一种中国被毛孢液体培养基及其制备方法

1.本发明属于食用菌栽培领域，具体涉及一种冬虫夏草无性型中国被毛孢的液体培养基及其制备方法。


背景技术：

2.冬虫夏草(ophiocordyceps sinensis)是一种真菌(中国被毛孢)和蝙蝠蛾幼虫的寄生复合体，属于鳞翅目，蝙蝠蛾科。冬虫夏草来源于中国被毛孢的生长过程：蝙蝠蛾幼虫最初在春夏季节被中国被毛孢菌感染，侵入蝙蝠蛾幼虫体内，以蝙蝠蛾幼虫为营养，到冬天中国被毛孢菌丝体充满了整个虫体后变成僵虫，因此被称为冬虫。在接下来的春夏季节，基质发芽，然后从幼虫的头部生长，产生所谓的夏草。
3.中国被毛孢(hirsutella sinensis)是冬虫夏草中一种优势无性型。中国被毛孢作为无性体的培养，在室内条件下生长速度极其缓慢。因其芽生孢子生长较少，因此主要需要通过培养基成分的研发来实现其芽生孢子生长速度的提高。
4.有效提高中国被毛孢芽生孢子的生长效率，可能为目前冬虫夏草子实体人工繁殖技术提供助力。因此，需要研发一种适用于液体培养的中国被毛孢的专用液体培养基。


技术实现要素：

5.为了克服现有真菌培养基的不足之处，本发明提供了一种中国被毛孢液体培养基及其培养方法，采用廉价易得的材料，一般菌种培养设备的实验室均可实现制作。
6.本发明是通过如下技术方案实施的：
7.第一方面，本发明提供一种中国被毛孢液体培养基，由以下终浓度的各组分组成：
8.麦芽膏10g/l、蛋白胨10g/l、糊精5g/l、酵母粉5g/l、kh2po
4 1.2g/l、无水mgso
4 0.6g/l，溶剂为水，ph自然。
9.第二方面，本发明提供一种上述中国被毛孢液体培养基的制备方法，所述方法为：
10.将组方量的麦芽膏、蛋白胨、糊精、酵母粉、kh2po4、无水mgso4于水中混匀，定容，115℃灭菌30min，冷却至室温即得所述中国被毛孢液体培养基。
11.第三方面，本发明提供的上述中国被毛孢液体培养基在培养中国被毛孢(hirsutella sinensis)芽生孢子中的应用。
12.进一步，所述的应用为：按4％的体积接种量将od值为2.4的中国被毛孢菌液接入所述中国被毛孢液体培养基中，黑暗条件下、16℃，100rpm培养14天。
13.与现有技术相比，本发明的有益效果在于：本发明提供的中国被毛孢培养基及其培养方法，能够大规模推广使用。
14.本发明与传统的培养基和培养方法相比，制作方法简便，中国被毛孢芽生孢子生长更好，能高效应用于中国被毛孢芽生孢子的培养。
附图说明
15.图1为本发明实施例1的液体培养基的培养结果。
16.图2为实施例2的液体培养基的培养结果。
17.图3为实施例3的液体培养基的培养结果。
18.图4为试验例1的液体培养基的培养结果。
19.图5为试验例2的液体培养基的培养结果。
20.图6为试验例3的液体培养基的培养结果。
21.图7为试验例4的液体培养基的培养结果。
22.图8为试验例5的液体培养基的培养结果。
具体实施方式
23.以下结合具体实施例对本发明进行进一步说明。
24.本发明实施例中所用糊精为麦芽糖糊精，购于上海麦克林生化有限公司。
25.实施例：
[0026][0027]
将上述培养基的原料置于容器中，使物料溶解，混匀，加水定容至1l，115℃灭菌30min，灭菌后稍冷却，得到中国被毛孢液体培养基；
[0028]
实施例中的液体培养基分别按液体培养基的4％接入中国被毛孢菌液(od
600
约为2.4)，在16℃下避光培养14天，进行比较，结果如图1、图2和图3所示。
[0029]
中国被毛孢菌液制备过程：固体pda平板挑取六七个1平方厘米菌块，接种于液体种子液培养基(成分：葡萄糖15g/l、蛋白胨10g/l、糊精5g/l、酵母粉5g/l、kh2po
4 1.2g/l、无水mgso
4 0.6g/l，溶剂为水)培养9-11天至菌丝体密布，整体呈现一个均匀的状态，此时取1ml种子液，经手持破碎仪破碎至均质状态，测得od
600
为2.4。
[0030]
从图1和图2可以看出，接种在本发明培养基的中国被毛孢产生大量芽生孢子，而接种在以麦芽糖替换本实施例中麦芽膏的液体培养基中的中国被毛孢几乎不产芽生孢子。
[0031]
从图1和图3可以看出，接种在本发明培养基的中国被毛孢产生大量芽生孢子，而接种在以葡萄糖替换本实施例中麦芽膏的液体培养基中的中国被毛孢几乎不产芽生孢子。
[0032]
将实施例1、2和3液体培养基中国被毛孢芽生孢子数据进行统计，结果如下：
[0033][0034]
试验例：
[0035][0036]
从图4至图8可以看出，接种在10g/l麦芽膏培养基中的中国被毛孢产生大量芽生孢子，而接种在其它浓度麦芽膏液体培养基中的中国被毛孢几乎不产芽生孢子。
[0037]
将试验例1至5液体培养基中国被毛孢芽生孢子数据进行统计，结果如下：
[0038]
培养基芽生孢子浓度(个/ml)试验例1液体培养基4.0
×
104试验例2液体培养基1.0
×
106试验例3液体培养基3.6
×
105试验例4液体培养基2.4
×
105试验例5液体培养基1.6
×
105[0039]
以上所述，仅为本发明的较佳的具体实施例，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围内。


技术特征：
1.一种中国被毛孢液体培养基，其特征在于所述中国被毛孢液体培养基由以下终浓度的各组分组成：麦芽膏10g/l、蛋白胨10g/l、糊精5g/l、酵母粉5g/l、kh2po
4 1.2g/l、无水mgso
4 0.6g/l，溶剂为水，ph自然。2.如权利要求1所述的中国被毛孢液体培养基的制备方法，其特征在于所述方法为：将组方量的麦芽膏、蛋白胨、糊精、酵母粉、kh2po4、无水mgso4于水中混匀，定容，115℃灭菌30min，冷却至室温即得所述中国被毛孢液体培养基。3.如权利要求1所述的中国被毛孢液体培养基在培养中国被毛孢芽生孢子中的应用。4.如权利要求3所述的应用，其特征在于所述的应用为：按4％的体积接种量将od值为2.4的中国被毛孢菌液接入所述中国被毛孢液体培养基中，黑暗条件下、16℃，100rpm培养14天。

技术总结
本发明提供一种中国被毛孢液体培养基，能够大规模推广使用。与传统的培养基和培养方法相比，制作方法简便，中国被毛孢芽生孢子生长更好，能高效应用于中国被毛孢芽生孢子的培养。养。


技术研发人员：柳志强 周斌 赵嫚 杨雨瑞 郑裕国
受保护的技术使用者：浙江工业大学
技术研发日：2022.12.28
技术公布日：2023/3/21