抗CLDN4-抗CD137双特异性抗体的制作方法

本发明涉及期待作为用于癌的治疗的药物组合物的有效成分有用的抗cldn4-抗cd137双特异性抗体。

背景技术：

1、紧密连接蛋白-4(claudin-4，cldn4)为属于紧密连接蛋白家族的四次跨膜蛋白。其在上皮细胞、内皮细胞中表达，作为构成紧密连接的主要分子发挥重要的作用。cldn4在大肠癌、膀胱癌、卵巢癌等癌组织中也确认到高表达，暗示了抗cldn4抗体可以应用于癌的治疗或诊断的可能性(专利文献1、非专利文献1)。另外，在动物模型中显示出抗cldn4抗体与抗表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor，egfr)抗体的并用所带来的抗肿瘤效果(非专利文献2)。

2、分化簇137(cluster of differentiation 137，cd137，别名4-1bb)为属于肿瘤坏死因子受体超家族(tumor necrosis factor receptor super family，tnfrsf)的分子，已报道其在t细胞、b细胞、自然杀伤细胞(nk)细胞、树突状细胞、嗜酸性粒细胞、肥大细胞等免疫细胞表面表达。尤其已知，t细胞上的cd137与抗原呈递细胞上的cd137配体结合，作为共刺激分子参与t细胞的活化和生存(非专利文献3)。抗cd137激动抗体在动物模型中显示出肿瘤微环境内的免疫细胞的活化介导的抗肿瘤效果(非专利文献4)。作为抗cd137激动抗体的乌瑞芦单抗(urelumab)虽然在临床试验中显示出治疗效果，但也被报道了会引起肝障碍的副作用(非专利文献5)。

3、作为能够以低抗体浓度获得癌细胞选择性细胞毒活性的划时代的方法，已报道各种抗体形式的双特异性t细胞募集抗体(bispecific t-cell-recruiting antibodies)。双特异性t细胞募集抗体为包含针对在癌细胞表面表达的肿瘤相关抗原(tumor-associatedantigens；taa)的抗体、和与t细胞结合的抗体的双特异性抗体，正在研究这些抗体针对t细胞介导的免疫疗法的效果(非专利文献6)。作为与t细胞结合的抗体，大多使用抗cd3抗体，现在也在研究开发各种针对taa的双特异性t细胞募集抗体。

4、另外，近年来正在积极进行针对cd137和taa的双特异性t细胞募集抗体的研究。正在研究识别作为taa的磷脂酰肌醇蛋白聚糖3(glypican3，gpc3)、人表皮生长因子受体2型(human epidermal growth factor receptor type2，her2)、程序性细胞死亡配体1(programmed cell death-ligand1，pd-l1)、成纤维细胞活化蛋白(fibroblastactivation protein，fap)的抗gpc3-抗cd137双特异性抗体、抗her2-抗cd137双特异性抗体、抗pdl1-抗cd137双特异性抗体、抗fap-抗cd137双特异性抗体等(专利文献2和3、非专利文献7～9)。

5、然而，迄今为止还没有关于抗cldn4-抗cd137双特异性抗体的报道。

6、现有技术文献

7、专利文献

8、专利文献1：国际公开号2008/114733号

9、专利文献2：国际公开号2015/156268号

10、专利文献3：国际公开号2016/177802号

11、非专利文献

12、非专利文献1：cancer science,2009:100(9):p.1623-1630

13、非专利文献2：oncotarget,2018:9(100):p.37367-37378

14、非专利文献3：cancer science,2020:111(5):p.1461-1467

15、非专利文献4：cancer immunology immunotherapy,2012:61(5):p.1721-1733

16、非专利文献5：clinical cancer research,2017:23(8):p.1929-1936

17、非专利文献6：mabs,2017:9(2):p.182-212

18、非专利文献7：clinical cancer research,2019:25(19):p.5878-5889

19、非专利文献8：clinical cancer research,2020:26(15):p.4154-4167

20、非专利文献9：journal for immunotherapy of cancer,2020；8(2):e000238

技术实现思路

1、发明所要解决的问题

2、本发明的课题在于提供能够用于癌的治疗的抗cldn4-抗cd137双特异性抗体。

3、用于解决问题的方法

4、本发明人进行了与腹膜播散癌细胞所表达的抗原选择性结合的抗体的探索，获得了作为抗cldn4抗体的3d11(实施例1和2)。判明了使用3d11和抗cd3抗体的双特异性t细胞募集抗体无法用于癌患者的治疗(参考例)。因此，使用3d11和公知的抗cldn4抗体即km3900抗体，尝试了与抗cd137抗体的双特异性t细胞募集抗体的获得(实施例3和4)。所获得的抗cldn4-抗cd137双特异性抗体与cldn4和cd137结合(实施例5)，在体外促进t细胞的干扰素γ产生，对于在细胞表面表达cldn4的癌细胞显示出细胞毒活性(实施例6)。另外确认了，所获得的抗cldn4-抗cd137双特异性抗体在体内小鼠模型中发挥抗肿瘤作用(实施例7-1)，在食蟹猴中也可以安全地使用(实施例7-2)。暗示了本发明的抗cldn4-抗cd137双特异性抗体对于癌的治疗有用。

5、即，本发明涉及以下的[1]～[32]。

6、[1]一种双特异性抗体，其为包含抗cldn4抗体的重链可变区和轻链可变区、以及抗cd137抗体的重链可变区和轻链可变区的抗cldn4-抗cd137双特异性抗体，其中，抗cldn4抗体的重链可变区和轻链可变区为以下的(a)或(b)中的任意一者：

7、(a)包含由序列号2的氨基酸编号31至35的氨基酸序列构成的cdr1、由序列号2的氨基酸编号50至66的氨基酸序列构成的cdr2和由序列号2的氨基酸编号99至114的氨基酸序列构成的cdr3的重链可变区、以及包含由序列号4的氨基酸编号24至35的氨基酸序列构成的cdr1、由序列号4的氨基酸编号51至57的氨基酸序列构成的cdr2和由序列号4的氨基酸编号90至98的氨基酸序列构成的cdr3的轻链可变区；或者

8、(b)包含由序列号6的氨基酸编号31至35的氨基酸序列构成的cdr1、由序列号6的氨基酸编号50至66的氨基酸序列构成的cdr2和由序列号6的氨基酸编号99至112的氨基酸序列构成的cdr3的重链可变区、以及包含由序列号8的氨基酸编号24至35的氨基酸序列构成的cdr1、由序列号8的氨基酸编号51至57的氨基酸序列构成的cdr2和由序列号8的氨基酸编号90至98的氨基酸序列构成的cdr3的轻链可变区。

9、[2]根据[1]所述的双特异性抗体，其中，抗cldn4抗体的重链可变区和轻链可变区为以下的(a)或(b)中的任意一者：

10、(a)由序列号2的氨基酸编号1至125的氨基酸序列构成的重链可变区和由序列号4的氨基酸编号1至109的氨基酸序列构成的轻链可变区；或者

11、(b)由序列号6的氨基酸编号1至123的氨基酸序列构成的重链可变区和由序列号8的氨基酸编号1至109的氨基酸序列构成的轻链可变区。

12、[3]根据[1]或[2]中任一项所述的双特异性抗体，其包含由抗cldn4抗体的包含重链可变区的重链和包含轻链可变区的轻链构成的igg抗体(抗cldn4 igg抗体)。

13、[4]根据[3]所述的双特异性抗体，其在抗cldn4 igg抗体的fc区包含lala突变(l234a和l235a(在此，上述突变位置为人igγ1恒定区中的根据eu索引的氨基酸位置))。

14、[5]根据[3]所述的抗cldn4-抗cd137双特异性抗体，其在抗cldn4 igg抗体的fc区包含p331g突变(在此，上述突变位置为人igγ1恒定区中的根据eu索引的氨基酸位置)。

15、[6]根据[3]所述的双特异性抗体，其在抗cldn4 igg抗体的fc区包含lala突变和p331g突变。

16、[7]根据[1]～[6]中任一项所述的双特异性抗体，其中，抗cd137抗体的重链可变区和轻链可变区为以下的(a)～(d)中的任意一者：

17、(a)包含由序列号10的氨基酸编号31至35的氨基酸序列构成的cdr1、由序列号10的氨基酸编号50至66的氨基酸序列构成的cdr2和由序列号10的氨基酸编号99至107的氨基酸序列构成的cdr3的重链可变区、以及包含由序列号12的氨基酸编号24至34的氨基酸序列构成的cdr1、由序列号12的氨基酸编号50至56的氨基酸序列构成的cdr2和由序列号12的氨基酸编号89至98的氨基酸序列构成的cdr3的轻链可变区；

18、(b)包含由序列号14的氨基酸编号31至35的氨基酸序列构成的cdr1、由序列号14的氨基酸编号50至65的氨基酸序列构成的cdr2和由序列号14的氨基酸编号98至107的氨基酸序列构成的cdr3的重链可变区、以及包含由序列号16的氨基酸编号23至35的氨基酸序列构成的cdr1、由序列号16的氨基酸编号51至57的氨基酸序列构成的cdr2和由序列号16的氨基酸编号90至100的氨基酸序列构成的cdr3的轻链可变区；

19、(c)包含由序列号18的氨基酸编号31至35的氨基酸序列构成的cdr1、由序列号18的氨基酸编号50至65的氨基酸序列构成的cdr2和由序列号18的氨基酸编号98至107的氨基酸序列构成的cdr3的重链可变区、以及包含由序列号20的氨基酸编号23至35的氨基酸序列构成的cdr1、由序列号20的氨基酸编号51至57的氨基酸序列构成的cdr2和由序列号20的氨基酸编号90至100的氨基酸序列构成的cdr3的轻链可变区；或者

20、(d)包含由序列号22的氨基酸编号31至35的氨基酸序列构成的cdr1、由序列号22的氨基酸编号50至65的氨基酸序列构成的cdr2和由序列号22的氨基酸编号98至110的氨基酸序列构成的cdr3的重链可变区、以及包含由序列号24的氨基酸编号23至35的氨基酸序列构成的cdr1、由序列号24的氨基酸编号51至57的氨基酸序列构成的cdr2和由序列号24的氨基酸编号90至100的氨基酸序列构成的cdr3的轻链可变区。

21、[8]根据[1]～[7]中任一项所述的双特异性抗体，其中，抗cd137抗体的重链可变区和轻链可变区为以下的(a)～(i)中的任意一者：

22、(a)由序列号10的氨基酸编号1至118的氨基酸序列构成的重链可变区和由序列号12的氨基酸编号1至109的氨基酸序列构成的轻链可变区；

23、(b)由序列号14的氨基酸编号1至118的氨基酸序列构成的重链可变区和由序列号16的氨基酸编号1至111的氨基酸序列构成的轻链可变区；

24、(c)由序列号18的氨基酸编号1至118的氨基酸序列构成的重链可变区和由序列号20的氨基酸编号1至111的氨基酸序列构成的轻链可变区；

25、(d)由序列号22的氨基酸编号1至121的氨基酸序列构成的重链可变区和由序列号24的氨基酸编号1至111的氨基酸序列构成的轻链可变区；

26、(e)由序列号26的氨基酸编号1至118的氨基酸序列构成的重链可变区和由序列号26的氨基酸编号134至242的氨基酸序列构成的轻链可变区；

27、(f)由序列号28的氨基酸编号1至118的氨基酸序列构成的重链可变区和由序列号28的氨基酸编号134至244的氨基酸序列构成的轻链可变区；

28、(g)由序列号30的氨基酸编号1至111的氨基酸序列构成的轻链可变区和由序列号30的氨基酸编号132至249的氨基酸序列构成的重链可变区；

29、(h)由序列号32的氨基酸编号1至118的氨基酸序列构成的重链可变区和由序列号32的氨基酸编号134至244的氨基酸序列构成的轻链可变区；或者

30、(i)由序列号34的氨基酸编号1至121的氨基酸序列构成的重链可变区和由序列号34的氨基酸编号137至247的氨基酸序列构成的轻链可变区。

31、[9]根据[7]或[8]中任一项所述的双特异性抗体，其包含含有抗cd137抗体的重链可变区和轻链可变区的抗cd137单链可变区片段(抗cd137scfv)。

32、[10]根据[9]所述的双特异性抗体，其中，抗cd137scfv为以下的(a)～(e)中的任意一者：

33、(a)由序列号26的氨基酸编号1至242的氨基酸序列构成的抗cd137scfv；

34、(b)由序列号28的氨基酸编号1至244的氨基酸序列构成的抗cd137scfv；

35、(c)由序列号30的氨基酸编号1至249的氨基酸序列构成的抗cd137scfv；

36、(d)由序列号32的氨基酸编号1至244的氨基酸序列构成的抗cd137scfv；或者

37、(e)由序列号34的氨基酸编号1至247的氨基酸序列构成的抗cd137scfv。

38、[11]根据[9]或[10]中任一项所述的双特异性抗体，其包含抗cldn4 igg抗体和抗cd137scfv，且在抗cldn4 igg抗体的重链或轻链羧基末端经由接头连接着抗cd137scfv的氨基末端。

39、[12]一种抗cldn4-抗cd137双特异性抗体，其为以下的(a)～(j)中的任意一者：

40、(a)含有包含由序列号2的氨基酸编号1至125的氨基酸序列构成的重链可变区的抗cldn4抗体的重链和包含由序列号4的氨基酸编号1至109的氨基酸序列构成的轻链可变区的抗cldn4抗体的轻链、以及包含由序列号26的氨基酸编号1至118的氨基酸序列构成的重链可变区和由序列号26的氨基酸编号134至242的氨基酸序列构成的轻链可变区的抗cd137scfv，且在该抗cldn4抗体的重链羧基末端经由接头连接着该抗cd137scfv的氨基末端的双特异性抗体；

41、(b)含有包含由序列号2的氨基酸编号1至125的氨基酸序列构成的重链可变区的抗cldn4抗体的重链和包含由序列号4的氨基酸编号1至109的氨基酸序列构成的轻链可变区的抗cldn4抗体的轻链、以及包含由序列号28的氨基酸编号1至118的氨基酸序列构成的重链可变区和由序列号28的氨基酸编号134至244的氨基酸序列构成的轻链可变区的抗cd137scfv，且在该抗cldn4抗体的重链羧基末端经由接头连接着该抗cd137scfv的氨基末端的双特异性抗体；

42、(c)含有包含由序列号2的氨基酸编号1至125的氨基酸序列构成的重链可变区的抗cldn4抗体的重链和包含由序列号4的氨基酸编号1至109的氨基酸序列构成的轻链可变区的抗cldn4抗体的轻链、以及包含由序列号30的氨基酸编号1至111的氨基酸序列构成的轻链可变区和由序列号30的氨基酸编号132至249的氨基酸序列构成的重链可变区的抗cd137scfv，且在该抗cldn4抗体的重链羧基末端经由接头连接着该抗cd137scfv的氨基末端的双特异性抗体；

43、(d)含有包含由序列号2的氨基酸编号1至125的氨基酸序列构成的重链可变区的抗cldn4抗体的重链和包含由序列号4的氨基酸编号1至109的氨基酸序列构成的轻链可变区的抗cldn4抗体的轻链、以及包含由序列号32的氨基酸编号1至118的氨基酸序列构成的重链可变区和由序列号32的氨基酸编号134至244的氨基酸序列构成的轻链可变区的抗cd137scfv，且在该抗cldn4抗体的重链羧基末端经由接头连接着该抗cd137scfv的氨基末端的双特异性抗体；

44、(e)含有包含由序列号2的氨基酸编号1至125的氨基酸序列构成的重链可变区的抗cldn4抗体的重链和包含由序列号4的氨基酸编号1至109的氨基酸序列构成的轻链可变区的抗cldn4抗体的轻链、以及包含由序列号34的氨基酸编号1至121的氨基酸序列构成的重链可变区和由序列号34的氨基酸编号137至247的氨基酸序列构成的轻链可变区的抗cd137scfv，且在该抗cldn4抗体的重链羧基末端经由接头连接着该抗cd137scfv的氨基末端的双特异性抗体；

45、(f)含有包含由序列号6的氨基酸编号1至123的氨基酸序列构成的重链可变区的抗cldn4抗体的重链和包含由序列号8的氨基酸编号1至109的氨基酸序列构成的轻链可变区的抗cldn4抗体的轻链、以及包含由序列号26的氨基酸编号1至118的氨基酸序列构成的重链可变区和由序列号26的氨基酸编号134至242的氨基酸序列构成的轻链可变区的抗cd137scfv，且在该抗cldn4抗体的重链羧基末端经由接头连接着该抗cd137scfv的氨基末端的双特异性抗体；

46、(g)含有包含由序列号6的氨基酸编号1至123的氨基酸序列构成的重链可变区的抗cldn4抗体的重链和包含由序列号8的氨基酸编号1至109的氨基酸序列构成的轻链可变区的抗cldn4抗体的轻链、以及包含由序列号28的氨基酸编号1至118的氨基酸序列构成的重链可变区和由序列号28的氨基酸编号134至244的氨基酸序列构成的轻链可变区的抗cd137scfv，且在该抗cldn4抗体的重链羧基末端经由接头连接着该抗cd137scfv的氨基末端的双特异性抗体；

47、(h)含有包含由序列号6的氨基酸编号1至123的氨基酸序列构成的重链可变区的抗cldn4抗体的重链和包含由序列号8的氨基酸编号1至109的氨基酸序列构成的轻链可变区的抗cldn4抗体的轻链、以及包含由序列号30的氨基酸编号1至111的氨基酸序列构成的轻链可变区和由序列号30的氨基酸编号132至249的氨基酸序列构成的重链可变区的抗cd137scfv，且在该抗cldn4抗体的重链羧基末端经由接头连接着该抗cd137scfv的氨基末端的双特异性抗体；

48、(i)含有包含由序列号6的氨基酸编号1至123的氨基酸序列构成的重链可变区的抗cldn4抗体的重链和包含由序列号8的氨基酸编号1至109的氨基酸序列构成的轻链可变区的抗cldn4抗体的轻链、以及包含由序列号32的氨基酸编号1至118的氨基酸序列构成的重链可变区和由序列号32的氨基酸编号134至244的氨基酸序列构成的轻链可变区的抗cd137scfv，且在该抗cldn4抗体的重链羧基末端经由接头连接着该抗cd137scfv的氨基末端的双特异性抗体；或者

49、(j)含有包含由序列号6的氨基酸编号1至123的氨基酸序列构成的重链可变区的抗cldn4抗体的重链和包含由序列号8的氨基酸编号1至109的氨基酸序列构成的轻链可变区的抗cldn4抗体的轻链、以及包含由序列号34的氨基酸编号1至121的氨基酸序列构成的重链可变区和由序列号34的氨基酸编号137至247的氨基酸序列构成的轻链可变区的抗cd137scfv，且在该抗cldn4抗体的重链羧基末端经由接头连接着该抗cd137scfv的氨基末端的双特异性抗体。

50、[13]根据[11]或[12]中任一项所述的抗cldn4-抗cd137双特异性抗体，其中，接头为gs接头。

51、[14]根据[13]所述的抗cldn4-抗cd137双特异性抗体，其中，gs接头为由序列号54的氨基酸序列构成的接头。

52、[15]一种抗cldn4-抗cd137双特异性抗体，其为以下的(a)或(b)中的任意一者：

53、(a)含有由序列号36的氨基酸编号1至705的氨基酸序列构成的包含抗cldn4抗体的重链和抗cd137scfv的多肽、以及由序列号40的氨基酸编号1至215的氨基酸序列构成的抗cldn4抗体的轻链的双特异性抗体；或者

54、(b)含有由序列号38的氨基酸编号1至712的氨基酸序列构成的包含抗cldn4抗体的重链和抗cd137scfv的多肽以及由序列号40的氨基酸编号1至215的氨基酸序列构成的抗cldn4抗体的轻链的双特异性抗体。

55、[16]根据[1]～[15]中任一项所述的抗cldn4-抗cd137双特异性抗体，其经过了翻译后修饰。

56、[17]根据[16]所述的抗cldn4-抗cd137双特异性抗体，其中，翻译后修饰为重链可变区n末端的焦谷氨酰化和/或重链c末端赖氨酸缺失。

57、[18]一种多核苷酸，其选自由下述(a)～(d)组成的组、且包含编码抗cldn4抗体的重链可变区或轻链可变区的碱基序列：

58、(a)包含编码由序列号2的氨基酸编号1至125的氨基酸序列构成的抗cldn4抗体的重链可变区的碱基序列的多核苷酸；

59、(b)包含编码由序列号4的氨基酸编号1至109的氨基酸序列构成的抗cldn4抗体的轻链可变区的碱基序列的多核苷酸；

60、(c)包含编码由序列号6的氨基酸编号1至123的氨基酸序列构成的抗cldn4抗体的重链可变区的碱基序列的多核苷酸；或者

61、(d)包含编码由序列号8的氨基酸编号1至109的氨基酸序列构成的抗cldn4抗体的轻链可变区的碱基序列的多核苷酸。

62、[19]一种多核苷酸，其选自由下述(a)～(r)组成的组、且包含编码抗cd137抗体的重链可变区或轻链可变区的碱基序列：

63、(a)包含编码由序列号10的氨基酸编号1至118的氨基酸序列构成的抗cd137抗体的重链可变区的碱基序列的多核苷酸；

64、(b)包含编码由序列号12的氨基酸编号1至109的氨基酸序列构成的抗cd137抗体的轻链可变区的碱基序列的多核苷酸；

65、(c)包含编码由序列号14的氨基酸编号1至118的氨基酸序列构成的抗cd137抗体的重链可变区的碱基序列的多核苷酸；

66、(d)包含编码由序列号16的氨基酸编号1至111的氨基酸序列构成的抗cd137抗体的轻链可变区的碱基序列的多核苷酸；

67、(e)包含编码由序列号18的氨基酸编号1至118的氨基酸序列构成的抗cd137抗体的重链可变区的碱基序列的多核苷酸；

68、(f)包含编码由序列号20的氨基酸编号1至111的氨基酸序列构成的抗cd137抗体的轻链可变区的碱基序列的多核苷酸；

69、(g)包含编码由序列号22的氨基酸编号1至121的氨基酸序列构成的抗cd137抗体的重链可变区的碱基序列的多核苷酸；

70、(h)包含编码由序列号24的氨基酸编号1至111的氨基酸序列构成的抗cd137抗体的轻链可变区的碱基序列的多核苷酸；

71、(i)包含编码由序列号26的氨基酸编号1至118的氨基酸序列构成的抗cd137抗体的重链可变区的碱基序列的多核苷酸；

72、(j)包含编码由序列号26的氨基酸编号134至242的氨基酸序列构成的抗cd137抗体的轻链可变区的碱基序列的多核苷酸；

73、(k)包含编码由序列号28的氨基酸编号1至118的氨基酸序列构成的抗cd137抗体的重链可变区的碱基序列的多核苷酸；

74、(l)包含编码由序列号28的氨基酸编号134至244的氨基酸序列构成的抗cd137抗体的轻链可变区的碱基序列的多核苷酸；

75、(m)包含编码由序列号30的氨基酸编号1至111的氨基酸序列构成的抗cd137抗体的轻链可变区的碱基序列的多核苷酸；

76、(n)包含编码由序列号30的氨基酸编号132至249的氨基酸序列构成的抗cd137抗体的重链可变区的碱基序列的多核苷酸；

77、(o)包含编码由序列号32的氨基酸编号1至118的氨基酸序列构成的抗cd137抗体的重链可变区的碱基序列的多核苷酸；

78、(p)包含编码由序列号32的氨基酸编号134至244的氨基酸序列构成的抗cd137抗体的轻链可变区的碱基序列的多核苷酸；

79、(q)包含编码由序列号34的氨基酸编号1至121的氨基酸序列构成的抗cd137抗体的重链可变区的碱基序列的多核苷酸；或者

80、(r)包含编码由序列号34的氨基酸编号137至247的氨基酸序列构成的抗cd137抗体的轻链可变区的碱基序列的多核苷酸。

81、[20]一种多核苷酸，其选自由下述(a)～(e)组成的组、且包含编码抗cd137scfv的碱基序列：

82、(a)包含编码由序列号26的氨基酸编号1至242的氨基酸序列构成的抗cd137scfv的碱基序列的多核苷酸；

83、(b)包含编码由序列号28的氨基酸编号1至244的氨基酸序列构成的抗cd137scfv的碱基序列的多核苷酸；

84、(c)包含编码由序列号30的氨基酸编号1至249的氨基酸序列构成的抗cd137scfv的碱基序列的多核苷酸；

85、(d)包含编码由序列号32的氨基酸编号1至244的氨基酸序列构成的抗cd137scfv的碱基序列的多核苷酸；或者

86、(e)包含编码由序列号34的氨基酸编号1至247的氨基酸序列构成的抗cd137scfv的碱基序列的多核苷酸。

87、[21]一种多核苷酸，其用于[15]所述的抗cldn4-抗cd137双特异性抗体的生产，且选自由下述(a)～(e)组成的组：

88、(a)包含编码由序列号36的氨基酸编号1至705的氨基酸序列构成的包含抗cldn4抗体的重链和抗cd137scfv的多肽的碱基序列的多核苷酸；

89、(b)包含编码由序列号38的氨基酸编号1至712的氨基酸序列构成的包含抗cldn4抗体的重链和抗cd137scfv的多肽的碱基序列的多核苷酸；

90、(c)包含编码由序列号40的氨基酸编号1至215的氨基酸序列构成的抗cldn4抗体的轻链的碱基序列的多核苷酸；

91、(d)包含编码由序列号36的氨基酸编号1至705的氨基酸序列构成的包含抗cldn4抗体的重链和抗cd137scfv的多肽的碱基序列的多核苷酸、以及包含编码由序列号40的氨基酸编号1至215的氨基酸序列构成的抗cldn4抗体的轻链的碱基序列的多核苷酸；或者

92、(e)包含编码由序列号38的氨基酸编号1至712的氨基酸序列构成的包含抗cldn4抗体的重链和抗cd137scfv的多肽的碱基序列的多核苷酸、以及包含编码由序列号40的氨基酸编号1至215的氨基酸序列构成的抗cldn4抗体的轻链的碱基序列的多核苷酸。

93、[22]一种表达载体，其包含[18]～[21]中任一项所述的多核苷酸。

94、[23]一种宿主细胞，其利用[22]所述的表达载体进行了转化。

95、[24]一种宿主细胞，其含有选自由以下的(a)～(dd)组成的组中的多核苷酸：

96、(a)包含编码由序列号2的氨基酸编号1至125的氨基酸序列构成的抗cldn4抗体的重链可变区的碱基序列的多核苷酸；

97、(b)包含编码由序列号4的氨基酸编号1至109的氨基酸序列构成的抗cldn4抗体的轻链可变区的碱基序列的多核苷酸；

98、(c)包含编码由序列号6的氨基酸编号1至123的氨基酸序列构成的抗cldn4抗体的重链可变区的碱基序列的多核苷酸；

99、(d)包含编码由序列号8的氨基酸编号1至109的氨基酸序列构成的抗cldn4抗体的轻链可变区的碱基序列的多核苷酸。

100、(e)包含编码由序列号10的氨基酸编号1至118的氨基酸序列构成的抗cd137抗体的重链可变区的碱基序列的多核苷酸；

101、(f)包含编码由序列号12的氨基酸编号1至109的氨基酸序列构成的抗cd137抗体的轻链可变区的碱基序列的多核苷酸；

102、(g)包含编码由序列号14的氨基酸编号1至118的氨基酸序列构成的抗cd137抗体的重链可变区的碱基序列的多核苷酸；

103、(h)包含编码由序列号16的氨基酸编号1至111的氨基酸序列构成的抗cd137抗体的轻链可变区的碱基序列的多核苷酸；

104、(i)包含编码由序列号18的氨基酸编号1至118的氨基酸序列构成的抗cd137抗体的重链可变区的碱基序列的多核苷酸；

105、(j)包含编码由序列号20的氨基酸编号1至111的氨基酸序列构成的抗cd137抗体的轻链可变区的碱基序列的多核苷酸；

106、(k)包含编码由序列号22的氨基酸编号1至121的氨基酸序列构成的抗cd137抗体的重链可变区的碱基序列的多核苷酸；

107、(l)包含编码由序列号24的氨基酸编号1至111的氨基酸序列构成的抗cd137抗体的轻链可变区的碱基序列的多核苷酸。

108、(m)包含编码由序列号26的氨基酸编号1至118的氨基酸序列构成的抗cd137抗体的重链可变区的碱基序列的多核苷酸；

109、(n)包含编码由序列号26的氨基酸编号134至242的氨基酸序列构成的抗cd137抗体的轻链可变区的碱基序列的多核苷酸；

110、(o)包含编码由序列号28的氨基酸编号1至118的氨基酸序列构成的抗cd137抗体的重链可变区的碱基序列的多核苷酸；

111、(p)包含编码由序列号28的氨基酸编号134至244的氨基酸序列构成的抗cd137抗体的轻链可变区的碱基序列的多核苷酸；

112、(q)包含编码由序列号30的氨基酸编号1至111的氨基酸序列构成的抗cd137抗体的轻链可变区的碱基序列的多核苷酸；

113、(r)包含编码由序列号30的氨基酸编号132至249的氨基酸序列构成的抗cd137抗体的重链可变区的碱基序列的多核苷酸；

114、(s)包含编码由序列号32的氨基酸编号1至118的氨基酸序列构成的抗cd137抗体的重链可变区的碱基序列的多核苷酸；

115、(t)包含编码由序列号32的氨基酸编号134至244的氨基酸序列构成的抗cd137抗体的轻链可变区的碱基序列的多核苷酸；

116、(u)包含编码由序列号34的氨基酸编号1至121的氨基酸序列构成的抗cd137抗体的重链可变区的碱基序列的多核苷酸；

117、(v)包含编码由序列号34的氨基酸编号137至247的氨基酸序列构成的抗cd137抗体的轻链可变区的碱基序列的多核苷酸；

118、(w)包含编码由序列号26的氨基酸编号1至242的氨基酸序列构成的抗cd137scfv的碱基序列的多核苷酸；

119、(x)包含编码由序列号28的氨基酸编号1至244的氨基酸序列构成的抗cd137scfv的碱基序列的多核苷酸；

120、(y)包含编码由序列号30的氨基酸编号1至249的氨基酸序列构成的抗cd137scfv的碱基序列的多核苷酸；

121、(z)包含编码由序列号32的氨基酸编号1至244的氨基酸序列构成的抗cd137scfv的碱基序列的多核苷酸；

122、(aa)包含编码由序列号34的氨基酸编号1至247的氨基酸序列构成的抗cd137scfv的碱基序列的多核苷酸。

123、(bb)包含编码由序列号36的氨基酸编号1至705的氨基酸序列构成的包含抗cldn4抗体的重链和抗cd137scfv的多肽的碱基序列的多核苷酸；

124、(cc)包含编码由序列号38的氨基酸编号1至712的氨基酸序列构成的包含抗cldn4抗体的重链和抗cd137scfv的多肽的碱基序列的多核苷酸；或者

125、(dd)包含编码由序列号40的氨基酸编号1至215的氨基酸序列构成的抗cldn4抗体的轻链的碱基序列的多核苷酸。

126、[25]一种宿主细胞，其含有以下的(a)或(b)中的任意一者的多核苷酸：

127、(a)包含编码由序列号36的氨基酸编号1至705的氨基酸序列构成的包含抗cldn4抗体的重链和抗cd137scfv的多肽的碱基序列的多核苷酸、以及包含编码由序列号40的氨基酸编号1至215的氨基酸序列构成的抗cldn4抗体的轻链的碱基序列的多核苷酸；或者

128、(b)包含编码由序列号38的氨基酸编号1至712的氨基酸序列构成的包含抗cldn4抗体的重链和抗cd137scfv的多肽的碱基序列的多核苷酸、以及包含编码由序列号40的氨基酸编号1至215的氨基酸序列构成的抗cldn4抗体的轻链的碱基序列的多核苷酸。

129、[26]一种抗cldn4-抗cd137双特异性抗体的生产方法，其包括对[23]～[25]中任一项所述的宿主细胞进行培养的步骤。

130、[27]一种药物组合物，其包含[1]～[17]中任一项所述的抗cldn4-抗cd137双特异性抗体和药学上可接受的赋形剂。

131、[28]根据[1]～[17]中任一项所述的抗cldn4-抗cd137双特异性抗体，其用于癌的治疗。

132、[29]根据[27]所述的药物组合物，其用于癌的治疗。

133、[30]一种治疗癌的方法，其包括将治疗有效量的[1]～[17]中任一项所述的抗cldn4-抗cd137双特异性抗体向对象给药的步骤。

134、[31][1]～[17]中任一项所述的抗cldn4-抗cd137双特异性抗体在制造用于癌的治疗的药物组合物中的应用。

135、发明效果

136、本发明的抗cldn4-抗cd137双特异性抗体与作为癌抗原的cldn4和在t细胞等免疫细胞的表面表达的cd137这两者结合，将癌细胞周边的免疫细胞活化，由此使对癌细胞的杀伤作用增强。本发明的抗cldn4-抗cd137双特异性抗体或包含上述抗体的药物组合物能够用于各种癌的治疗。