一种核酸污染去除剂及其使用方法与流程

文档序号:35574186发布日期:2023-09-24 12:32阅读:124来源:国知局

本发明涉及核酸污染去除剂,特别涉及一种核酸污染去除剂及其使用方法。


背景技术:

1、随着分子生物学的发展,核酸编辑、扩增、测序、鉴定等以核酸为中心的技术变得越来越先进和方便。尤其是dna/rna测序、数字pcr和转基因技术的出现,使得核酸技术应用越来越广泛,灵敏度也越来越高。核酸是脱氧核糖核酸(dna)和核糖核酸(rna)的总称,是由许多核苷酸单体聚合成的生物大分子化合物。核酸检测是一项具有高度准确性的科学实验,实验室阳性对照、质控、阳性样本等污染是一个不可避免的难题,其中实验环境导致的污染既是最容易产生的污染,也是最难消除的污染,核酸污染极易造成假阳性结果,有效清除pcr实验室污染,成了一个实验室必须解决的难题。

2、现有技术的核酸清理都是以消毒剂成分,如过氧化物为过氧化氢、过氧化钠和过氧乙酸中的一种或几种;或者氯离子为主要消毒成分的核酸清除剂,利用过氧化物、裂解液等强氧化剂的氧化功能,把实验室残留的核酸裂解掉,从而降低实验室环境中的核酸,强氧化剂大多都有不愉快的气味和强酸性,长期使用会腐蚀实验室仪器、设备和设施,对实验室操作人员有一定的危害性,并且长期使用消毒剂成分不可能清除干净,会造成实验室二次污染。


技术实现思路

1、为了解决上述技术问题,本发明是通过以下技术方案实现的:

2、一种核酸污染去除剂,包括以下重量份的原料:a液含广谱核酸酶0.005ku-1ku/ml,缓冲液0.001%-2%、glycerol10%-50%,金属离子盐0.001%-1%;b液含缓冲液0.01%-1%、金属离子盐0 .01%-0.1%和去离子水;c液含氯试剂0 .2%-2%、表面活性剂0.5%-3%、缓冲剂0.01%-1%、蛋白变性剂0.5%-3%、醋酸钾(kac)0.01%-1%及去离子水。

3、作为优选方案,所述广谱核酸酶为为冻干粉剂,所述广谱核酸酶的纯度 ≥98% 、活性 ≥ 1.0 x 106u/ml 、比活≥ 1.0 x 106u/mg(蛋白),使用广谱核酸酶冻干粉剂制备a液1000ml,称量广谱核酸酶冻干粉0.01ug-15ug加入到容器中,用移液枪吸取三羟甲基氨基甲烷盐酸盐0.01ml-0.2ml,加入到称配后的广谱核酸酶里,称配1克-5克金属离子盐加入到容器内,称量100ml-500mlglycerol加入到容器中,去离子水加到950ml,常温下搅拌(30-60转/分钟)30分钟,使以上物质充分混合,用氢氧化钠调ph值7.5-8.5,加去离子水至1000ml,备用,如a液的包装规格1ml/瓶,分装成1000瓶,-20°冷冻保存。

4、作为优选方案,所述广谱核酸酶为无菌液体酶,所述广谱核酸酶的纯度 ≥90% 、活性 ≥ 2.5 x 105u/ml、比活≥≥ 1.5×106u/mg(蛋白);使用无菌液体酶作为a液的原料制备a液1000ml,配制方法如下:移液枪取广谱核酸酶无菌液0.4ml-60ml加入到容器中,用移液枪吸取三羟甲基氨基甲烷盐酸盐1ml-20ml,加入到称配后的广谱核酸酶里,再用移液枪吸取1克-5克金属离子盐加入到容器内,称量100ml-500mlglycerol加入到容器中,去离子水加到950ml,常温下搅拌(30-60转/分钟)30分钟,使以上物质充分混合,用氢氧化钠调ph值7.5-8.5,加去离子水至1000ml,备用;如a液的包装规格1ml/瓶,分装成1000瓶,-20°冷冻保存使用时复溶至室温。

5、作为优选方案,所述b液为稀释液,常温保存,制备1000mlb液稀释剂配制方法如下:用移液枪吸取三羟甲基氨基甲烷盐酸盐0.1ml-2ml,加入到称配后的广谱核酸酶里,称取0.1g-10g金属离子盐加入到容器内,去离子水加到950ml,常温下搅拌(30-60转/分钟)30分钟,使以上物质充分混合,用氢氧化钠调ph值7.5-8.5,加去离子水至1000ml。

6、作为优选方案,所述c液为含氯离子的消毒剂,制备1000mlc液的方法如下:用移液枪吸取含氯试剂2ml-20ml,加入到容器内,再用移液枪吸取5ml-30ml表面活性剂加入到容器内,用移液枪吸取缓冲剂0.1ml-10ml加入到容器内,称量5ml-30m蛋白质变性剂加入到容器中,再称量醋酸钾0.1g-10g加入到容器内,去离子水加到950ml,常温下搅拌(30-60转/分钟)30分钟,使以上物质充分混合,用氢氧化钠调ph值7.5-8.5,加去离子水至1000ml,备用。

7、作为优选方案,所述a液的广谱核酸酶包括但不限于野生型、各种基因改造的广谱核酸外切酶、野生型、各种基因改造的广谱核酸内切酶,包含从3′端→5′端外切酶端开始逐个水解核苷酸和从5′端→3′端逐个水解的外切酶以及广谱核酸内切酶包括水解5′磷酸二酯键,把磷酸基团留在3′位置上的5′-内切酶、水解3′-磷酸二酯键,把磷酸基团留在5′位置上的3′-内切酶以及对磷酸酯键一侧的碱基有高度专一性核酸内切酶;所述a液的缓冲液包括但不限于三羟甲基氨基甲烷、三羟甲基氨基甲烷盐酸盐、sds以及triton x100。

8、作为优选方案,所述b液的缓冲液包括但不限于三羟甲基氨基甲烷、三羟甲基氨基甲烷盐酸盐、sds以及triton x100,b液的金属离子包括但不限于氯化钾、氯化钠、氯化镁、氯化钙以及钾、钠、镁、钙所成的盐类化合物。

9、8.根据权利要求1所述的核酸污染去除剂,其特征在于,所述c液的含氯试剂包括但不限于次氯酸钠、次氯酸以及含有次氯酸根的化合物,c液的缓冲剂包括但不限于三羟甲基氨基甲烷、三羟甲基氨基甲烷盐酸盐、sds以及triton x100,c液的蛋白变性剂包括但不限于过氧化物、十二烷基硫酸钠、胍盐、尿素;

10、一种核酸污染去除剂的使用方法,实验台面、超净工作台、设备及仪器表面的清洁,将a液倒入b液中,充分摇匀,按压b液瓶喷头,将核酸清除剂均匀的喷洒在以上物体表面,根据实验室污染程度,选择喷洒量及喷洒时间,喷洒后停留15分钟,用洁净的纸巾或洁净的无纺布擦干即可。

11、实验室核酸气溶胶的清洁,关闭pcr实验室的送回风系统后用本产品对实验室的墙面、台面、地面及空气喷雾处理后等待30分钟后,打开pcr实验室室送回风系统30分钟以后再进行实验操作;当实验室的核酸气溶胶污染较为严重时,重复处理2-3次。

12、使用本产品一定周期(一两个月)后,关闭pcr实验室的送回风系统后用c液对实验室的墙面、台面、地面及空气喷雾,处理后等待30分钟后,打开pcr实验室室送回风系统30分钟以后再进行实验操作,如有液体残留,用洁净的纸巾或洁净的无纺布擦干即可。

13、与现有技术相比,本发明的有益效果是:本发明核酸去除剂不是消毒剂、不含有过氧化物、氯离子等消毒成分;采用分子生物学大分子多能核酸酶,能快速切断dna/rna的磷酸二酯键,降解核酸为单碱基;ph值弱碱性,对检验仪器的感光元件和反应器产生腐蚀作用,安全、无毒,可以皮肤、粘膜接触;a液、b液、c液三种液体联合使用既能保持较高的酶活性、达到有效、快速清除核酸残留,防止假阳性,又能解决长期使用核酸酶,通过降解核酸酶达到定期清除核酸酶残留,防止实验室二次污染的目的。

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