一种嘧啶-TCP类化合物、制备方法和医药用途

一种嘧啶-tcp类化合物、制备方法和医药用途
技术领域
1.本发明属于药物化学领域，涉及新化合物的合成、制备及用途，具体涉及一种嘧啶-tcp类化合物、制备方法和医药用途。


背景技术：

2.恶性肿瘤严重影响人类的生命健康，给家庭及社会经济带来沉重负担。而随着环境恶化及人类生活方式的改变，癌症发病率呈逐年升高趋势。目前临床上已有多种抗肿瘤药物，但存在比如毒性大、靶向性弱以及容易产生耐药性等弊端。因此，寻找高效低毒的新型抗肿瘤药物具有重要意义。
3.表观遗传修饰主要包括组蛋白乙酰化、甲基化、磷酸化以及泛素化等，其中乙酰化与甲基化是针对组蛋白修饰机制研究中比较多的组蛋白修饰方式。由于组蛋白的甲基化修饰长期被认为是稳定的，不可逆的修饰方式，直到组蛋白赖氨酸特异性去甲基化酶1(lysine specific demethylase 1，lsd1)的发现才揭开了组蛋白甲基化修饰研究的新篇章。lsd1可以催化去除组蛋白h3k4me1/2和h3k9me1/2的甲基化修饰，从而调节下游靶基因的转录。lsd1在人类多种肿瘤细胞中异常表达，如胃癌、神经母细胞瘤、眼癌、前列腺癌、乳腺癌、肺癌、膀胱癌和血液癌等。研究表明，降低lsd1表达量或抑制lsd1的活性能阻止细胞增殖并诱导一些细胞分化相关基因的表达，是一种高效的抑制肿瘤发生发展的干预方式。基于lsd1在包括肿瘤的多种疾病中所起到的重要作用，研发高效高特异性的lsd1抑制剂来靶向沉默lsd1表达或功能，已成为治疗癌症的新途径，也是当前抗肿瘤药物研发的重点和热点。


技术实现要素：

4.本发明的目的在于提供一种嘧啶-tcp类化合物、制备方法和医药用途。
5.本发明上述目的通过如下技术方案实现：
6.一种嘧啶-tcp类化合物或其药学上可以接受的盐，所述嘧啶-tcp类化合物的化学结构如通式i所示：
[0007][0008]
其中：
[0009]
r1选自烷基、炔丙基；r2选自取代或未取代的苄基、苄乙基、苄丙基、烷基、环烷基；
[0010]
为如下结构中的一种：
[0011]
一种上述嘧啶-tcp类化合物的合成方法，合成路线如下：
[0012][0013]
其中：
[0014]
r1选自烷基、炔丙基；r2选自取代或未取代的苄基、苄乙基、苄丙基、烷基、环烷基；
[0015]
为如下结构中的一种：为如下结构中的一种：
[0016]
上述嘧啶-tcp类化合物或其药学上可以接受的盐用于制备lsd1抑制剂药物的用途。
[0017]
上述嘧啶-tcp类化合物或其药学上可以接受的盐用于制备抗肿瘤药物的用途。
[0018]
优选地，所述肿瘤选自胃癌、乳腺癌、肺癌、前列腺癌、食管癌。
[0019]
有益效果：
[0020]
本发明提供的嘧啶-tcp类化合物均为首次报道。研究发现，该嘧啶-tcp类化合物具有lsd1抑制活性，具有开发成抗肿瘤药物的前景。以其中的化合物5j为例，该化合物对lsd1蛋白抑制作用的ic
50
值为0.046μm，显著优于阳性对照；抗肿瘤测试中，该化合物对胃癌、乳腺癌、肺癌、前列腺癌、食管癌细胞均具有较强的抑制活性。因此，本发明提供的化合物具有开发成lsd1抑制剂药物的前景，具有开发成抗肿瘤药物的前景。
具体实施方式
[0021]
下面结合实施例具体介绍本发明实质性内容，但并不以此限定本发明的保护范
围。
[0022]
实施例1：化合物5j的制备
[0023][0024]
将4,6-二氯-2-(丙硫基)嘧啶-5-胺(50mmol)、3-氯苄胺(50mmol)和三乙胺(60mmol)在乙醇中加热至回流反应48小时。待反应冷却至室温后，减压蒸馏出乙醇，然后将浓缩液倒入水中，用乙酸乙酯萃取后减压蒸馏得6-氯-n-(3-氯苄基)-2-(丙硫基)嘧啶-4,5-二胺，粗品直接用于下一步反应。将上步6-氯-n-(3-氯苄基)-2-(丙硫基)嘧啶-4,5-二胺粗品溶于水和乙酸(v/v＝1:1)混合溶剂中，冰浴下分批加入亚硝酸钠(50mmol)，然后室温下反应1小时。在反应液中加入乙酸乙酯，然后用水洗两次，再用饱和碳酸氢钠洗一次，然后再用饱和食盐水洗一次。将有机相浓缩后直接加入到丙酮中，再加入无水碳酸钾(50mmol)和4-羟基-3,5-二甲氧基苯甲醛(50mmol)，加热回流至反应完全(约15小时)。反应液冷却后，加入乙酸乙酯，然后水洗三次，有机相用无水硫酸钠干燥后直接加入到二氯甲烷中，加入苯环丙胺盐酸盐(50mmol)和三乙胺(60mmol)，再加一滴醋酸，室温搅拌一个小时。然后加入三乙酰基硼氢化钠(80mmol)，室温搅拌过夜。反应结束后，将反应液加入乙酸乙酯，水洗三次，有机相用无水硫酸钠干燥后进行柱层析，过柱得白色蜡状固体，综合产率72％。1hnmr(500mhz,cdcl3)δ7.47(m,2h),7.22
–
7.24(m,2h),7.14(m,2h),7.05(s,1h),7.0(m,2h),6.55(s,2h),5.70(s,2h),3.89(m,2h),3.65(s,6h),2.86(m,2h),2.39(m,1h),1.92(m,1h),1.16(m,2h),1.06(m,1h),0.85(t,j＝7.4hz,3h).
13
c nmr(125mhz,cdcl3)δ171.35,159.60,152.32,152.21,142.21,138.97,136.52,134.71,130.18,128.77,128.72,128.38,128.28,126.69,126.46,125.71,125.50,104.95,56.02,54.12,49.86,41.33,33.53,25.19,22.71,17.28,13.48.esi-ms:calcd.c
32h34
cln6o3s,[m+h]
+
m/z:617.21.
[0025]
实施例2：化合物5a的制备
[0026][0027]
按制备化合物5j的合成方法制备化合物5a，区别在于将3-氯苄胺替换成苄胺，将4-羟基-3,5-二甲氧基苯甲醛替换成3-羟基-4-甲氧基苯甲醛，得到类白色蜡状固体,综合产率81％。1h nmr(500mhz,cdcl3)δ7.47(m,2h),7.34(m,3h),7.26(m,2h),7.18(m,3h),7.07(m,1h),6.98(d,j＝7.7hz,1h),6.93(d,j＝8.4hz,1h),5.74(s,2h),3.86(s,1h),3.72(s,3h),2.85(t,j＝7.9hz 2h),2.37(m,1h),1.94(m,1h),1.53
–
1.57(m,2h),1.26(m,1h),1.11(m,1h),0.97(m,1h),0.85(t,j＝7.7hz,3h).
13
c nmr(125mhz,cdcl3)δ171.07,159.55,152.31,150.36,142.09,140.61,134.67,134.63,128.88,128.57,128.55,128.32,128.15,126.88,125.79,125.41,122.74,112.51,55.99,52.64,50.64,40.93,33.47,25.16,24.87,
22.73,17.12,13.45.esi-ms:calcd.c
31h32
n6o2s,[m+h]
+
m/z:553.24.
[0028]
实施例3：化合物5b的制备
[0029][0030]
按制备化合物5j的合成方法制备化合物5b，区别在于将3-氯苄胺替换成苄胺，将4-羟基-3,5-二甲氧基苯甲醛替换成对羟基苯甲醛，得到浅黄油状物，综合产率68％。1h nmr(500mhz,cdcl3)δ7.45(m,2h),7.31
–
7.37(m,5h),7.19
–
7.24(m,4h),7.12
–
7.16(m,1h),7.01(m,2h),5.75(s,2h),3.92(d,j＝4.2hz,2h),2.91
–
2.94(t,j＝7.3hz 2h),2.41(m,1h),1.91
–
1.95(m,1h),1.58
–
1.62(m,2h),1.12(m,1h),1.00(m,1h),0.86(t,j＝7.4hz,3h).
13
c nmr(125mhz,cdcl3)δ171.27,159.73,152.30,150.67,142.17,138.31,134.59,129.31,128.89,128.59,128.52,128.24,125.81,125.50,121.64,53.06,50.73,41.29,33.47,31.94,29.33,25.39,22.72,22.70,17.17,14.14,13.45.esi-ms:calcd.c
30h30
n6os,[m+h]
+
m/z:523.23.
[0031]
实施例4：化合物5c的制备
[0032][0033]
按制备化合物5j的合成方法制备化合物5c，区别在于将3-氯苄胺替换成苄胺，将4-羟基-3,5-二甲氧基苯甲醛替换成2-氯-3-羟基苯甲醛，得到白色蜡状固体，综合产率75％。1hnmr(500mhz,cdcl3)δ7.47(m,2h),7.29
–
7.36(m,6h),7.19
–
7.24(m,2h),7.12
–
7.15(m,1h),7.01(m,2h),5.76(s,2h),4.04(d,j＝2.9hz,2h),2.82
–
2.85(t,j＝7.5hz,2h),2.37(m,1h),1.96(m,1h),1.15(m,1h),0.99(m,1h),0.84(t,j＝7.4hz,3h).
13
c nmr(125mhz,cdcl3)δ171.21,158.98,152.51,148.31,142.06,139.83,134.52,128.91,128.62,128.59,128.21,127.98,127.19,126.78,125.80,125.51,123.38,122.35,53.43,51.02,50.75,40.84,33.51,25.40,22.67,17.27,13.40.esi-ms:calcd.c
30h30
cln6os,[m+h]
+
m/z:523.23.
[0034]
实施例5：化合物5d的制备
[0035][0036]
按制备化合物5j的合成方法制备化合物5d，区别在于将3-氯苄胺替换成苄胺，将4-羟基-3,5-二甲氧基苯甲醛替换成2-溴-3-羟基苯甲醛，得到浅黄色蜡状固体，综合产率76％。1hnmr(500mhz,cdcl3)δ7.47
–
7.49(m,2h),7.30
–
7.36(m,5h),7.23(m,2h),7.12
–
7.19(m,2h),7.00(m,2h),5.76(s,2h),4.04(d,j＝1.5hz,2h),2.81
–
2.83(t,j＝7.3hz,2h),
2.37(m,1h),1.96(m,1h),1.51
–
1.56(m,1h),1.10(m,1h),1.00(m,1h),0.83(t,j＝7.4hz,3h).
13
cnmr(125mhz,cdcl3)δ171.19,158.99,152.52,149.54,142.07,141.55,134.52,128.91,128.62,128.61,128.22,128.07,127.96,125.79,125.51,123.46,122.41,117.95,53.48,50.75,40.78,33.52,31.94,29.33,25.42,22.71,17.31,14.14,13.41.esi-ms:calcd.c
30h29
brn6os,[m+h]
+
m/z:601.19.
[0037]
实施例6：化合物5e的制备
[0038][0039]
按制备化合物5j的合成方法制备化合物5e，区别在于将3-氯苄胺替换成苄胺，将4-羟基-3,5-二甲氧基苯甲醛替换成2-氟-4-羟基苯甲醛，得到类灰色蜡状固体,综合产率75％。1hnmr(500mhz,chloroform-d)δ7.44
–
7.46(m,2h),7.32
–
7.37(m,4h),7.23(m,3h),7.12
–
7.16(m,1h),7.02(m,3h),5.76(s,2h),3.97(s,2h),2.94
–
2.98(t,j＝7.3hz,2h),2.40(m,1h),1.94(m,1h),1.13(m,1h),1.00(m,1h),0.92(t,j＝7.4hz,3h).
13
c nmr(125mhz,cdcl3)δ171.30,161.93,159.28,152.37,151.29,151.20,142.06,134.49,130.94,130.89,128.91,128.63,128.53,128.24,125.80,125.53,125.36,125.24,123.60,117.45,109.94,109.73,50.80,46.70,41.00,33.49,25.35,22.70,22.66,17.16,13.41.esi-ms:calcd.c
30h29
fn6os,[m+h]
+
m/z:571.23.
[0040]
实施例7：化合物5f的制备
[0041][0042]
按制备化合物5j的合成方法制备化合物5f，区别在于将3-氯苄胺替换成苄胺，将4-羟基-3,5-二甲氧基苯甲醛替换成2-甲基-4-羟基苯甲醛，得到黄色油状物,综合产率64％。1hnmr(500mhz,cdcl3)δ7.44
–
7.47(m,2h),7.29
–
7.36(m,4h),7.23(m,3h),7.13
–
7.16(m,1h),7.03(m,3h),5.75(s,2h),3.90(d,j＝1.7hz,2h),2.91
–
2.94(t,j＝7.3hz,2h),2.44(m,1h),2.36(s,3h),1.94(m,1h),1.59
–
1.63(m,2h),1.13(m,1h),1.00(m,1h),0.90(t,j＝7.4hz,3h).
13
c nmr(125mhz,cdcl3)δ171.27,159.80,152.28,150.57,142.26,138.02,136.20,134.61,129.67,128.89,128.57,128.51,128.25,125.76,125.49,123.82,123.22,118.93,50.75,50.70,41.56,33.49,31.94,29.33,25.35,22.75,22.70,19.09,17.28,14.14,13.42.esi-ms:calcd.c
31h33
n6os,[m+h]
+
m/z:537.24.
[0043]
实施例8：化合物5g的制备
[0044][0045]
按制备化合物5j的合成方法制备化合物5g，区别在于将3-氯苄胺替换成苄胺，得到浅黄色固体,综合产率84％。1h nmr(500mhz,cdcl3)δ7.46(m,2h),7.32
–
7.37(m,3h),7.22(m,2h),7.09
–
7.12(m,1h),7.00(m,2h),6.44(s,2h),5.76(s,2h),3.96(d,j＝2.0hz,2h),3.62(s,6h),2.94
–
2.97(t,j＝7.5hz 2h),2.33(m,1h),1.89(m,1h),1.68
–
1.58(m,2h),1.32(m,1h),1.13(m,1h),0.90(t,j＝7.4hz,3h).
13
c nmr(125mhz,cdcl3)δ171.37,159.63,158.91,152.30,152.05,142.97,134.58,128.89,128.60,128.54,128.08,125.69,125.16,114.08,97.83,55.60,50.76,41.25,40.82,33.52,31.93,29.71,29.32,25.24,22.70,17.28,14.13,13.38.esi-ms:calcd.c
32h35
n6o3s,[m+h]
+
m/z:583.25.
[0046]
实施例9：化合物5h的制备
[0047][0048]
按制备化合物5j的合成方法制备化合物5h，区别在于将3-氯苄胺替换成2-苯乙胺，得到灰色固体，综合产率68％。1h nmr(500mhz,cdcl3)δ7.29(m,3h),7.22
–
7.25(m,5h),7.12
–
7.15(m,1h),7.02(m,2h),6.56(s,2h),4.79(m,2h),3.89(m,2h),3.65(s,6h),3.32
–
3.36(t,j＝6.0hz,2h),2.81
–
2.84(t,j＝7.5hz,2h),2.40(m,1h),1.92(m,1h),1.54(m,2h),1.16(m,1h),1.02(m,1h),0.84(t,j＝7.4hz,3h).
13
c nmr(125mhz,cdcl3)δ170.74,159.58,152.49,152.22,142.23,138.94,137.09,128.78,128.73,128.29,126.97,125.71,125.50,123.62,104.97,56.03,54.12,48.08,41.34,35.72,33.50,25.21,22.80,17.30,13.48.esi-ms:calcd.c
33h37
n6o3s,[m+h]
+
m/z:597.26.
[0049]
实施例10：化合物5i的制备
[0050][0051]
按制备化合物5j的合成方法制备化合物5i，区别在于将3-氯苄胺替换成3-苯丙胺，得到浅黄色固体，综合产率71％。1hnmr(500mhz,cdcl3)δ7.28
–
7.30(m,3h),7.19
–
7.24(m,4h),7.12
–
7.15(m,1h),7.02(m,2h),6.57(s,2h),4.60(t,j＝7.0hz,2h),3.89(s,2h),3.66(s,6h),2.82(m,2h),2.71(t,j＝7.6hz,2h),2.36
–
2.41(m,3h),1.92(m,1h),1.52(m,2h),1.16(m,1h),1.03(m,1h),0.82(t,j＝7.3hz,3h).
13
c nmr(125mhz,cdcl3)δ170.67,159.58,152.55,152.25,142.22,140.37,138.93,128.67,128.50,128.47,128.29,126.21,125.71,125.51,123.65,104.95,56.03,54.12,46.40,41.32,33.51,32.75,30.80,25.20,
22.81,17.29,13.44.esi-ms:calcd.c
34h39
n6o3s,[m+h]
+
m/z:611.28.
[0052]
实施例11：化合物5k的制备
[0053][0054]
按制备化合物5j的合成方法制备化合物5k，区别在于将3-氯苄胺替换成4-氯苄胺，得到白色固体，综合产率65％。1hnmr(500mhz,cdcl3)δ7.40(m,2h),7.32(m,2h),7.23(m,2h),7.14(m,1h),7.02(m,2h),6.55(s,1h),5.69(s,2h),3.89(s,2h),3.64(s,6h),2.83(t,j＝7.2hz,2h),2.39(m,1h),1.92(m,1h),1.52
–
1.56(m,2h),1.15(m,1h),1.02(m,1h),0.84(t,j＝7.3hz,3h).
13
c nmr(125mhz,cdcl3)δ171.23,159.58,152.29,152.20,142.21,138.99,134.56,133.15,129.99,129.06,128.28,125.70,125.50,123.66,104.94,56.01,54.11,49.82,41.33,33.52,25.19,22.76,17.28,13.47.esi-ms:calcd.c
32h34
cln6o3s,[m+h]
+
m/z:617.21.
[0055]
实施例12：化合物5l的制备
[0056][0057]
按制备化合物5j的合成方法制备化合物5l，区别在于将3-氯苄胺替换成2-氯苄胺，得到白色固体，综合产率79％。1hnmr(500mhz,cdcl3)δ7.42(m,1h),7.12
–
7.24(m,6h),7.01(m,2h),6.56(s,2h),5.88(s,2h),3.89(s,2h),3.65(s,6h),2.85(t,j＝7.5hz,2h),2.39(m,1h),1.92(m,1h),1.55(m,2h),1.14
–
1.18(m,1h),1.02(m,1h),0.84(t,j＝7.4hz,3h).
13
c nmr(125mhz,cdcl3)δ171.27,159.64,152.64,152.22,142.23,138.97,133.40,132.43,129.96,129.76,129.72,128.66,128.28,127.16,125.71,125.49,123.51,104.99,56.04,54.13,47.74,41.35,33.47,25.20,22.71,17.29,13.46.esi-ms:calcd.c
32h34
cln6o3s,[m+h]
+
m/z:617.21.
[0058]
实施例13：化合物5m的制备
[0059][0060]
按制备化合物5j的合成方法制备化合物5m，区别在于将3-氯苄胺替换成环戊胺，得到类白色固体，综合产率65％。1h nmr(500mhz,cdcl3)δ7.23(m,2h),7.12
–
7.15(m,1h),7.02(m,2h),6.56(s,2h),5.26(t,j＝7.3hz,2h),4.31(t,j＝6.7hz,1h),3.89(m,2h),3.65
(s,6h),2.82
–
2.85(m,2h),2.40(m,1h),2.25
–
2.31(m,6h),2.04(m,3h),1.92(m,1h),1.79(m,2h),1.53(m,2h),1.16(m,2h),1.02(m,1h),0.96(m,1h),0.83(t,j＝7.4hz,3h).
13
c nmr(125mhz,cdcl3)δ170.09,159.54,152.28,152.23,142.24,138.93,128.73,128.28,125.71,125.49,123.92,104.96,59.17,56.03,54.13,41.33,33.49,32.53,25.22,24.58,22.83,17.30,13.43.esi-ms:calcd.c
30h36
n6o3s,[m+h]
+
m/z:561.26.
[0061]
实施例14：化合物5n的制备
[0062][0063]
按制备化合物5j的合成方法制备化合物5n，区别在于将3-氯苄胺替换成异丙胺，得到浅黄油状物，综合产率61％。1hnmr(500mhz,cdcl3)δ7.23(m,2h),7.14(m,1h),7.01(m,2h),6.56(s,2h),5.15(m,1h),3.89(s,2h),3.66(s,6h),2.84(t,j＝7.3hz,2h),2.40(m,1h),1.92(m,1h),1.71(d,j＝6.8hz,6h),1.55(m,2h),1.16(m,1h),1.02(m,1h),0.83(t,j＝7.3hz,3h).
13
c nmr(125mhz,cdcl3)δ170.12,159.52,152.29,151.92,142.21,138.85,128.73,128.28,125.72,125.50,104.99,56.04,54.10,50.99,41.30,33.50,25.18,22.81,22.02,17.26,13.44.esi-ms:calcd.c
56h69n12
o6s2,[m+h]
+
m/z:535.25.
[0064]
实施例15：化合物5o的制备
[0065][0066]
按制备化合物5j的合成方法制备化合物5o，区别在于将4,6-二氯-2-(丙硫基)嘧啶-5-胺替换成4,6-二氯-2-(炔丙硫基)嘧啶-5-胺，将3-氯苄胺替换成苄胺，得到灰色蜡状固体，综合产率69％。1h nmr(500mhz,cdcl3)δ7.51(m,2h),7.32
–
7.36(m,3h),7.23(m,2h),7.13(m,1h),7.02(m,2h),6.54(s,2h),5.75(s,2h),3.89(d,j＝1.3hz,2h),3.74(d,j＝2.6hz,2h),3.70(s,1h),3.63(s,6h),2.39(m,1h),2.11(m,1h),1.91(m,1h),1.16(m,1h),1.03(m,1h).
13
cnmr(125mhz,cdcl3)δ168.82,159.89,152.17,142.23,134.54,128.88,128.73,128.59,128.27,125.73,125.48,123.81,105.07,79.34,77.22,70.55,56.03,54.15,50.79,41.30,25.16,19.90,17.23.esi-ms:calcd.c
32h31
n6o3s,[m+h]
+
m/z:579.22.
[0067]
实施例16：lsd1抑制活性测试
[0068]
化合物5a～5o按照实施例1～15制备，纯度不低于98％，作为待测样品。阳性对照品为苯环丙胺。
[0069]
样品储备液：称取适量样品用dmso配制成浓度是20mm的溶液，4℃保存放置，实验时根据所需浓度用dmso稀释。
[0070]
将不同浓度的待测样品(1.25μl)与lsd1重组蛋白(0.25μm)于hepes缓冲液中室温
孵育10分钟，加入lsd1反应底物h3k4me2(2.5μl，终浓度为25μm)于37oc孵育反应30分钟。最后分别加入荧光染料amplex red溶液(0.1μl)和辣根过氧化酶hrp(1μl)室温孵育5分钟。然后在荧光酶标仪上激发光530nm、发射光590nm检测荧光强度。每板同时设定空白对照孔与100％对照孔。空白孔中样品与h3k4me2分别用1.25μl的dmso与2.5μl的缓冲液代替，100％孔中样品用1.25μl的dmso替代。根据如下公式计算不同浓度待测样品对lsd1蛋白的抑制率：
[0071][0072]
根据不同浓度待测样品对lsd1蛋白的抑制率，采用spss软件计算待测样品对lsd1蛋白抑制作用的ic
50
值，当化合物在1μm时抑制率超过80％才进行ic
50
测定和计算。实验结果如表1所示，其中nc表示未测ic
50
值。
[0073]
表1化合物5a～5o对lsd1蛋白的抑制作用
[0074][0075]
上述结果表明，化合物5a～5o具有较强的lsd1抑制活性，且化合物5j最强，ic
50
值为0.046μm，显著优于阳性对照苯环丙胺。
[0076]
实施例21：抗肿瘤活性测试
[0077]
以lsd1抑制活性最强的化合物5j为例，测试了其对不同肿瘤细胞的抑制活性。化合物5j按照实施例1制备，纯度不低于98％。
[0078]
化合物5j储备液：称取适量化合物1用dmso配制成浓度是20mm的溶液，4℃保存放置，实验时根据所需浓度用dmso稀释。
[0079]
取对数生长期的细胞，消化计数后，用培养基调整细胞密度，以4000-8000个cell/孔接种至96孔板中，每孔100μl，培养24h后，弃去培养基，加入用培养基稀释好的药物，每个浓度设3个复孔，另设空白对照组。药物作用72h后，每孔加入20μlmtt溶液，继续培养4h后，吸去液体，加入150μl的dmso，振荡均匀，酶标仪490nm处检测吸光度值，计算不同浓度化合物5j对不同肿瘤细胞的抑制率，计算公式如下：
[0080]
抑制率(％)＝(1-给药组吸光度值/空白组吸光度值)
×
100％
[0081]
根据不同浓度化合物5j对不同肿瘤细胞的抑制率，采用spss软件计算化合物5j对不同肿瘤细胞抑制作用的ic
50
值。实验结果如表2所示。
[0082]
表2化合物5j对不同肿瘤细胞抑制作用的ic
50
值
[0083]
肿瘤细胞株肿瘤类型ic
50
(μm)
mgc-803胃癌5.1sgc-7901胃癌9.5mcf-7乳腺癌13.4.h1650肺癌4.3a549肺癌7.9h460肺癌13.6pc-3前列腺癌7.5ec-109食管癌15.2
[0084]
结果表明，化合物5j对胃癌mgc-803、胃癌sgc-7901、乳腺癌mcf-7、肺癌h1650、肺癌a549、肺癌h460、前列腺癌pc-3和食管癌ec-109细胞具有较强的抑制活性，因此，化合物5j具有开发成抗胃癌、乳腺癌、肺癌、食管癌和前列腺癌药物的前景。
[0085]
上述实施例的作用在于具体介绍本发明的实质性内容，但本领域技术人员应当知道，不应将本发明的保护范围局限于该具体实施例。