至少一种前述的裂环乌苏烷型三萜类化合物或药学上可接受的盐和载体。

11、本发明技术方案的第四方面是提供了第一方面所述裂环乌苏烷型三萜类化合物或其药学上可接受的盐、第三方面所述药物组合物在抗神经炎药物中的用途。

12、有益技术效果本发明首次从冬青叶中分离鉴定出了8个新的裂环乌苏烷型三萜类化合物(1，2a，2b，3，4a，4b，5a，5b)，采用脂多糖诱导bv-2细胞神经炎症模型评价化合物的抗神经炎作用。结果显示，化合物1，2a，2b，3和4a能够显著抑制炎症因子tnf-α和/或il-1β的分泌。此外，化合物1，2b和4a可以通过调节mapk/nf-κb/nlrp3炎症通路减轻神经炎症。动物实验还证明了该类成分可以抑制脂多糖导致的小鼠急性神经炎症。因此，本发明制备的裂环乌苏烷型三萜类化合物具有预防和治疗神经炎症的潜在药物价值，有望开发成基于靶向调节mapk/nf-κb/nlrp3通路的抗神经炎先导物或者药物。