针对CD112R的抗体及其用途的制作方法

发明领域本发明属于免疫治疗领域，并且涉及与人类蛋白cd112r(pvrig)结合的抗体及其片段、编码这些抗体的多核苷酸序列以及产生它们的细胞。还包括了包含这些抗体的药物组合物及其用途。

背景技术：

0、发明背景

1、癌症免疫治疗用于产生和增强抗肿瘤免疫应答，例如通过用对肿瘤细胞上的抗原特异的抗体治疗，通过嵌合抗原受体t细胞(car-t)，或通过抗肿瘤细胞的特异性激活。在患者中针对肿瘤细胞募集免疫细胞(例如，t细胞或nk细胞)的能力提供了对抗本来被认为是不可治愈的肿瘤及其转移的治疗模式。

2、t细胞介导的免疫应答包括由共刺激和共抑制信号调节的多于一个连续步骤，产生控制免疫应答的幅度及其结果的净效应。被称为免疫检查点的抑制信号对于维持自身耐受性和限制免疫介导的侧副组织损伤至关重要。

3、免疫检查点蛋白的表达被肿瘤改变。例如，癌细胞表面上程序性死亡配体1(pd-l1)的上调允许它们与t细胞上表达的检查点分子pd-1结合。这导致t细胞的抑制(否则t细胞可能攻击肿瘤细胞)，并且从而允许癌细胞逃避宿主免疫系统。因此，免疫检查点代表了抗癌功能性细胞免疫激活的重要障碍。因此，对t细胞上的抑制性配体(例如，pd-1)特异的拮抗性抗体是正在用于癌症治疗的针对免疫检查点抑制剂(ici)的靶向剂的实例(例如，纳武单抗(nivolumab)、派姆单抗(pembrolizumab))。免疫检查点分子的另一个实例是具有ig和itim结构域的t细胞免疫受体(tigit)。tigit是一种在各种免疫细胞，包括t细胞和自然杀伤细胞(nk细胞)上表达的共抑制性分子。tigit以高亲和力与脊髓灰质炎病毒受体(pvr、cd155)结合，并且以低亲和力与连接蛋白-2(cd112)结合，两者都由各种癌细胞表达。

4、cd112r，也称为pvrig，以高亲和力与连接蛋白-2结合。在与cd112r和/或tigit相互作用后，连接蛋白-2抑制t细胞增殖。重要的是，在与cd226(dnam-1)结合后，连接蛋白-2也可以用作t细胞功能的共刺激物。这种相互作用刺激t细胞增殖和细胞因子的产生，诸如il-2和ifnγ。这些矛盾的相互作用是竞争性的，并且它们的净效应影响由此产生的抗癌免疫应答。

5、wo2019232484公开了抗pvrig、抗tigit和抗pvrig/抗tigit双特异性抗体，以及组合物和使用这些抗体治疗癌症的方法。

6、wo2018017864公开了特异性结合pvrig的剂和双特异性剂，包括抗体。wo2018017864还公开了使用这些剂增强免疫应答和/或治疗疾病诸如癌症的方法。

7、wo2016134333公开了抗pvrig抗体及使用其的方法。

8、对单独或与其他剂组合可以增强免疫系统的细胞以攻击肿瘤或病毒感染的细胞的另外的和更有效的、特异性的、安全的和稳定的剂存在未满足的需求。抑制cd112r与连接蛋白-2结合的单克隆抗体(mab)可以是这样的剂。

技术实现思路

0、发明概述

1、本发明提供了识别cd112r(pvrig)、结合它、阻止它与连接蛋白-2(cd112)结合并抑制由所述结合产生的对淋巴细胞诸如自然杀伤(nk)细胞和t细胞的抑制活性的抗体及其片段。这些抗体及其片段的特征在于具有独特的cdr序列组、高亲和力和对人类cd112r的高特异性，并且可作为独立治疗或与其他抗癌剂组合用于对抗肿瘤免疫逃避的癌症免疫治疗。本文公开的抗体还可用于治疗病毒感染，并可用于检测测定和癌症诊断。

2、现在公开了，本文描述的高亲和力抗cd112r单克隆抗体(mab)阻断cd112r-连接蛋白-2相互作用，并随后恢复t细胞和nk细胞活性。这些特性使得本发明的mab成为用于抗癌免疫治疗的有价值的候选物，能够以较低的剂量施用且副作用较少。

3、发现本文描述的抗cd112r mab诱导t细胞激活，类似于由抗pd-1、抗tigit和抗pvrmab诱导的t细胞激活。此外，一些本文描述的抗cd112r mab与其他免疫调节剂(包括抗pd-1、抗tigit或抗pvr mab)的组合导致抗癌活性显著增加，超过了由每种单独mab诱导的活性水平。本文公开的cd112r mab能够在存在靶癌细胞的情况下诱导nk细胞激活，并与抗tigit和抗pvr mab协同激活nk细胞。还公开了，发现本文描述的抗体对人类和食蟹猴cd112r具有高度特异性，但对啮齿动物cd112r不是。根据一些实施方案，还公开了，抗cd112r mab阻断cd112r与其配体连接蛋白-2的相互作用，并增加免疫细胞的激活。

4、出乎意料的是，发现本发明的抗cd112r mab的人源化形式与亲本鼠mab相比具有改进的结合和生产率特性。此外，人源化的mab变体与食蟹猴cd112r具有交叉反应性，这使得能够在猴中进行进一步的研究。本文描述的抗体比已知的抗cd112r抗体具有独特的特性和改进的效力。

5、令人惊讶和有利的是，分别被引入以去除脱酰胺和n-糖基化基序的轻链的互补决定区1(cdr1)和重链的cdr1中的特定突变，保留了对人类cd112r的亲和力。

6、根据一个方面，本发明提供了一种抗体或其抗体片段，所述抗体片段包含至少抗原结合部分，所述抗体或其片段特异性结合人类cd112r，对人类cd112r具有至少0.5x10-9m的亲和力。

7、根据一些实施方案，抗体特异性结合人类cd112r并抑制其与其配体人类连接蛋白-2(cd112)的结合。

8、根据一些实施方案，抗体或抗体片段包含一组六个cdr序列，所述cdr序列选自由以下组成的组：

9、i.包含seq id no:17的重链(hc)可变区的三个cdr和包含seq id no:19的轻链(lc)可变区的三个cdr，或与所述抗体或片段序列具有至少90％序列同一性的其类似物或衍生物；以及

10、ii.包含seq id no:21的重链可变区的三个cdr和包含seq id no:23的轻链可变区的三个cdr，或与所述抗体或片段序列具有至少90％序列同一性的其类似物或衍生物。

11、现有技术中有几种已知的方法用于确定给定抗体分子的cdr序列，但没有标准的明确方法。从抗体重链和轻链可变区确定cdr序列可以根据本领域已知的任何方法进行，包括但不限于称为kabat、chothia和imgt的方法。选定的cdr组可以包括通过多于一种方法鉴定的序列，即，例如，一些cdr序列可以使用kabat确定，并且一些可以使用imgt确定。根据一些实施方案，使用kabat和/或chothia方法确定mab可变区的cdr序列。

12、根据一些实施方案，抗体或其片段包含表示为克隆13的单克隆抗体的cdr序列，即seq id no:17中所列的重链可变区中包含的三个cdr序列和seq id no:19中所列的轻链可变区中包含的三个cdr序列，或表示为克隆15的单克隆抗体的cdr序列，即seq id no:21中所列的重链可变区中包含的三个cdr序列和seq id no:23中所列的轻链可变区中包含的三个cdr序列。

13、本发明包括表示为克隆13的抗体的变体和类似物。根据一些实施方案，抗体或抗体片段含有包含seq id no:28的重链可变区的一组三个cdr序列和包含seq id no:26的轻链可变区的三个cdr，或与所述抗体或片段序列具有至少90％序列同一性的其类似物或衍生物。

14、根据一些实施方案，抗体或抗体片段含有包含序列gyx1fx2sy(seq id no:1)或序列sywin(seq id no:7)的重链cdr1，其中x1表示n、d、a、q、s或t；并且x2表示t或a。根据一些实施方案，抗体或抗体片段含有包含序列ypgsyip(seq id no:2)的重链cdr2。根据一些实施方案，抗体或抗体片段含有包含序列gyfdv(seq id no:3)的重链cdr3。

15、根据某些实施方案，抗体或抗体片段包含：(i)包含序列gyx1fx2sy(seq id no:1)或序列sywin(seq id no:7)的重链cdr1，其中x1表示n、d、a、q、s或t；并且x2表示t或a；(ii)包含序列ypgsyip(seq id no:2)的重链cdr2；和(iii)包含序列gyfdv(seq id no:3)的重链cdr3。

16、根据一些实施方案，抗体或抗体片段含有包含序列kssqsllxsgnqknyla(seq idno:4)的轻链cdr1，其中x表示n或s。根据一些实施方案，抗体或抗体片段含有包含序列gastres(seq id no:5)的轻链cdr2。根据一些实施方案，抗体或抗体片段含有包含序列qndhsypyt(seq id no:6)的轻链cdr3。

17、根据某些实施方案，抗体或抗体片段包含：(i)包含序列kssqsllxsgnqknyla(seqid no:4)的轻链cdr1，其中x表示n或s；(ii)包含序列gastres(seq id no:5)的轻链cdr2；和(iii)包含序列qndhsypyt(seq id no:6)的轻链cdr3。

18、根据一些具体实施方案，抗体或片段含有包含序列gyx1fx2sy(seq id no:1)或序列sywin(seq id no:7)的重链cdr1序列，其中x1表示n、d、a、q、s或t；并且x2表示t或a，包含序列ypgsyip(seq id no:2)的重链cdr2，包含序列gyfdv(seq id no:3)的重链cdr3，包含序列kssqsllxsgnqknyla(seq id no:4)的轻链cdr1，其中x表示n或s，包含序列gastres(seq id no:5)的轻链cdr2；以及包含序列qndhsypyt(seq id no:6)的轻链cdr3，或在包含六个cdr的高变区(hvr)序列中包含不超过5％的氨基酸取代、缺失和/或插入的其类似物。

19、根据一些具体实施方案，抗体或片段包含由以下组成的一组六个cdr序列：

20、i.具有seq id no:1或7中所列的序列的重链cdr1；

21、ii.具有seq id no:2中所列的序列的重链cdr2；

22、iii.具有seq id no:3中所列的序列的重链cdr3；

23、iv.具有seq id no:4中所列的序列的轻链cdr1；

24、v.具有seq id no:5中所列的序列的轻链cdr2；以及

25、vi.具有seq id no:6中所列的序列的轻链cdr3。

26、根据一些实施方案，重链cdr1序列包含序列gyx1fx2sy(seq id no:1)，其中x1表示n、d、a、q、s或t；并且x2是t或a。根据一些实施方案，重链cdr1序列包含序列gyx1fx2sy(seqid no:1)，其中x1表示n、d、a、q、s或t；并且x2是t。根据一些实施方案，重链cdr1序列包含序列gytftsy(seq id no:13)。根据另外的实施方案，重链cdr1序列包含序列gynfasy(seq idno:14)。根据另外的实施方案，重链cdr1序列包含序列sywin(seq id no:7)。

27、根据一些实施方案，重链cdr2序列包含序列ypgsyip(seq id no:2)或diypgsyipnynekfkn(seq id no:8)。根据某些实施方案，重链cdr2序列包含序列diypgsyipnynekfkn(seq id no:8)。

28、根据一些实施方案，轻链cdr1序列包含序列kssqsllxsgnqknyla(seq id no:4)，其中x是n。根据具体实施方案，轻链cdr1序列包含序列kssqsllssgnqknyla(seq id no:15)。

29、根据一些实施方案，抗体或其片段包含seq id no:28中所列的重链可变区，或与该重链可变区序列具有至少90％序列同一性的其类似物或衍生物。

30、根据一些实施方案，抗体或其片段包含seq id no:26中所列的轻链可变区，或与该轻链可变区序列具有至少90％序列同一性的其类似物。

31、根据具体实施方案，抗体或其片段包含具有seq id no:28中所列的序列的重链可变区，和具有seq id no:26中所列的序列的轻链可变区，或与该轻链和/或重链序列具有至少90％序列同一性的其类似物。

32、根据具体实施方案，抗体或其片段包含具有seq id no:17中所列的序列的重链可变区，和具有seq id no:19中所列的序列的轻链可变区，或与该轻链和/或重链序列具有至少90％序列同一性的其类似物。

33、根据一些实施方案，抗体或片段包含表示为克隆13的单克隆抗体的cdr序列，即seq id no:17中所列的重链可变区中包含的三个cdr序列和seq id no:19中所列的轻链可变区中包含的三个cdr序列。

34、根据另外的实施方案，抗体或抗体片段含有包含序列gynftsy(seq id no:9)或sywin(seq id no:7)的重链cdr1。根据一些实施方案，抗体或抗体片段含有包含序列fpgsys(seq id no:10)的重链cdr2。根据一些实施方案，抗体或抗体片段含有包含序列gyfdv(seq id no:3)的重链cdr3。

35、根据某些实施方案，抗体或抗体片段包含：(i)包含序列gynftsy(seq id no:9)或sywin(seq id no:7)的重链cdr1；(ii)包含序列fpgsys(seq id no:10)的重链cdr2；和(iii)包含序列gyfdv(seq id no:3)的重链cdr3。

36、根据一些实施方案，抗体或抗体片段含有包含序列kssqsllnsgsqknyla(seq idno:11)的轻链cdr1。根据一些实施方案，抗体或抗体片段含有包含序列gastres(seq idno:5)的轻链cdr2。根据一些实施方案，抗体或抗体片段含有包含序列qndhsypyt(seq idno:6)的轻链cdr3。

37、根据某些实施方案，抗体或抗体片段包含：(i)包含序列kssqsllnsgsqknyla(seqid no:11)的轻链cdr1；(ii)包含序列gastres(seq id no:5)的轻链cdr2；和(iii)包含序列qndhsypyt(seq id no:6)的轻链cdr3。

38、根据一些具体实施方案，抗体或片段含有包含序列gynftsy(seq id no:9)或sywin(seq id no:7)的重链cdr1序列，包含序列fpgsys(seq id no:10)的重链cdr2，包含序列gyfdv(seq id no:3)的重链cdr3，包含序列kssqsllnsgsqknyla(seq id no:11)的轻链cdr1，包含序列gastres(seq id no:5)的轻链cdr2，以及包含序列qndhsypyt(seq idno:6)的轻链cdr3，或在高变区(hvr)序列中包含不超过5％的氨基酸取代、缺失和/或插入的其类似物。

39、根据一些具体实施方案，抗体或片段包含由以下组成的一组六个cdr序列：

40、i.具有seq id no:9或7中所列的序列的重链cdr1；

41、ii.具有seq id no:10中所列的序列的重链cdr2；

42、iii.具有seq id no:3中所列的序列的重链cdr3；

43、iv.具有seq id no:11中所列的序列的轻链cdr1；

44、v.具有seq id no:5中所列的序列的轻链cdr2；以及

45、vi.具有seq id no:6中所列的序列的轻链cdr3。

46、根据一些实施方案，轻链cdr1序列包含序列gynftsy(seq id no:9)。根据其他实施方案，轻链cdr1序列包含序列sywin(seq id no:7)。

47、根据一些实施方案，重链cdr2序列包含序列difpgsyspnynkkfkr(seq id no:12)。

48、根据一些实施方案，cdr由kabat确定并在seq id no:7、8、3、4、5和6中列出。根据一些实施方案，cdr由kabat确定并在seq id no:7、12、3、11、5和6中列出。

49、根据一些实施方案，cdr由chothia确定并在seq id no:1、2、3、4、5和6中列出。根据一些实施方案，cdr由chothia确定并在seq id no:9、10、3、11、5和6中列出。

50、根据一些实施方案，抗体或其片段包含seq id no:21中所列的重链可变区，或与该重链可变区序列具有至少90％序列同一性的其类似物或衍生物。

51、根据一些实施方案，抗体或其片段包含seq id no:23中所列的轻链可变区，或与该轻链可变区序列具有至少90％序列同一性的其类似物。

52、根据具体实施方案，抗体或其片段包含具有seq id no:21中所列的序列的重链可变区，和具有seq id no:23中所列的序列的轻链可变区，或与该轻链和/或重链序列具有至少90％序列同一性的其类似物。

53、根据具体实施方案，抗体或其片段包含具有seq id no:21中所列的序列的重链可变区，和具有seq id no:23中所列的序列的轻链可变区。

54、根据一些实施方案，抗体或其片段以至少10-10m的亲和力识别人类cd112r。根据其他实施方案，抗体或抗体片段以5x10-11m或甚至更高的亲和力结合人类cd112r。根据一些实施方案，抗体或抗体片段以范围为0.5x10-9m至10-11m的亲和力结合人类cd112r。根据一些实施方案，抗体或抗体片段以范围为10-10m至10-11m的亲和力结合人类cd112r。每种可能性代表本发明的单独实施方案。

55、以上描述的抗体以及片段的类似物和衍生物也在本发明的范围内。

56、根据一些实施方案，抗体或抗体片段类似物具有与参考抗体序列的高变区至少95％的序列同一性。

57、根据某些实施方案，分离的抗体或其片段的类似物或衍生物与参考抗体序列的可变区具有至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的序列同一性。每种可能性代表本发明的单独实施方案。

58、根据一些实施方案，根据本发明的抗体或抗体片段包含seq id no:28或seq idno:21中所列的重链可变区，或与所述序列具有至少95％序列相似性的类似物。

59、根据一些实施方案，抗体或抗体片段包含seq id no:26或seq id no:23中所列的轻链可变区，或与所述序列具有至少95％序列相似性的类似物。

60、根据一些实施方案，抗体或抗体片段包含重链和轻链，其中：(i)重链包含seq idno:28并且轻链包含seq id no:26；或(ii)重链包含seq id no:21并且轻链包含seq idno:23。还包括了与所述重链或轻链具有至少95％序列相似性的抗体或片段的类似物。

61、根据一些实施方案，类似物与上述抗体轻链或重链可变区具有至少96％、97％、98％或99％的序列相似性或同一性。根据一些实施方案，类似物包含对高变区的一个或更多个cdr序列的不超过一个氨基酸的取代、缺失或添加，所述高变区的一个或更多个cdr序列即seq id no:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14和15中所列的cdr序列的任何一种。每种可能性代表本发明的单独实施方案。根据一些实施方案，氨基酸取代是保守取代。

62、根据一些实施方案，抗体或抗体片段包含具有上述轻链和重链可变区的高变区(hvr)，其中1、2、3、4或5个氨基酸被取代、缺失和/或添加。每种可能性代表本发明的单独实施方案。

63、根据一些实施方案，抗体或抗体片段包含具有上述轻链和重链可变区的hvr，其中一个氨基酸被取代。根据具体实施方案，抗体或抗体片段包含如上所述的cdr，其中一个氨基酸被取代。

64、根据一些实施方案，抗体或抗体片段包含选自由以下组成的组的cdr组：

65、i.一组六个cdr，其中：重链cdr1是gyx1fx2sy(seq id no:1)，其中x1表示n、d、a、q、s或t；并且x2表示t或a；重链cdr2是ypgsyip(seq id no:2)；重链cdr3为gyfdv(seq id no:3)；轻链cdr1为kssqsllxsgnqknyla(seq id no:4)，其中x表示n或s；轻链cdr2是gastres(seq id no:5)；并且轻链cdr3是qndhsypyt(seq id no:6)；

66、ii.一组六个cdr，其中：重链cdr1是sywin(seq id no:7)；重链cdr2是ypgsyip(seq id no:2)；重链cdr3为gyfdv(seq id no:3)；轻链cdr1为kssqsllxsgnqknyla(seq idno:4)，其中x表示n或s；轻链cdr2是gastres(seq id no:5)；并且轻链cdr3是qndhsypyt(seq id no:6)；以及

67、iii.一组六个cdr，其中：重链cdr1序列是gynftsy(seq id no:9)或sywin(seq idno:7)；重链cdr2为fpgsys(seq id no:10)；重链cdr3为gyfdv(seq id no:3)；轻链cdr1为kssqsllnsgsqknyla(seq id no:11)；轻链cdr2为gastres(seq id no:5)；并且轻链cdr3是qndhsypyt(seq id no:6)。

68、本发明还提供了包含重链和轻链的抗体及其结合片段，其中所述链包含一组重链可变区序列和轻链可变区序列，所述组选自由以下组成的组：

69、i.seq id no:17和19；以及

70、ii.seq id no:21和23。

71、本发明还提供了包含重链和轻链的抗体及其结合片段，其中所述链包含一组seqid no:28中所列的重链可变区序列和seq id no:26中所列的轻链可变区序列。

72、根据一些实施方案，抗体是分离的单克隆抗体。

73、根据具体实施方案，mab是嵌合mab。

74、根据一些实施方案，mab或嵌合mab包含选自由以下组成的组的恒定区：小鼠igg1、小鼠igg2a、小鼠igg2b、小鼠igg3、人类igg1、人类igg2、人类igg3和人类igg4。每种可能性代表本发明的单独实施方案。

75、根据又其他实施方案，嵌合mab包含人类来源的恒定区。

76、根据一些实施方案，嵌合mab的人类恒定区选自由以下组成的组：人类igg1、人类igg2、人类igg3和人类igg4。

77、根据一些实施方案，嵌合mab的人类恒定区是人类igg1。

78、根据具体实施方案，抗体是抗体片段。根据具体实施方案，抗体片段选自由以下组成的组：fab、fab’、f(ab’)2、fd、fd’、fv、dab、分离的cdr区、单链可变片段(scfv)、单链抗体(scab)、“双抗体(diabodies)”和“线性抗体”。每种可能性代表本发明的单独实施方案。

79、本发明还提供了包含本文描述的任何mab的一组六个cdr的人源化抗体。

80、根据一些实施方案，人源化抗体或抗体片段包含一组六个cdr，其中：重链cdr1是gyx1fx2sy(seq id no:1)或sywin(seq id no:7)，其中x1表示n、d、a、q、s或t；并且x2是t或a；重链cdr2是ypgsyip(seq id no:2)；重链cdr3为gyfdv(seq id no:3)；轻链cdr1为kssqsllxsgnqknyla(seq id no:4)，其中x是n或s；轻链cdr2是gastres(seq id no:5)；并且轻链cdr3是qndhsypyt(seq id no:6)。

81、根据一些实施方案，人源化抗体包含重链cdr1gytftsy(seq id no:13)。

82、根据具体实施方案，人源化抗体包含轻链cdr1kssqsllssgnqknyla(seq id no:15)。

83、根据某些实施方案，人源化抗体或抗体片段包含一组六个cdr，其中：重链cdr1是gytftsy(seq id no:13)；重链cdr2是ypgsyip(seq id no:2)；重链cdr3为gyfdv(seq idno:3)；轻链cdr1为kssqsllssgnqknyla(seq id no:15)；轻链cdr2为gastres(seq id no:5)；并且轻链cdr3是qndhsypyt(seq id no:6)。

84、根据一些实施方案，人源化抗体包含选自由以下组成的组的重链可变区序列：seqid no:29、seq id no:30、seq id no:31、seq id no:32、seq id no:33、seq idno:34、seqid no:35、seq id no:36、seq id no:37、seq id no:38和seq id no:39，或与该重链可变区序列具有至少90％序列同一性的其类似物或衍生物。每种可能性代表本发明的单独实施方案。

85、根据一些实施方案，人源化抗体包含选自由以下组成的组的轻链可变区序列：seqid no:40、seq id no:41和seq id no:42，或与该轻链可变区序列具有至少90％序列同一性的其类似物或衍生物。每种可能性代表本发明的单独实施方案。

86、根据一些实施方案，人源化抗体包含选自由以下组成的组的重链可变区序列：seqid no:29、seq id no:30、seq id no:31、seq id no:32、seq id no:33、seq id no:34、seqid no:35、seq id no:36、seq id no:37、seq id no:38和seq id no:39，和选自由以下组成的组的轻链可变区序列：seq id no:40、seq id no:41和seq id no:42，或与该可变区序列具有至少95％序列同一性的其类似物或衍生物。

87、根据一些实施方案，人源化抗体包含重链和轻链，其中所述链包含一组重链可变区序列和轻链可变区序列，所述组选自由以下组成的组：

88、i.seq id no:39和40(表示为抗体h11k1)；

89、ii.seq id no:39和41(表示为抗体h11k2)；以及

90、iii.seq id no:39和42(表示为抗体h11k3)。

91、根据一些实施方案，提供了包含本文描述的抗体或其片段的缀合物。

92、根据本发明的一些实施方案的缀合物包含上面定义的抗体或其片段，所述抗体或其片段直接或通过间隔区或接头附接到包括但不限于以下的部分：放射性部分、标记标签和细胞毒性部分。

93、根据本发明的另一方面，提供了编码对人类cd112r具有高亲和力和特异性的抗体的多核苷酸序列，以及携带这些多核苷酸序列的载体和宿主细胞。

94、根据一些实施方案，提供了编码上述重链可变区和轻链可变区的氨基酸序列的多核苷酸序列。

95、根据一些实施方案，所述多核苷酸序列编码抗体或抗体片段，并且包含选自由以下组成的组的序列中所列的序列：(i)seq id no:16和seq id no:18；(ii)seq id no:20和seq id no:22；以及(iii)seq id no:24和seq id no:25，或与该可变区序列具有至少90％序列同一性的其类似物或衍生物。每种可能性代表本发明的单独实施方案。

96、根据另一些实施方案，根据本发明的多核苷酸序列编码包含一组六个cdr的抗体或抗体片段或链，其中：重链cdr1是gyx1fx2sy(seq id no:1)或sywin(seq id no:7)，其中x1表示n、d、a、q、s或t；并且x2是t或a；重链cdr2是ypgsyip(seq id no:2)；重链cdr3为gyfdv(seq id no:3)；轻链cdr1为kssqsllxsgnqknyla(seq id no:4)，其中x表示n或s；轻链cdr2是gastres(seq id no:5)；并且轻链cdr3是qndhsypyt(seq id no:6)。

97、根据另一些实施方案，根据本发明的多核苷酸序列编码包含一组六个cdr的抗体或抗体片段，其中：重链cdr1序列包含序列gytftsy(seq id no:13)，重链cdr2包含序列ypgsyip(seq id no:2)，重链cdr3包含序列gyfdv(seq id no:3)，轻链cdr1包含序列kssqsllssgnqknyla(seq id no:15)，轻链cdr2包含序列gastres(seq id no:5)，并且轻链cdr3包含序列qndhsypyt(seq id no:6)。

98、根据一些实施方案，上面定义的多核苷酸序列编码选自由以下组成的组的分子：抗体、包含至少抗原结合部分的抗体片段、抗体链和包含所述抗体或抗体片段的抗体缀合物。每种可能性代表本发明的单独实施方案。

99、根据一些实施方案，多核苷酸序列编码单克隆抗体重链可变区，并包含seq idno:16中所列的序列或具有至少90％序列同一性的其变体。

100、根据一些实施方案，多核苷酸序列编码单克隆抗体重链可变区，并包含seq idno:20中所列的序列或具有至少90％序列同一性的其变体。

101、根据一些实施方案，多核苷酸序列编码单克隆抗体重链可变区，并包含seq idno:24中所列的序列或具有至少90％序列同一性的其变体。

102、根据一些实施方案，多核苷酸序列编码单克隆抗体轻链可变区，并包含seq idno:18中所列的序列或具有至少90％序列同一性的其变体。

103、根据一些实施方案，多核苷酸序列编码单克隆抗体轻链可变区，并包含seq idno:22中所列的序列或具有至少90％序列同一性的其变体。

104、根据一些实施方案，多核苷酸序列编码单克隆抗体轻链可变区，并包含seq idno:25中所列的序列或具有至少90％序列同一性的其变体。

105、根据一些实施方案，本发明提供了包含由以上公开的至少一种多核苷酸序列编码的至少一种序列的多肽。

106、在另一方面，本发明提供了一种核酸构建体，所述核酸构建体包含编码至少一种如本文描述的抗体链或其片段的核酸分子。根据一些实施方案，核酸构建体是质粒。

107、根据一些实施方案，质粒包含选自由以下组成的组的序列中所列的至少一种多核苷酸序列：seq id no:16、seq id no:18、seq id no:20、seq id no:22、seq id no:24和seq id no:25。每种可能性代表本发明的单独实施方案。

108、在又另一方面，本发明提供了能够产生包含本文描述的特定cdr序列和/或特定重链和轻链可变区的抗体或抗体片段的细胞。

109、根据一些实施方案，提供了包含至少一种以上公开的多核苷酸序列的细胞或细胞群体。

110、根据一些实施方案，产生单克隆抗体的细胞是杂交瘤细胞。

111、根据另一方面，本发明提供了一种药物组合物，所述药物组合物包含作为活性成分的如本文描述的至少一种抗体、抗体片段或其缀合物，以及任选地至少一种药学可接受的赋形剂、稀释剂、盐或载体。

112、根据一些实施方案，药物组合物包含至少一种抗体，该抗体包含一组六个cdr，其中：重链cdr1是gyx1fx2sy(seq id no:1)或sywin(seq id no:7)，其中x1表示n、d、a、q、s或t；并且x2是t或a；重链cdr2是ypgsyip(seq id no:2)；重链cdr3为gyfdv(seq id no:3)；轻链cdr1为kssqsllxsgnqknyla(seq id no:4)，其中x表示n或s；轻链cdr2是gastres(seq idno:5)；并且轻链cdr3是qndhsypyt(seq id no:6)。

113、根据一些实施方案，药物组合物包含抗体或其片段，该抗体或其片段包含重链cdr1序列gyx1fx2sy(seq id no:1)，其中x2是t。根据一些实施方案，药物组合物包含抗体或其片段，该抗体或其片段包含重链cdr1序列gytftsy(seq id no:13)。根据其他实施方案，药物组合物包含抗体或其片段，该抗体或其片段包含重链cdr1序列gynfasy(seq id no:14)。根据某些实施方案，药物组合物包含抗体或其片段，该抗体或其片段包含重链cdr1序列sywin(seq id no:7)。

114、根据一些实施方案，药物组合物包含抗体或其片段，该抗体或其片段包含轻链cdr1序列kssqsllssgnqknyla(seq id no:15)。

115、根据一些实施方案，药物组合物包含抗体或抗体片段，该抗体或抗体片段包含一组六个cdr，其中：重链cdr1序列包含序列gytftsy(seq id no:13)，重链cdr2包含序列ypgsyip(seq id no:2)，重链cdr3包含序列gyfdv(seq id no:3)，轻链cdr1包含序列kssqsllssgnqknyla(seq id no:15)，轻链cdr2包含序列gastres(seq id no:5)，并且轻链cdr3包含序列qndhsypyt(seq id no:6)。

116、根据一些实施方案，药物组合物包含抗体或其片段，该抗体或其片段包含seq idno:39中所列的重链。

117、根据一些实施方案，药物组合物包含抗体或其片段，该抗体或其片段包含具有选自由以下组成的组的序列的轻链可变区：seq id no:40、seq id no:41和seq id no:42。每种可能性代表本发明的单独实施方案。

118、根据具体实施方案，药物组合物包含抗体或其片段，该抗体或其片段包含具有seqid no:39中所列的序列的重链可变区和具有选自由seq id no:40、seq id no:41和seq idno:42组成的组的序列的轻链可变区。

119、还提供了本发明抗体的单链可变片段(scfv)分子。scfv分子包含表达在一个多肽链中的抗体的抗原结合位点。根据一些实施方案，本发明提供了包含抗cd112r抗体的重链和轻链可变区的scfv分子。根据某些实施方案，scfv包含两个可变区之间的铰链区。根据具体实施方案，scfv包含本文描述的人源化抗体的重链和轻链。

120、根据一些实施方案，scfv包含cd112r结合位点，其包含选自由以下组成的组的六个cdr序列：

121、i.包含seq id no:28的重链可变区的三个互补决定区(cdr)和包含seq id no:26的轻链可变区的三个cdr，或与所述抗体或片段序列具有至少90％序列同一性的其类似物或衍生物；以及

122、ii.包含seq id no:17的重链可变区的三个cdr和包含seq id no:19的轻链可变区的三个cdr，或与所述抗体或片段序列具有至少90％序列同一性的其类似物或衍生物。

123、根据一些实施方案，scfv包含cd112r结合位点，其包含一组六个cdr，其中：重链cdr1是gyx1fx2sy(seq id no:1)或sywin(seq id no:7)，其中x1表示n、d、a、q、s或t；并且x2是t或a；重链cdr2是ypgsyip(seq id no:2)；重链cdr3为gyfdv(seq id no:3)；轻链cdr1为kssqsllxsgnqknyla(seq id no:4)，其中x表示n或s；轻链cdr2是gastres(seq id no:5)；并且轻链cdr3是qndhsypyt(seq id no:6)。

124、根据一些实施方案，scfv包含重链cdr1序列gyx1fx2sy(seq id no:1)，其中x2是t。根据一些实施方案，scfv包含重链cdr1序列gytftsy(seq id no:13)。根据其他实施方案，scfv包含重链cdr1序列gynfasy(seq id no:14)。根据某些实施方案，scfv包含重链cdr1序列sywin(seq id no:7)。

125、根据一些实施方案，scfv包含轻链cdr1序列kssqsllssgnqknyla(seq id no:15)。

126、根据一些实施方案，scfv包含一组六个cdr，其中：重链cdr1序列包含序列gytftsy(seq id no:13)，重链cdr2包含序列ypgsyip(seq id no:2)，重链cdr3包含序列gyfdv(seqid no:3)，轻链cdr1包含序列kssqsllssgnqknyla(seq id no:15)，轻链cdr2包含序列gastres(seq id no:5)，并且轻链cdr3包含序列qndhsypyt(seq id no:6)。

127、根据一些实施方案，scfv包含选自由seq id no:29-39组成的组的重链可变区序列。

128、根据一些实施方案，scfv包含选自由seq id no:40-42组成的组的轻链可变区序列。

129、根据一些实施方案，scfv包含连接重链和轻链可变区的接头。根据一些实施方案，接头是甘氨酸-丝氨酸(glyser)接头。根据一些实施方案，接头包括(gs)n、(gsggs)n、(gggs)n或(ggggs)n，其中n是选自1、2、3、4、5、6、7、8、9或10的整数。根据一些实施方案，接头包含序列gggs的2-6个重复。根据某些示例性实施方案，包含序列gggs的3个或4个重复的接头连接scfv内的两个可变区。根据一些实施方案，重链可变区位于scfv的n-末端侧并且通过接头(gggs)3连接到轻链可变区。根据一些实施方案，轻链可变区位于scfv的n-末端侧并且通过接头(gggs)4连接到重链可变区。

130、根据一些实施方案，scfv包含选自由seq id no:43至54组成的组的序列，或与所述抗体具有至少90％序列同一性的其类似物或衍生物。每种可能性代表本发明的单独实施方案。

131、根据一些实施方案，scfv包含选自由seq id no:43至54组成的组的序列。根据某些实施方案，scfv由选自由seq id no:43至54组成的组的序列组成。

132、根据一些实施方案，scfv连接到人类fc区域以形成scfv-fc。根据一些实施方案，fc是人类igg1的。

133、还提供了药物组合物，所述药物组合物包含至少一种根据本发明的抗体、抗体片段或抗体缀合物，用于通过抑制在nk细胞上表达的cd112r与连接蛋白-2(cd112)的结合来恢复nk细胞毒性。

134、根据其他实施方案，抗体或抗体片段能够抑制t细胞上表达的人类cd112r与连接蛋白-2的结合。

135、根据一些实施方案，药物组合物包含至少一种根据本发明的抗体、抗体片段或抗体缀合物和针对pd-1的抗体。根据一些实施方案，药物组合物包含至少一种根据本发明的抗体、抗体片段或抗体缀合物和针对tigit的抗体。根据一些实施方案，药物组合物包含至少一种根据本发明的抗体、抗体片段或抗体缀合物和针对pvr的抗体。根据一些实施方案，药物组合物包含至少一种根据本发明的抗体、抗体片段或抗体缀合物和针对ctla-4的抗体。

136、根据一些实施方案，根据本发明的药物组合物用于癌症免疫治疗或增强免疫应答。

137、根据本发明的一些实施方案，癌症选自由以下组成的组：肺癌、乳腺癌、结肠直肠癌、黑素瘤、卵巢癌、胰腺癌、结肠癌、宫颈癌、肾癌(kidney cancer)、甲状腺癌、前列腺癌、脑癌、肾癌(renal cancer)、咽喉癌、喉癌、膀胱癌、肝癌、纤维肉瘤、子宫内膜细胞癌、胶质母细胞瘤、肉瘤、髓样癌、白血病和淋巴瘤。每种可能性代表本发明的单独实施方案。

138、根据一些实施方案，癌症是实体癌。根据一些具体实施方案，实体癌选自由以下组成的组：乳腺癌、肺癌、膀胱癌、胰腺癌和卵巢癌。

139、根据一些实施方案，癌症是肺腺癌。根据一些实施方案，癌症是乳腺腺癌。根据一些实施方案，癌症是结肠直肠癌。

140、根据某些实施方案，癌症选自由以下组成的组：乳腺癌、结肠直肠癌、肺癌、肾癌、黑素瘤、前列腺癌和脑癌。每种可能性代表本发明的单独实施方案。

141、根据其他实施方案，癌症是血液学癌症。根据一些实施方案，血液学癌症选自白血病、淋巴瘤和多发性骨髓瘤。每种可能性代表本发明的单独实施方案。

142、根据一些实施方案，药物组合物与人类淋巴细胞一起用于治疗癌症。

143、根据一些实施方案，人类淋巴细胞是选自由以下组成的组的杀伤细胞：t细胞、nk细胞和nkt细胞。每种可能性代表本发明的单独实施方案。

144、根据一些实施方案，杀伤细胞是自体的或同种异体的。

145、根据一些实施方案，药物组合物用于治疗病毒感染。

146、根据某些实施方案，药物组合物用于治疗慢性感染。根据示例性实施方案，药物组合物用于治疗选自由以下组成的组的病毒感染：丙型肝炎病毒感染(hcv)、多瘤病毒(jcv)感染和bk病毒(bkv)感染。

147、根据又另一个方面，本发明提供了一种通过使用本文定义的单克隆抗体或抗体片段来抑制人类cd112r与连接蛋白-2结合的方法。

148、根据另一个方面，本发明提供了一种用于增强有相应需要的受试者的免疫应答的方法，所述方法包括向所述受试者施用治疗有效量的本文描述的抗体或抗体片段。

149、根据又另一方面，本发明提供了一种治疗癌症的方法，所述方法包括向有相应需要的受试者施用包含治疗有效量的本文描述的抗体或其抗体片段的药物组合物。

150、根据又另一方面，本发明提供了一种治疗癌症的方法，所述方法包括向有相应需要的受试者施用治疗有效量的如本文描述的针对cd112r的抗体或其抗体片段；和治疗有效量的针对pd-1、tigit或pvr的抗体。每种可能性代表本发明的单独实施方案。抗cd112r抗体和抗pd-1、tigit或pvr的施用可以是联合施用或以任何施用顺序序贯施用。

151、根据本发明的一些实施方案，治疗有效量导致受试者中肿瘤尺寸或转移数量的减少。

152、根据一些实施方案，治疗癌症的方法包括施用或进行至少一种另外的抗癌治疗。根据某些实施方案，另外的抗癌治疗是手术、化疗、放疗或免疫治疗。

153、根据一些实施方案，治疗癌症的方法包括施用抗体和另外的抗癌剂。根据一些实施方案，另外的抗癌剂选自由以下组成的组：免疫调节剂、抑制免疫共抑制受体的剂、激活的淋巴细胞、激酶抑制剂和化疗剂。

154、根据其他实施方案，另外的免疫调节剂是结合人类连接蛋白-2的抗体、抗体片段或抗体缀合物。

155、根据一些实施方案，另外的免疫调节剂是针对免疫检查点分子的抗体。根据一些实施方案，另外的免疫调节剂是针对选自由以下组成的组的免疫检查点分子的抗体：人类程序性细胞死亡蛋白1(pd-1)、pd-l1和pd-l2、癌胚抗原相关细胞粘附分子1(ceacam1)、淋巴细胞活化基因3(lag3)、cd137、ox40(也称为cd134)、杀伤细胞免疫球蛋白样受体(kir)、tigit、pvr、ctla-4、nkg2a、gitr和任何其他检查点分子或其组合。每种可能性代表本发明的单独实施方案。

156、根据某些实施方案，另外的免疫调节剂是针对pd-1的抗体。根据某些实施方案，另外的免疫调节剂是针对tigit的抗体。根据某些实施方案，另外的免疫调节剂是针对pvr的抗体。根据一些实施方案，另外的免疫调节剂是针对ctla-4的抗体。

157、根据本发明的一些实施方案，免疫共抑制受体选自由以下组成的组：pd-1、tigit、pvr、ctla-4、lag3、tim3、btla、vista、b7h4、cd96、by55(cd 160)、lair1、siglec10和2b4。每种可能性代表本发明的单独实施方案。

158、根据一些实施方案，抗癌剂选自由以下组成的组：爱必妥(erbitux)、阿糖胞苷、氟达拉滨、氟尿嘧啶、巯嘌呤、氨甲蝶呤、硫鸟嘌呤、吉西他滨、长春新碱、长春碱、长春瑞滨、卡莫司汀、洛莫司汀、苯丁酸氮芥、环磷酰胺、顺铂、卡铂、异环磷酰胺、氮芥(mechlorethamine)、美法仑、塞替派(thiotepa)、达卡巴嗪、博莱霉素、更生霉素(dactinomycin)、柔红霉素、多柔比星、伊达比星、丝裂霉素、米托蒽醌、普卡霉素、依托泊苷、替尼泊苷和其任何组合。每种可能性代表本发明的单独实施方案。

159、根据一些实施方案，抗癌剂是表皮生长因子受体(egfr)抑制剂。根据一些实施方案，egfr抑制剂选自由以下组成的组：西妥昔单抗帕尼单抗和耐昔妥珠单抗(necitumumab)每种可能性代表本发明的单独实施方案。

160、根据本发明的一些实施方案，受试者是人类受试者。

161、根据本发明的一些实施方案，免疫细胞是t细胞。

162、根据一个方面，本发明提供了一种用于调节免疫系统功能和/或活性的方法，所述方法包括使用根据本发明的抗体调节cd112r与连接蛋白-2的结合。

163、根据一些实施方案，治疗癌症的方法包括阻止或减少受试者中转移的形成、生长或扩散。

164、根据一些实施方案，治疗癌症的方法包括向有相应需要的受试者施用包含能够抑制人类cd112r与人类连接蛋白-2的结合的抗体或其抗体片段的药物组合物，并还向所述受试者施用人类淋巴细胞。

165、根据一些实施方案，人类淋巴细胞是选自由以下组成的组的杀伤细胞：t细胞、nk细胞和nkt细胞。

166、根据一些实施方案，杀伤细胞是自体的或同种异体的。

167、本发明还提供了一种预防或治疗病毒感染的方法，所述方法包括向受试者施用本文描述的抗体或包含至少抗原结合结构域的其片段，其中所述mab或其片段能够抑制cd112r与连接蛋白-2的结合。

168、根据另一方面，本发明还包括确定或定量样品中cd112r的方法，所述方法包括使生物样品与抗体或抗体片段接触，并测量复合物形成的水平，其中所述抗体或抗体片段包含：

169、i.一组六个cdr，其中：重链cdr1是gyx1fx2sy(seq id no:1)或sywin(seq id no:7)，其中x1表示n、d、a、q、s或t；并且x2表示t或a；重链cdr2是ypgsyip(seq id no:2)；重链cdr3为gyfdv(seq id no:3)；轻链cdr1为kssqsllxsgnqknyla(seq id no:4)，其中x表示n或s；轻链cdr2是gastres(seq id no:5)；并且轻链cdr3是qndhsypyt(seq id no:6)；或

170、ii.一组六个cdr，其中：重链cdr1序列是gynftsy(seq id no:9)或sywin(seq idno:7)；重链cdr2是fpgsys(seq id no:10)；重链cdr3为gyfdv(seq id no:3)；轻链cdr1为kssqsllnsgsqknyla(seq id no:11)；轻链cdr2为gastres(seq id no:5)；并且轻链cdr3是qndhsypyt(seq id no:6)。

171、根据一些实施方案，方法包括使生物样品与抗体或抗体片段接触，所述抗体或抗体片段包含一组六个cdr，其中：重链cdr1序列包含序列gytftsy(seq id no:13)，重链cdr2包含序列ypgsyip(seq id no:2)，重链cdr3包含序列gyfdv(seq id no:3)，轻链cdr1包含序列kssqsllssgnqknyla(seq id no:15)，轻链cdr2包含序列gastres(seq id no:5)，并且轻链cdr3包含序列qndhsypyt(seq id no:6)。

172、根据一些实施方案，用于检测或定量cd112r表达的方法包括以下步骤：

173、i.将样品与对cd112r特异的抗体或包含至少抗原结合部分的其抗体片段一起孵育；和

174、ii.使用可检测探针检测结合的cd112r。

175、根据一些实施方案，方法还包括以下步骤：

176、iii.将(ii)的量与从含有已知量cd112r的参考样品获得的标准曲线进行比较；和

177、iv.从标准曲线计算样品中cd112r的量。

178、根据本发明的抗体也可用于配置筛选方法。例如，可以使用所述抗体和本领域已知的方法，构建酶联免疫吸附测定(elisa)或放射免疫测定(ria)，以及诸如免疫组织化学(ihc)或荧光激活细胞分选(facs)的方法，用于测量生物样品中分泌的或细胞相关的cd112r的水平。

179、根据一些实施方案，生物样品是体液或组织。根据另外的实施方案，样品是身体组织样品。

180、根据一些实施方案，方法在体外或离体进行。

181、根据一个方面，本发明提供了一种对受试者的癌症进行诊断或预后的方法，该方法包括使用本文描述的至少一种抗体确定所述受试者的生物样品中cd112r的表达水平。

182、还提供了用于测量生物样品中cd112r的表达或存在的试剂盒，其包含至少一种根据本发明的抗体或抗体片段。根据一些实施方案，试剂盒包含抗体或抗体片段，所述抗体或抗体片段包含：

183、i.一组六个cdr，其中：重链cdr1是gyx1fx2sy(seq id no:1)或sywin(seq id no:7)，其中x1表示n、d、a、q、s或t；并且x2表示t或a；重链cdr2是ypgsyip(seq id no:2)；重链cdr3为gyfdv(seq id no:3)；轻链cdr1为kssqsllxsgnqknyla(seq id no:4)，其中x表示n或s；轻链cdr2是gastres(seq id no:5)；并且轻链cdr3是qndhsypyt(seq id no:6)；或

184、ii.一组六个cdr，其中：重链cdr1序列是gynftsy(seq id no:9)或sywin(seq idno:7)；重链cdr2是fpgsys(seq id no:10)；重链cdr3为gyfdv(seq id no:3)；轻链cdr1为kssqsllnsgsqknyla(seq id no:11)；轻链cdr2为gastres(seq id no:5)；并且轻链cdr3是qndhsypyt(seq id no:6)。

185、根据一些实施方案，试剂盒包含抗体或抗体片段，该抗体或抗体片段包含一组六个cdr，其中：重链cdr1序列包含序列gytftsy(seq id no:13)，重链cdr2包含序列ypgsyip(seq id no:2)，重链cdr3包含序列gyfdv(seq id no:3)，轻链cdr1包含序列kssqsllssgnqknyla(seq id no:15)，轻链cdr2包含序列gastres(seq id no:5)，并且轻链cdr3包含序列qndhsypyt(seq id no:6)。

186、本文以上公开的任何实施方案可以任选地与本文公开的另一实施方案的一个或任何组合的主题联合。本发明的另外的实施方案和可适用性的全部范围将从下文给出的详细描述变得明显。然而，应当理解，详细描述和具体实例，虽然指示本发明的优选的实施方案，但仅通过说明性方式给出，因为对本领域技术人员而言，本发明的精神和范围内的各种变化和修改从该详细描述将是明显的。