一种重组III型胶原蛋白、核酸、表达载体、菌株及其应用的制作方法

本发明涉及生物，特别涉及一种重组iii型胶原蛋白、核酸、表达载体、菌株及其应用。

背景技术：

1、胶原蛋白是体内含量最多的一种蛋白质，约占人体蛋白质的25％～33％，其广泛分布于人体各个组织器官，如皮肤、骨骼、角膜、血管等，尤其在皮肤等组织中，含有大量的胶原蛋白，胶原蛋白作为一种结缔组织的粘合物质，对维护细胞、组织、器官的正常生理功能具有重要作用。目前已知的胶原有29种。不同类型胶原蛋白在球状结构域的形状，三重螺旋结构的间隔和胶原蛋白的大子长度上有所不同。

2、正常人约有90％的胶原存在于皮肤和骨头中，不同类型和不同部位的胶原在组织支撑、细胞间信号传递等方面发挥着重要功能。传统生产胶原的方式使采用动物皮肤、组织或骨头等原料进行提取。但是，这种传统提取制备动物源胶原的方法有诸多的安全隐患，比如，因为疯牛病、口蹄疫、猪瘟疫等可能存在的致病因子引起人畜共患的疾病；而且不同批次原料稳定性也难以保证；同时这种方式带来了诸多的污染，生产方式不环保；基于上述缺点传统胶原获取方式限制了胶原蛋白的进一步应用。

技术实现思路

1、本发明的主要目的是提供一种重组iii型胶原蛋白、核酸、表达载体、菌株及其应用，旨在提供一种安全的胶原蛋白。

2、为实现上述目的，本发明提出的重组iii型胶原蛋白，其氨基酸序列包括下列至少之一：

3、(1)seq id no：1：gppgpagangapglrggagepgkngakgepgp rgergeagipgvpgakgedgkdgspgepganglpgaagergapgfrgpag pngipgekgpagergap；

4、(2)seq id no：2：gqpgekgspgaqgppgapgplgiagitgargla gppgmpgprgspgpqgvkgesgkpganglsgergppgpqglpglagtagepgrdgnpgsdglpgrdgspggkgdrgengspgapgapghpgppgpvgpagksgdrgesgpagpagapgpagsrgapgpqgprgdkgetgergaagikghrgfpgnpgapgspgpagqqgaigspgpagprgpvgpsgppgkdgtsghpgpigppgprgnrgergse；

5、或与(1)或(2)相比，具有添加、取代、缺失1个或多个氨基酸的氨基酸序列。

6、在一实施例中，其氨基酸序列包括2～10个重复的seq id no：1；和/或，其氨基酸序列包括2～10个重复的seq id no：2。

7、本发明还提出一种核酸，所述核酸编码如上述述的重组iii型胶原蛋白，所述重组iii型胶原蛋白，其氨基酸序列包括下列至少之一：

8、(1)seq id no：1：gppgpagangapglrggagepgkngakgepgp rgergeagipgvpgakgedgkdgspgepganglpgaagergapgfrgpag pngipgekgpagergap；

9、(2)seq id no：2：gqpgekgspgaqgppgapgplgiagitgargla gppgmpgprgspgpqgvkgesgkpganglsgergppgpqglpglagtagepgrdgnpgsdglpgrdgspggkgdrgengspgapgapghpgppgpvgpagksgdrgesgpagpagapgpagsrgapgpqgprgdkgetgergaagikghrgfpgnpgapgspgpagqqgaigspgpagprgpvgpsgppgkdgtsghpgpigppgprgnrgergse；

10、或与(1)或(2)相比，具有添加、取代、缺失1个或多个氨基酸的氨基酸序列。

11、在一实施例中，所述核酸序列如seq id no：3所示和/或seq id no：4所示，其中，seq id no：3如下：

12、ggtcccccaggtccagctggtgctaacggagccccaggtctgagaggtggtgccggtgaaccaggaaaaaacggtgctaagggtgagcctggtccaagaggagagagaggtgaagcaggtattcctggtgttccaggtgctaagggagaagatggtaaagatggatctccaggtgaacccggtgccaacggtttaccaggtgctgccggagaaagaggagcaccaggttttagaggtccagctggtccaaacggtattccaggagaaaagggaccagcaggagaaagaggtgctccc；

13、seq id no：4如下：

14、ggacaacctggtgaaaagggatctcctggtgcccaaggaccacctggagcccctggtcccttgggtattgctggaattactggtgcaagaggtttggctggaccaccaggtatgccaggtccaagaggtagtcctggaccacaaggtgttaaaggtgaatctggaaagcctggagccaacggtctgtcaggagagagaggaccacctggtccacaaggacttccaggtttggcaggtaccgccggtgaacctggaagagatggtaatccaggaagtgacggtttgccaggtagagacggatcaccaggaggaaagggagatagaggtgaaaacggttctcctggtgctccaggtgctcctggtcatcccggtccacctggtccagttggtccagccggtaagtctggtgatagaggtgagtctggtccagcaggtccagccggtgctccaggtcctgctggatctagaggtgctcctggaccacagggtcctagaggtgataagggtgagactggtgaaagaggtgcagcaggtattaagggtcatagaggttttccaggtaacccaggagcccctggtagtccaggtccagcaggacaacaaggtgctataggtagtccaggtcctgccggtccaagaggtcctgttggtccatcaggaccaccaggtaaagatggtacctccggtcatcctggtccaattggaccaccaggtccaagaggtaatagaggtgaaagaggttctgaa。

15、本发明还提出一种表达载体，所述表达载体插入有上述的核酸，或者所述表达载体能够在转染宿主细胞后，使得所述宿主细胞表达上述的重组iii型胶原蛋白。

16、在一实施例中，所述表达载体包括ppic9k、ppiczɑa、gapzɑa、ppiczɑb、ppiczɑc、gapzɑb、gapzɑc及其改造后载体中的任意一种。

17、本发明还提出一种表达重组iii型胶原蛋白的菌株，所述菌株中能够表达上述的重组iii型胶原蛋白。

18、在一实施例中，所述菌株包括毕赤酵母、酿酒酵母和大肠杆菌中的任意一种。

19、在一实施例中，所述毕赤酵母包括smd1168、km71、km71h、smd1163、x33和gs115中的一种或多种。

20、本发明还提出如上述的重组iii型胶原蛋白、或者上述的核酸、或者上述的表达载体、或者上述的表达重组iii型胶原蛋白的菌株在制备护肤品、化妆品、保健品、食品和药物中的用途。

21、本发明技术方案通过基因工程的方法得到一种重组iii型胶原蛋白，采用合成生物手段，利用改造的微生物底盘细胞即可实现胶原蛋白的合成生产，而且采用该方式生产的重组胶原蛋白表达量高，具有优良的细胞增殖效果，低毒性、低抗原性、低免疫性、能引导细胞再生和生物相容性较好，应用于人体时产生免疫反应低，生产制备方法具有简单、绿色环保等优点，在生物医药、化妆品、护肤品、食品等行业中具有广泛的应用前景。