本发明属于生物,具体涉及一种海洋菌发酵高产六氢环庚烷灵菌红素的培养基及方法。
背景技术:
1、1929年,amak从沙雷氏菌(serratia sp.)中发现灵菌红素( prodigiosin,pg),灵菌红素主要是微球菌、弧菌、沙雷氏菌、假交替单胞菌等细菌产生的次级代谢产物,具有3个吡咯环组成的甲氧基吡咯骨架结构,是一类天然红色素的总称。目前已知确定结构的有prodigiosin(pg)、undecylprodigiosin(up)、cylononyl-prodiginine(cprg)、metacycloprodigiosin(mp)和six hydrogen cycloheptane prodigiosin(shcpg六氢环庚烷灵菌红素)等12种,其中shcpg为本实验室最新分离得到新化合物。研究表明,灵菌红素具有抗菌、抗疟疾、抗肿瘤、免疫调节等作用,尤其对多种肿瘤细胞有显著的抑制作用,而对正常细胞不具有毒性,并且在非细胞毒性作用浓度下能够抑制肿瘤细胞的浸润,表现为抗肿瘤细胞转移的作用,有望成为一种新型的抗肿瘤和抗肿瘤转移药物。2007 年美国gemin x制药公司以pg为先导开发的灵菌红素类抗肿瘤专利药物奥巴拉克gx15-070 已经进入临床ⅲ期研究。
2、不同结构灵菌红素的抗肿瘤活性存在差异,不同结构灵菌红素抗肿瘤机制有差异。本专利发明了spartinivicinus ruber s2-4-1h菌(该菌株已于2019年04月17日保藏于中国海洋微生物菌种保藏管理中心,保藏中心登记入册编号:mccc1k03745)高产shcpg的培养基及培养方法。红色米草周生菌株可同时产生两种灵菌红素:c22h29n3o和c22h27n3o,其中c22h27n3o(shcpg)是新的化合物,新菌株已申请国家发明专利,新化合物已获专利授权。
3、
4、2020年本团队对shcpg进行了初步抗肿瘤活性研究,结果表明,对a549肿瘤细胞抑制的ic50值为0.2261±0.0261µmol/l,其抑制效果是pg的25倍、顺铂的42倍,具有极高的研究价值和抗肿瘤新药开发的潜力。
技术实现思路
1、本发明的目的在于提供一种海洋菌发酵高产六氢环庚烷灵菌红素的培养基及方法。
2、为了达到上述目的,本发明采取以下技术措施:
3、一种海洋菌发酵高产六氢环庚烷灵菌红素的培养基,所述的培养基的组成为:碳源2g/l,氮源4g/l,氯化钠15.618g/l,氯化镁7.74g/l,硫酸镁3g/l,柠檬酸铁0.22g/l,氯化钙1.16g/l,氯化钾0.55g/l,碳酸钠0.16g/l,溴化钾0.08g/l,氯化锶34.0mg/l,硼酸22.0mg/l,硅酸钠4.0mg/l,氟化钠2.4mg/l,硝酸钾1.6mg/l,磷酸氢二钠8.0mg/l,其余为水;ph 7.74,总盐度2.86%。
4、以上所述的培养基中,优选的,所述的碳源为花生油。
5、以上所述的培养基中,优选的,所述的氮源为蛋白胨。
6、上述一种培养基在海洋菌发酵生产六氢环庚烷灵菌红素中的应用。
7、以上所述的应用中,优选的,所述的海洋菌为红色米草根际细菌s2-4-1 hmb,其分类命名为 spartinivicinus ruber s2-4-1 hmb,保藏于广东省微生物菌种保藏中心,保藏编号为gdmcc no:60932,保藏日期为2019年12月11日,保藏地址为中国广州市先烈中路100号大院59号楼5楼,该菌株已在申请号为cn202010067965.8中所公开。
8、以上所述的应用中,优选的,在应用过程中的发酵培养条件为:培养温度28℃,发酵时间48h。
9、本发明的显著优点在于:
10、本发明提供了一种能极大提高spartinivicinus ruber s2-4-1ht菌产灵菌红素的培养基配方及发酵培养方法,通过特定的培养基成分与发酵条件配合,使海洋菌红色米草根际细菌s2-4-1 hmb代谢产物六氢环庚烷灵菌红素产量大幅提高。
1.一种海洋菌发酵高产六氢环庚烷灵菌红素的培养基,其特征在于:所述的培养基的组成为:碳源2g/l,氮源4g/l,氯化钠15.618g/l,氯化镁7.74g/l,硫酸镁3g/l,柠檬酸铁0.22g/l,氯化钙1.16g/l,氯化钾0.55g/l,碳酸钠0.16g/l,溴化钾0.08g/l,氯化锶34.0mg/l,硼酸22.0mg/l,硅酸钠4.0mg/l,氟化钠2.4mg/l,硝酸钾1.6mg/l,磷酸氢二钠8.0mg/l,其余为水;ph 7.74,总盐度2.86%。
2.根据权利要求1所述的培养基,其特征在于:所述的碳源为花生油。
3.根据权利要求1所述的培养基,其特征在于:所述的氮源为蛋白胨。
4.如权利要求1所述的培养基在海洋菌发酵生产六氢环庚烷灵菌红素中的应用。
5.根据权利要求4所述的应用,其特征在于:所述的海洋菌为红色米草根际细菌s2-4-1hmb,其分类命名为spartinivicinus ruber s2-4-1 hmb,保藏于广东省微生物菌种保藏中心,保藏编号为gdmcc no:60932,保藏日期为2019年12月11日,保藏地址为中国广州市先烈中路100号大院59号楼5楼。
6.根据权利要求4所述的应用,其特征在于:在应用过程中的发酵培养条件为:培养温度28℃,发酵时间48h。