本发明涉及蛋白质纯化，尤其涉及一种重组蛋白的纯化方法。
背景技术：
1、促卵泡激素是垂体前叶嗜碱性细胞分泌的一种激素，成分为糖蛋白，主要作用为促进卵泡成熟。促卵泡激素可促进卵泡颗粒层细胞增生分化，并促进整个卵巢长大，而其作用于睾丸曲细精管则可促进精子形成。通过基因重组技术获得的重组人促卵泡激素相较于尿液中提取获得的尿促卵泡激素，纯度更高且避免了尿蛋白等杂质的污染。
2、目前，重组人促卵泡激素的纯化主要通过反相层析等步骤实现，但是反相层析所使用的有机溶剂会导致重组蛋白不可逆的变性。
3、因此，亟需一种重组蛋白的纯化方法。
技术实现思路
1、本发明的目的是针对现有技术中的不足，提供一种重组蛋白的纯化方法。
2、为实现上述目的，本发明采取的技术方案是：
3、本发明的第一方面是提供一种重组蛋白的纯化方法，所述重组蛋白为重组人促卵泡激素，步骤包括：
4、对收集获得的细胞培养液进行微滤处理，并依次进行亲和层析处理、疏水层析处理、分子筛层析处理、羟基磷灰石层析处理以及阴离子交换层析处理后，进行纳滤处理，即得纯化后的重组人促卵泡激素。
5、优选地，所述微滤处理包括：滤膜孔径为0.1μm-0.3μm。
6、优选地，所述亲和层析处理包括：上样流速为120cm/h-360cm/h；洗脱溶液为tris-hcl缓冲液，所述洗脱溶液还包括：nacl、na2so4、na3po3、mgcl2或(nh4)2so4中的至少一种，所述洗脱溶液的ph值为6.0-8.0。
7、优选地，所述疏水层析处理包括：上样流速为120cm/h-360cm/h；层析基质为苯基凝胶phenyl-hp或capto phenyl中的至少一种；洗脱溶液为tris-hcl缓冲液，所述洗脱溶液还包括：nacl、na2so4、na3po3、mgcl2或(nh4)2so4中的至少一种，所述洗脱溶液的ph值为6.0-8.0。
8、优选地，所述分子筛层析处理包括：上样流速为120cm/h-360cm/h；层析基质为g-15或g-25中的至少一种；洗脱溶液为tris-hcl缓冲液，所述洗脱溶液还包括：nacl、na2so4、na3po3、mgcl2或(nh4)2so4中的至少一种，所述洗脱溶液的ph值为6.0-8.0。
9、优选地，所述羟基磷灰石层析处理包括：上样流速为120cm/h-360cm/h；层析基质为cht陶瓷羟基磷灰石、cft氟代羟基磷灰石或bio-gel羟基磷灰石中的至少一种；洗脱溶液为tris-hcl缓冲液，所述洗脱溶液还包括：nacl、na2so4、na3po3、mgcl2或(nh4)2so4中的至少一种，所述洗脱溶液的ph值为6.0-8.0。
10、优选地，所述阴离子交换层析处理包括：上样流速为120cm/h-360cm/h；层析基质为capto-q、capto deae、capto q impres、q sepharose ff、q sepharose hp或deaesepharose ff中的至少一种；洗脱溶液为tris-hcl缓冲液，所述洗脱溶液还包括：nacl、na2so4、na3po3、mgcl2或(nh4)2so4中的至少一种，所述洗脱溶液的ph值为6.0-8.0。
11、优选地，所述纳滤处理包括：滤膜孔径为1nm-2nm。
12、本发明的第二方面是提供一种采用如前所述纯化方法制得的重组人促卵泡激素。
13、本发明采用以上技术方案，与现有技术相比，具有如下技术效果：
14、本发明的纯化方法通过多种层析方式依次处理，各种层析处理之间相互补充，以去除细胞培养液中的宿主蛋白、外源性dna以及内毒素等杂质，最终得到的重组人促卵泡激素纯度高于99.98％，在未引入任何有机溶剂的基础上，工艺简单而快速，易于大规模生产。
1.一种重组蛋白的纯化方法，所述重组蛋白为重组人促卵泡激素，其特征在于，步骤包括：
2.根据权利要求1所述的纯化方法，其特征在于，所述微滤处理包括：滤膜孔径为0.1μm-0.3μm。
3.根据权利要求1所述的纯化方法，其特征在于，所述亲和层析处理包括：上样流速为120cm/h-360cm/h；洗脱溶液为tris-hcl缓冲液，所述洗脱溶液还包括：nacl、na2so4、na3po3、mgcl2或(nh4)2so4中的至少一种，所述洗脱溶液的ph值为6.0-8.0。
4.根据权利要求1所述的纯化方法，其特征在于，所述疏水层析处理包括：上样流速为120cm/h-360cm/h；层析基质为苯基凝胶phenyl-hp或capto phenyl中的至少一种；洗脱溶液为tris-hcl缓冲液，所述洗脱溶液还包括：nacl、na2so4、na3po3、mgcl2或(nh4)2so4中的至少一种，所述洗脱溶液的ph值为6.0-8.0。
5.根据权利要求1所述的纯化方法，其特征在于，所述分子筛层析处理包括：上样流速为120cm/h-360cm/h；层析基质为g-15或g-25中的至少一种；洗脱溶液为tris-hcl缓冲液，所述洗脱溶液还包括：nacl、na2so4、na3po3、mgcl2或(nh4)2so4中的至少一种，所述洗脱溶液的ph值为6.0-8.0。
6.根据权利要求1所述的纯化方法，其特征在于，所述羟基磷灰石层析处理包括：上样流速为120cm/h-360cm/h；层析基质为cht陶瓷羟基磷灰石、cft氟代羟基磷灰石或bio-gel羟基磷灰石中的至少一种；洗脱溶液为tris-hcl缓冲液，所述洗脱溶液还包括：nacl、na2so4、na3po3、mgcl2或(nh4)2so4中的至少一种，所述洗脱溶液的ph值为6.0-8.0。
7.根据权利要求1所述的纯化方法，其特征在于，所述阴离子交换层析处理包括：上样流速为120cm/h-360cm/h；层析基质为capto-q、capto deae、capto qimpres、q sepharoseff、q sepharose hp或deae sepharose ff中的至少一种；洗脱溶液为tris-hcl缓冲液，所述洗脱溶液还包括：nacl、na2so4、na3po3、mgcl2或(nh4)2so4中的至少一种，所述洗脱溶液的ph值为6.0-8.0。
8.根据权利要求1所述的纯化方法，其特征在于，所述纳滤处理包括：滤膜孔径为1nm-2nm。
9.一种采用如权利要求1-8任一项所述纯化方法制得的重组人促卵泡激素。