一种猪流行性腹泻病毒和致病性大肠杆菌二联灭活疫苗的检测工艺的制作方法

1.本发明涉及一种猪流行性腹泻病毒和致病性大肠杆菌二联灭活疫苗的检测工艺，属于疫苗检测技术领域。


背景技术：

2.猪流行性腹泻是由猪流行性腹泻病毒感染引起的一种急性、高度接触性的猪肠道传染病，可感染各年龄的猪，导致动物出现呕吐、水样腹泻及脱水等临床症状，以仔猪的感染最为严重，病死率可达80％-100％，给养猪业造成了巨大的经济损失；
3.致病性大肠杆菌分为侵入型和毒素型两类，前者引起的腹泻与痢疾杆菌引起的痢疾相似，一般称为急性痢疾型；后者所引起的腹泻为胃肠炎型，一般称为急性胃肠炎型，致病性大肠杆菌以及猪流行性腹泻病毒都会引起猪的腹泻，导致猪的死亡；
4.中国发明专利：cn202110043464.0，所公开的“猪流行性腹泻病毒和致病性大肠杆菌二联灭活疫苗的研制方法”，其说明书公开：疫苗的效力试验，2.1.材料与方法：用产前30～45日龄妊娠母猪10头，随机分成2组，每组5头；第1组颈部肌肉注射二联灭活疫苗2ml/头，产前20日加强免疫1次，2ml/头，作为免疫组；第2组作为对照组....；上述专利在对疫苗进行检测前的选猪环节，缺乏对猪的检测以及处理，由于猪舍内环境存在细菌和病毒，这些选取的猪存在已经感染病毒和细菌的情况，进而影响检测结果的准确性。
5.因此我们对此做出改进，提出一种猪流行性腹泻病毒和致病性大肠杆菌二联灭活疫苗的检测工艺。


技术实现要素：

6.(一)本发明要解决的技术问题是：选猪环节缺乏对猪的检测以及处理，选取的猪存在已经感染病毒和细菌的情况，进而影响检测结果准确性的问题。
7.(二)技术方案
8.为了实现上述发明目的，本发明提供了一种猪流行性腹泻病毒和致病性大肠杆菌二联灭活疫苗的检测工艺，包括：
9.s1、检测前的准备，取40-45日龄小猪30只，对小猪表面以及口腔进行清洗消毒，消毒后的小猪置于消毒后的猪舍中饲养36小时；
10.s2、采集猪粪便以及血液进行检测，并对小猪进行肠镜检测，确认小猪是否带有猪流行性腹泻病毒和致病性大肠杆菌，且确认小猪肠道内是否发生病变，选取不带猪流行性腹泻病毒和致病性大肠杆菌的小猪20只，随机等分为四组，四组小猪分别编号为一、二、三以及四；
11.s3、一号组小猪注射猪流行性腹泻病毒和致病性大肠杆菌二联灭活疫苗，二号组小猪注射猪流行性腹泻病毒和致病性大肠杆菌，三号组注射猪流行性腹泻病毒，四号组注射致病性大肠杆菌，饲养并采集粪便、血液以及肠道镜检；
12.s4、向一号组小猪注射猪流行性腹泻病毒和致病性大肠杆菌，二号组、三号组以及四号组均注射猪流行性腹泻病毒和致病性大肠杆菌二联灭活疫苗，饲养并采集粪便、血液以及肠道镜检。
13.其中，s1中对猪的口腔清洗消毒的步骤为：
14.先用清水冲洗猪口腔中的残留物，再用0.15％的高锰酸钾溶液冲洗猪的口腔进行消毒。
15.其中，s1中对猪表面的清洗消毒的步骤为：
16.先用清水冲洗掉猪表面可见的污渍，然后使用刷子和清洁剂对猪的表面进行刷洗，然后将刷洗后的猪浸泡于0.15％的高锰酸钾溶液中，浸泡时间为5-10分钟。
17.其中，s1中猪清洗消毒后饲养的温度为24度，湿度为70％。
18.其中，s1、s2、s3以及s4中，饲养过程中每组小猪准备两个猪舍轮换，轮换时间为24小时，并对轮换后的猪舍进行清洗消毒。
19.其中，s2中，在对小猪进行抽血以及肠镜检测前停止喂食八小时。
20.其中，s3中，四组小猪的饲养时间不少于七天。
21.其中，s3中，每只小猪注射猪流行性腹泻病毒和致病性大肠杆菌二联灭活疫苗的量为0.5ml，二号组、三号组以及四号组中每组小猪的注射量为4ml。
22.其中，s4中，小猪的饲养时间不少于七天。
23.其中，s4中，一号组每只小猪的注射量为4ml，二号组、三号组以及四号组中每组小猪的注射量为0.5ml。
24.(三)有益效果
25.本发明所提供的一种猪流行性腹泻病毒和致病性大肠杆菌二联灭活疫苗的检测工艺，其有益效果是：
26.1.通过在检测前对选取的小猪进行表面以及口腔的清洗消毒，能够去除小猪表面以及口腔中的细菌和病毒，从而能够减少外界细菌和病毒对检测结果的影响，进而能够提高检测结果的准确性；
27.2.通过清洗消毒后对小猪饲养，再进行粪便、血液以及肠道的检测，能够确保挑选的用于检测的小猪为健康的小猪，从而减少小猪自身携带流行性腹泻病毒和致病性大肠杆菌对检测结果的影响，进一步提高了检测结果的准确性；
28.3.通过对一号组小猪注射猪流行性腹泻病毒和致病性大肠杆菌二联灭活疫苗、二号组小猪注射猪流行性腹泻病毒和致病性大肠杆菌、三号组小猪注射猪流行性腹泻病毒、四号组小猪注射致病性大肠杆菌，能够检测注射疫苗后小猪的健康状况、同时感染病毒和大肠杆菌的小猪状况、单独感染病毒以及单独感染大肠杆菌的小猪状况，为疫苗的作用提供有效的参考；
29.4.通过对一号组小猪注射猪流行性腹泻病毒和致病性大肠杆菌，二号组、三号组以及四号组注射猪流行性腹泻病毒和致病性大肠杆菌二联灭活疫苗，能够检测疫苗对同时感染病毒和大肠杆菌的小猪的效果，能够检测疫苗对单独感染猪流行性腹泻病毒的效果，能够检测疫苗对单独感染大肠杆菌的效果。
附图说明
30.为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单的介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
31.图1为本技术提供的猪流行性腹泻病毒和致病性大肠杆菌二联灭活疫苗的检测工艺的流程示意图；
32.图2为本技术提供的s3步骤中血液中猪流行性腹泻病毒含量的示意图；
33.图3为本技术提供的s4步骤中血液中猪流行性腹泻病毒含量的示意图；
34.图4为本技术提供的s3步骤中粪便中致病性大肠杆菌含量的示意图；
35.图5为本技术提供的s4步骤中粪便中致病性大肠杆菌含量的示意图。
具体实施方式
36.下面结合说明书附图和实施例，对本发明的具体实施方式做进一步详细描述。以下实施例仅用于说明本发明，但不能用来限制本发明的范围。
37.实施例1：
38.如图1所示，本实施方式提出一种猪流行性腹泻病毒和致病性大肠杆菌二联灭活疫苗的检测工艺，包括：
39.s1、检测前的准备，取40-45日龄小猪30只，对小猪表面以及口腔进行清洗消毒，消毒后的小猪置于消毒后的猪舍中饲养36小时；
40.s2、采集猪粪便以及血液进行检测，并对小猪进行肠镜检测，确认小猪是否带有猪流行性腹泻病毒和致病性大肠杆菌，且确认小猪肠道内是否发生病变，选取不带猪流行性腹泻病毒和致病性大肠杆菌的小猪20只，随机等分为四组，四组小猪分别编号为一、二、三以及四；
41.s3、一号组小猪注射猪流行性腹泻病毒和致病性大肠杆菌二联灭活疫苗，二号组小猪注射猪流行性腹泻病毒和致病性大肠杆菌，三号组注射猪流行性腹泻病毒，四号组注射致病性大肠杆菌，饲养并采集粪便、血液以及肠道镜检，粪便以及血液的检测结果如图2和图4所示；镜检结果如下：一号组1-7日镜检小猪肠道无异常，而二号组、三号组以及四号组自第二日起均出现小肠扩张、内充满黄色液体以及肠系膜淋巴结水肿的状况，且状况逐日加重；
42.s4、向一号组小猪注射猪流行性腹泻病毒和致病性大肠杆菌，二号组、三号组以及四号组均注射猪流行性腹泻病毒和致病性大肠杆菌二联灭活疫苗，饲养并采集粪便、血液以及肠道镜检，粪便以及血液的检测结果如图3和图5所示；镜检结果如下：一号组1-7日镜检小猪肠道无异常，而二号组、三号组以及四号组自第一日均是小肠扩张、内充满黄色液体以及肠系膜淋巴结水肿的状况，但状况逐日减轻。
43.实施例2：
44.下面结合具体的工作方式对实施例1中的方案进行进一步的介绍，详见下文描述：
45.作为优选的实施方式，在上述方式的基础上，进一步的，s1中对猪的口腔清洗消毒的步骤为：
46.先用清水冲洗猪口腔中的残留物，再用0.15％的高锰酸钾溶液冲洗猪的口腔进行消毒，通过0.15％的高锰酸钾溶液对猪口腔的冲洗消毒，能够减少猪口腔中带有的细菌以及病毒，从而减少检测的误差，提高检测结果的准确性；
47.高锰酸钾是一种强氧化剂，为黑紫色结晶，带蓝色的金属光泽，无臭，与某些有机物或易氧化物接触，易发生爆炸，溶于水、碱液，微溶于甲醇、丙酮、硫酸。在化学品生产中，广泛用作氧化剂，通过氧化菌体的活性基团，呈现杀菌作用，高锰酸钾能有效杀灭各种细菌繁殖体、真菌、结核杆菌；亦能灭活乙型肝炎病毒和芽孢，但对芽孢作用需要较长时间，有机物加热，在酸或碱性条件中均能加速氧化反应，在不同ph值条件下氧化反应有所区别，在酸性溶液中本身被还原为无色的二价锰化合物；在中性或碱性溶液中被还原成褐色的二氧化锰和蛋白复合物沉淀，低浓度具有抗菌、收敛、止血、除臭等功效，高浓度则有刺激性与腐蚀性，其抗菌作用比过氧化氢强。
48.作为优选的实施方式，在上述方式的基础上，进一步的，s1中对猪表面的清洗消毒的步骤为：
49.先用清水冲洗掉猪表面可见的污渍，然后使用刷子和清洁剂对猪的表面进行刷洗，然后将刷洗后的猪浸泡于0.15％的高锰酸钾溶液中，浸泡时间为5-10分钟，先用清水冲洗掉可见的污渍后再进行消毒，能够减少高锰酸钾溶液的用量，在清洗过程中针对猪蹄、肛门以及生殖器官处进行更为仔细的清洗。
50.作为优选的实施方式，在上述方式的基础上，进一步的，s1中猪清洗消毒后饲养的温度为24度，湿度为70％，该温度以及湿度是针对猪的养殖而言是较为合适的环境，满足猪的生长对环境的需求；
51.在高温高湿的情况下，猪因体热散失困难，导致食欲下降，采食量显著减少，甚至中暑死亡，而在低温高湿时，猪体的散热量大增，猪就越觉寒冷，相应地猪的增重、生长发育就越慢；
52.此外，空气湿度过高，有利于病原性真菌、细菌和寄生虫的发育，同时，猪体的抵抗力阵低.易患疥癣、湿疹等皮肤病，呼吸道疾病的发病率也较高，如空气湿度过低，也会导致猪体皮肤干燥、开裂；因此在适宜的温度下，湿度大小对猪的生产力影响不大，主要是从疾病的发生上起间接作用。
53.作为优选的实施方式，在上述方式的基础上，进一步的，s1、s2、s3以及s4中，饲养过程中每组小猪准备两个猪舍轮换，轮换时间为24小时，并对轮换后的猪舍进行清洗消毒，通过对猪舍的轮换能够方便对猪舍进行消毒，减少猪舍内细菌和病毒的滋生，从而利于猪的生长。
54.实施例3：
55.下面结合具体的工作方式对实施例1和实施例2中的方案进行进一步的介绍，详见下文描述：
56.作为优选的实施方式，在上述方式的基础上，进一步的，s2中，在对小猪进行抽血以及肠镜检测前停止喂食八小时，停止喂食能够减少猪肠道内排泄物的堆积，从而方便镜检。
57.作为优选的实施方式，在上述方式的基础上，进一步的，s3中，四组小猪的饲养时间不少于七天，通过采集七天内四组小猪的健康信息，能够为检测结果提供大量的数据支
撑，进而提高检测结果的准确性以及可靠性。
58.作为优选的实施方式，在上述方式的基础上，进一步的，s3中，每只小猪注射猪流行性腹泻病毒和致病性大肠杆菌二联灭活疫苗的量为0.5ml，二号组、三号组以及四号组中每组小猪的注射量为4ml，能够检测注射疫苗后小猪的健康状况、同时感染病毒和大肠杆菌的小猪状况、单独感染病毒以及单独感染大肠杆菌的小猪状况，为疫苗的作用提供有效的参考。
59.作为优选的实施方式，在上述方式的基础上，进一步的，s4中，小猪的饲养时间不少于七天，通过采集七天内四组小猪的健康信息，能够为检测结果提供大量的数据支撑，进而提高检测结果的准确性以及可靠性。
60.作为优选的实施方式，在上述方式的基础上，进一步的，s4中，一号组每只小猪的注射量为4ml，二号组、三号组以及四号组中每组小猪的注射量为0.5ml，能够检测疫苗对同时感染病毒和大肠杆菌的小猪的效果，能够检测疫苗对单独感染猪流行性腹泻病毒的效果，能够检测疫苗对单独感染大肠杆菌的效果。
61.以上实施方式仅用于说明本发明，而非对本发明的限制。尽管参照实施例对本发明进行了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，对本发明的技术方案进行各种组合、修改或者等同替换，都不脱离本发明技术方案的精神和范围，均应涵盖在本发明的权利要求范围当中。