工程化鸟苷酸激酶变体酶的制作方法

文档序号:36229501发布日期:2023-11-30 17:51阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种工程化鸟苷酸激酶或其功能片段,包含与seq id no:4和/或seq id no:46具有至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%的序列同一性的多肽序列,其中所述工程化鸟苷酸激酶的多肽序列包含至少一个取代或取代集,并且其中所述多肽序列的氨基酸位置参考seq id no:4和/或seq id no:46编号。

2.根据权利要求1所述的工程化鸟苷酸激酶,其中所述多肽序列与seq id no:4具有至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%的序列同一性,并且其中所述工程化鸟苷酸激酶的多肽序列在所述多肽序列中选自以下的一个或更多个位置处包含至少一个取代或取代集:82/115/144/193/200、42、41、60、77、83、115、116、142、144、150、153、157和176,其中所述多肽序列的氨基酸位置参考seq id no:4编号。

3.根据权利要求1所述的工程化鸟苷酸激酶,其中所述工程化鸟苷酸激酶的所述多肽序列与seq id no:4具有至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%的序列同一性,并且其中所述工程化鸟苷酸激酶的所述多肽序列在选自以下的一个或更多个位置处包含至少一个取代或取代集:82/115/144/193/200、82、82/100、82/100/115/116/144、82/100/115/116/160/193、82/100/116/160、82/100/116/200、82/100/144/160/200、82/100/144/193、82/100/200/203、82/115/116、82/115/116/144/193/200、82/115/116/172、82/115/160、82/115/193、82/116、82/116/144/160、82/116/144/193、82/116/193、82/144、82/144/193、82/160/172、82/160/179、82/160/193/200、82/172、82/193、82/193/203、82/200、91/144、100/144/172、100/144/193、115、115/144、115/144/160、115/144/193、115/193、115/200、144、144/193、144/193/200和144/200,其中所述多肽序列的氨基酸位置参考seq id no:4编号。

4.根据权利要求1所述的工程化鸟苷酸激酶,其中所述工程化鸟苷酸激酶的所述多肽序列与seq id no:46具有至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%的序列同一性,并且其中所述工程化鸟苷酸激酶的所述多肽序列在选自以下的一个或更多个位置处包含至少一个取代或取代集:41、41/42、41/42/91、41/42/91/134、41/42/91/134/160、41/42/91/160、41/42/91/172、41/42/134、41/42/134/144、41/42/134/144/160、41/42/134/150、41/42/134/150/160、41/42/134/160、41/42/134/160/172、41/42/144、41/42/160、41/42/160/172、41/42/172、42、42/91、42/91/134、42/91/134/172、42/91/172、42/134、42/134/172、42/144和42/160,其中所述多肽序列的氨基酸位置参考seq id no:46编号。

5.根据权利要求1所述的工程化鸟苷酸激酶,其中所述工程化鸟苷酸激酶的所述多肽序列与seq id no:46具有至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%的序列同一性,并且其中所述工程化鸟苷酸激酶的所述多肽序列在选自以下的一个或更多个位置处包含至少一个取代或取代集:9/41/42、9/41/42/60/115、9/41/42/115/150/153、9/41/42/115/153、9/41/42/115/153/157、9/41/42/115/157、

6.根据权利要求1所述的工程化鸟苷酸激酶,其中所述工程化鸟苷酸激酶包含与表2-1、表2-2、表3-1和/或表3-2中列出的至少一种工程化鸟苷酸激酶变体的序列至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%相同的多肽序列。

7.根据权利要求1所述的工程化鸟苷酸激酶,其中所述工程化鸟苷酸激酶包括seq idno:4和/或seq id no:46中列出的变体工程化鸟苷酸激酶。

8.根据权利要求1所述的工程化鸟苷酸激酶,其中所述工程化鸟苷酸激酶包含与seqid no:4-552中的偶数编号序列中列出的至少一种工程化鸟苷酸激酶变体的序列至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%相同的多肽序列。

9.根据权利要求1所述的工程化鸟苷酸激酶,其中所述工程化鸟苷酸激酶包含seq idno:4-552中的偶数编号序列中的至少一种中列出的多肽序列。

10.根据权利要求1-9中任一项所述的工程化鸟苷酸激酶,其中与野生型佛罗里达文昌鱼(branchiostoma floridae)鸟苷酸激酶相比,所述工程化鸟苷酸激酶包含至少一种改进的性质。

11.根据权利要求10所述的工程化鸟苷酸激酶,其中所述改进的性质包括改进的对底物的活性。

12.根据权利要求11所述的工程化鸟苷酸激酶,其中所述底物包括3’f-3’-脱氧鸟苷-5’-(1-硫代)-一磷酸(f-thiogmp(6))和/或sp-2’f-ara-腺苷-5’-(1-硫代)-三磷酸(f-thioatp(3))。

13.根据权利要求10-12中任一项所述的工程化鸟苷酸激酶,其中所述改进的性质包括改进的sp-3’f-3’-脱氧鸟苷-5’-(1-硫代)-二磷酸(f-thiogdp(7))的产生。

14.根据权利要求1-13中任一项所述的工程化鸟苷酸激酶,其中所述工程化鸟苷酸激酶是纯化的。

15.一种组合物,所述组合物包含至少一种根据权利要求1-14中任一项所述的工程化鸟苷酸激酶。

16.一种多核苷酸序列,所述多核苷酸序列编码至少一种根据权利要求1-14中任一项所述的工程化鸟苷酸激酶。

17.一种多核苷酸序列,所述多核苷酸序列编码至少一种工程化鸟苷酸激酶,所述多核苷酸序列包括与seq id no:3和/或seq id no:45的至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%的序列同一性,其中所述工程化鸟苷酸激酶的多核苷酸序列在一个或更多个位置处包含至少一个取代。

18.一种多核苷酸序列,所述多核苷酸序列编码至少一种工程化鸟苷酸激酶或其功能片段,所述多核苷酸序列包括与seq id no:3和/或seq id no:45的至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%的序列同一性。

19.根据权利要求16-18中任一项所述的多核苷酸序列,其中所述多核苷酸序列可操作地连接至控制序列。

20.根据权利要求16-19中任一项所述的多核苷酸序列,其中所述多核苷酸序列是密码子优化的。

21.根据权利要求16-20中任一项所述的多核苷酸序列,其中所述多核苷酸序列包含seq id no:3-551中的奇数编号序列中列出的多核苷酸序列。

22.一种表达载体,所述表达载体包含至少一种根据权利要求16-21中任一项所述的多核苷酸序列。

23.一种宿主细胞,所述宿主细胞包含至少一种根据权利要求22所述的表达载体。

24.一种宿主细胞,所述宿主细胞包含至少一种根据权利要求16-21中任一项所述的多核苷酸序列。

25.一种在宿主细胞中产生工程化鸟苷酸激酶的方法,所述方法包括在合适的条件下培养根据权利要求23和/或24所述的宿主细胞,使得产生至少一种工程化鸟苷酸激酶。

26.根据权利要求25所述的方法,所述方法还包括从培养物和/或宿主细胞回收至少一种工程化鸟苷酸激酶。

27.根据权利要求25和/或26所述的方法,所述方法还包括纯化所述至少一种工程化鸟苷酸激酶的步骤。


技术总结
本发明提供了工程化鸟苷酸激酶(GK)酶、具有GK活性的多肽,和编码这些酶的多核苷酸,以及载体和包含这些多核苷酸和多肽的宿主细胞。还提供了用于产生GK酶的方法。本发明还提供了包含GK酶的组合物,以及使用工程化GK酶的方法。本发明尤其可用于药物化合物的产生。

技术研发人员:段达,奥里克·安东尼·索厄尔-肯士,阿克西尼娅·柳贝诺娃·佩特科娃,奥斯卡·阿尔维左
受保护的技术使用者:科德克希思公司
技术研发日:
技术公布日:2024/1/16
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