基因修饰CAR-T细胞在防止肿瘤复发中的应用的制作方法

基因修饰car-t细胞在防止肿瘤复发中的应用
技术领域
1.本发明属于生物医学领域，具体涉及myc基因通过修饰car-t细胞在防止肿瘤复发中的应用。


背景技术：

2.car-t(chimeric antigen receptor t cell，嵌合抗原受体t细胞)疗法，是指通过基因修饰技术，将带有特异性抗原识别结构域及t细胞激活信号的遗传物质转入t细胞，使t细胞直接与肿瘤细胞表面的特异性抗原相结合而被激活，通过释放穿孔素、颗粒酶素b等直接杀伤肿瘤细胞，同时还通过释放细胞因子募集人体内源性免疫细胞杀伤肿瘤细胞，从而达到治疗肿瘤的目的；而且还可以形成免疫记忆t细胞，从而获得特异性的抗肿瘤长效机制，防止肿瘤的复发；
3.myc基因包括c-myc、n-myc、l-myc，分别定位于8号染色体，2号染色体和1号染色体；结构上由不编码蛋白质的第1外显子和编码蛋白质的第2、3外显子构成；myc基因属于编码核蛋白的癌基因，3个基因都编码一种与细胞周期调控有关的核内dna结合蛋白；myc基因族及其产物可促进细胞增殖，永生化，去分化和转化等，在多肿瘤形成过程中起到重要的作用；
4.目前利用myc基因对car-t细胞进行修饰从而延长car-t细胞在体内的存续时间，依此来减少肿瘤的复发，在国内还无相关现有技术报道。


技术实现要素：

5.为了解决上述技术问题，本发明提出了利用myc基因对car-t细胞进行修饰，从而延长car-t细胞的存续时间，并将其应用于防止肿瘤的复发；
6.为了达到上述技术目的，本发明是通过以下技术方案实现的：myc基因通过修饰car-t细胞在防止肿瘤复发中的应用；
7.优选的，所述car-t细胞在体内存续时间延长可防止肿瘤复发；
8.优选的，所述肿瘤包括但不限于白血病；
9.优选的，所述myc基因包括c-myc、n-myc、l-myc任一项；
10.优选的，所述myc通过mtorc调控代谢，进而影响cra-t细胞的分化，能增加cd4+和cd8+t细胞的slc1a5、slc7a1、slc7a5、slc38a1和slc38a2转运蛋白；
11.优选的，所述myc对car-t细胞的修饰方法是通过强化il-15维持cd8+记忆car-t细胞的功能和强化维持car-t细胞的记忆表型；
12.优选的，所述il-15为myc的下游，il-15与其受体结合后，活化jak/stat信号通路，myc负性jak/stat通路的一个重要抑制因子sosc-1的活性，进而强化il-15维持cd8+记忆car-t细胞的功能；
13.优选的，所述myc可提高cdk4和cdk6的表达，减少p27
kip1
和p21
cip1
的表达，从而强化维持car-t细胞的记忆表型；
14.优选的，所述car-t细胞的体内存续时间延长是通过myc与nfkb1因子协同，调控下游的存活蛋白及bcl-xl的表达，提高记忆性car-t细胞的存活和扩增，进而强化car-t细胞的体内存续。
15.本发明的有益效果是：
16.本发明提供利用myc基因对car-t细胞进行修饰，修饰后的car-t细胞可延续其在体内的存续时间，可防止肿瘤复发；为临床肿瘤的治疗和防复发以及药物研制提供了新的途径。
附图说明
17.为了更清楚地说明本发明实施例的技术方案，下面将对实施例描述所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
18.图1是本发明的car-t体内存续时间短的患者长期缓解率低；
19.图2是本发明的car-t体内存续时间长的患者长期缓解率高；
20.图3是myc相关的基因群在长期存续的car-t细胞中呈现高表达；
21.图4是myc调控的基因在长存续的car-t细胞中高度富集；
22.图5是高表达myc的car-t细胞更多集中在分化早期的阶段；
23.图6是长存续的car-t细胞中myc处于蛋白相互作用的核心地位；
24.图7是myc介导的t细胞信号传导通路；
25.图8是高表达myc的car-t细胞在小鼠体内存续情况。
具体实施方式
26.下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其它实施例，都属于本发明保护的范围。
27.实施例1
28.myc基因通过修饰car-t细胞在防止肿瘤复发中的应用；
29.优选的，所述car-t细胞经myc修饰后在体内存续时间延长可防止肿瘤复发；如图1和图2所示，分别表示car-t细胞在体内存续时间长短与患者长期缓解率关系示意图；如图3所示，通过对在患者体内长期存续的car-t细胞(t-long)和短期存续的car-t细胞(t-short)进行测序，发现myc相关的基因群呈现高表达；如图4所示，转录调控分析显示长久存续的car-t细胞中myc调控的基因高度富集；
30.优选的，所述肿瘤包括但不限于白血病；
31.优选的，所述myc基因包括c-myc、n-myc、l-myc；
32.优选的，所述myc通过mtorc调控代谢，进而影响cra-t细胞的分化，能增加cd4+和cd8+t细胞的slc1a5、slc7a1、slc7a5、slc38a1和slc38a2转运蛋白；如图5所示，干性分析显示高表达myc的car-t细胞更多的维持未分化状态；如图6所示，长存续的car-t细胞中myc处
于蛋白相互作用的核心地位；图7为myc介导的t细胞信号传导通路示意图；
33.优选的，所述myc对car-t细胞的修饰方法是通过强化il-15维持cd8+记忆car-t细胞的功能和强化维持car-t细胞的记忆表型；
34.优选的，所述il-15为myc的下游，il-15与其受体结合后，活化jak/stat信号通路，myc负性jak/stat通路的一个重要抑制因子sosc-1的活性，进而强化il-15维持cd8+记忆car-t细胞的功能；
35.优选的，所述myc可提高cdk4和cdk6的表达，减少p27
kip1
和p21
cip1
的表达，从而强化维持car-t细胞的记忆表型；
36.优选的，所述car-t细胞的体内存续时间延长是通过myc与nfkb1因子协同，调控下游的存活蛋白及bcl-xl的表达，提高记忆性car-t细胞的存活和扩增，进而强化car-t细胞的体内存续。
37.通过动物实验，构建高表达myc的car-t细胞在动物体内实现长时间的存续，结果如图8所示；由图得，myc表达量升高，car-t细胞的存续时间延长且趋于稳定。
38.在本说明书的描述中，参考术语“一个实施例”、“示例”、“具体示例”等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或者特点包含于本发明的至少一个实施例或示例中。在本说明书中，对上述术语的示意性表述不一定指的是相同的实施例或示例。而且，描述的具体特征、结构、材料或者特点可以在任何的一个或多个实施例或示例中以合适的方式结合。
39.以上公开的本发明优选实施例只是用于帮助阐述本发明。优选实施例并没有详尽叙述所有的细节，也不限制该发明仅为所述的具体实施方式。显然，根据本说明书的内容，可作很多的修改和变化。本说明书选取并具体描述这些实施例，是为了更好地解释本发明的原理和实际应用，从而使所属技术领域技术人员能很好地理解和利用本发明。本发明仅受权利要求书及其全部范围和等效物的限制。