用于免疫效应细胞重定向的材料和方法与流程

1.本公开尤其涉及自然杀伤细胞衔接器，包括抗nkg2d分子、抗nkp46分子和包含这些分子或其片段的多特异性分子，以及编码该分子的核酸和表达载体、包含该载体的重组细胞和包含该分子的组合物。还提供了制备该分子的方法和使用该分子将免疫效应细胞针对肿瘤细胞重定向的方法。

背景技术：

0、2.背景技术

1、肿瘤细胞可以通过抗体在治疗上靶向破坏。治疗性抗体可使用多种机制使免疫效应细胞与靶肿瘤细胞接合以进行破坏。使用结合肿瘤细胞的双特异性抗体(bsab)和使它们紧密靠近的效应细胞，可以将效应细胞针对肿瘤细胞重定向。另选地，单克隆抗体(mab)可通过它们的可变区与肿瘤细胞接合，并通过fc区与主要在单核细胞、巨噬细胞和nk细胞上表达的fc g受体之间的相互作用募集效应细胞。

2、3.
技术实现要素：

3、本发明人率先发现了本文所述的多特异性抗体，该多特异性抗体包含与在自然杀伤(nk)细胞上表达的第一抗原结合的第一结合结构域和与在肿瘤细胞上表达的第二抗原结合的第二结合结构域。

4、在一个方面，本文提供了一种多特异性抗体，该多特异性抗体包含与在自然杀伤(nk)细胞上表达的第一抗原结合的第一结合结构域和与第二抗原结合的第二结合结构域。

5、在本文提供的多特异性抗体的一些实施方案中，该第一抗原是nk细胞活化受体。

6、在本文提供的多特异性抗体的一些实施方案中，该第一抗原是nkg2d。

7、在本文提供的多特异性抗体的一些实施方案中，该第一结合结构域包含：重链可变区(vh)，其包含(a)具有seq id no:4的氨基酸序列的vh互补决定区(cdr)1、具有seq idno:5的氨基酸序列的vh cdr2和具有seq id no:6的氨基酸序列的vh cdr3；(b)具有seq idno:10的氨基酸序列的vh互补决定区(cdr)1、具有seq id no:11的氨基酸序列的vh cdr2和具有seq id no:12的氨基酸序列的vh cdr3；(c)具有seq id no:16的氨基酸序列的vh互补决定区(cdr)1、具有seq id no:17的氨基酸序列的vh cdr2和具有seq id no:18的氨基酸序列的vh cdr3；(d)具有seq id no:22的氨基酸序列的vh互补决定区(cdr)1、具有seq idno:23的氨基酸序列的vh cdr2和具有seq id no:24的氨基酸序列的vh cdr3；或(e)具有seq id no:28的氨基酸序列的vh互补决定区(cdr)1、具有seq id no:29的氨基酸序列的vhcdr2和具有seq id no:30的氨基酸序列的vh cdr3；以及轻链可变区(vl)，其包含(a)具有seq id no:7的氨基酸序列的vl cdr1、具有seq id no:8的氨基酸序列的vl cdr2和具有seq id no:9的氨基酸序列的vl cdr3；(b)具有seq id no:13的氨基酸序列的vl cdr1、具有seq id no:14的氨基酸序列的vl cdr2和具有seq id no:15的氨基酸序列的vl cdr3；(c)

8、具有seq id no:19的氨基酸序列的vl cdr1、具有seq id no:20的氨基酸序列的vl cdr2和具有seq id no:21的氨基酸序列的vl cdr3；(d)具有seq id no:25的氨基酸序列的vl cdr1、具有seq id no:26的氨基酸序列的vl cdr2和具有seq id no:27的氨基酸序列的vl cdr3；或(e)具有seq id no:31的氨基酸序列的vl cdr1、具有seq id no:32的氨基酸序列的vl cdr2和具有seq id no:33的氨基酸序列的vl cdr3。

9、在本文提供的多特异性抗体的一些实施方案中，该第一结合结构域包含：具有seqid no:2的氨基酸序列的vh和具有seq id no:3的氨基酸序列的vl。

10、在本文提供的多特异性抗体的一些实施方案中，该第一结合结构域包含：(i)重链可变区(vh)，其包含(a)具有seq id no:36的氨基酸序列的vh互补决定区(cdr)1、具有seqid no:37的氨基酸序列的vh cdr2和具有seq id no:38的氨基酸序列的vh cdr3；(b)具有seq id no:42的氨基酸序列的vh互补决定区(cdr)1、具有seq id no:43的氨基酸序列的vhcdr2和具有seq id no:44的氨基酸序列的vh cdr3；(c)具有seq id no:48的氨基酸序列的vh互补决定区(cdr)1、具有seq id no:49的氨基酸序列的vh cdr2和具有seq id no:50的氨基酸序列的vh cdr3；(d)具有seq id no:54的氨基酸序列的vh互补决定区(cdr)1、具有seq id no:55的氨基酸序列的vh cdr2和具有seq id no:56的氨基酸序列的vh cdr3；或(e)具有seq id no:60的氨基酸序列的vh互补决定区(cdr)1、具有seq id no:61的氨基酸序列的vh cdr2和具有seq id no:62的氨基酸序列的vh cdr3；以及(ii)轻链可变区(vl)，其包含(a)具有seq id no:39的氨基酸序列的vl cdr1、具有seq id no:40的氨基酸序列的vl cdr2和具有seq id no:41的氨基酸序列的vl cdr3；(b)具有seq id no:45的氨基酸序列的vl cdr1、具有seq id no:46的氨基酸序列的vl cdr2和具有seq id no:47的氨基酸序列的vl cdr3；(c)具有seq id no:51的氨基酸序列的vl cdr1、具有seq id no:52的氨基酸序列的vl cdr2和具有seq id no:53的氨基酸序列的vl cdr3；(d)具有seq id no:57的氨基酸序列的vl cdr1、具有seq id no:58的氨基酸序列的vl cdr2和具有seq id no:59的氨基酸序列的vl cdr3；或(e)具有seq id no:63的氨基酸序列的vl cdr1、具有seq id no:64的氨基酸序列的vl cdr2和具有seq id no:65的氨基酸序列的vl cdr3。

11、在本文提供的多特异性抗体的一些实施方案中，该第一结合结构域包含：具有seqid no:34的氨基酸序列的vh和具有seq id no:35的氨基酸序列的vl。

12、在本文提供的多特异性抗体的一些实施方案中，该第一抗原是nkp46。

13、在本文提供的多特异性抗体的一些实施方案中，该第一结合结构域包含：(i)重链可变区(vh)，其包含(a)具有seq id no:69的氨基酸序列的vh互补决定区(cdr)1、具有seqid no:70的氨基酸序列的vh cdr2和具有seq id no:71的氨基酸序列的vh cdr3；(b)具有seq id no:75的氨基酸序列的vh互补决定区(cdr)1、具有seq id no:76的氨基酸序列的vhcdr2和具有seq id no:77的氨基酸序列的vh cdr3；(c)具有seq id no:81的氨基酸序列的vh互补决定区(cdr)1、具有seq id no:82的氨基酸序列的vh cdr2和具有seq id no:83的氨基酸序列的vh cdr3；(d)具有seq id no:87的氨基酸序列的vh互补决定区(cdr)1、具有seq id no:88的氨基酸序列的vh cdr2和具有seq id no:89的氨基酸序列的vh cdr3；或(e)具有seq id no:93的氨基酸序列的vh互补决定区(cdr)1、具有seq id no:94的氨基酸序列的vh cdr2和具有seq id no:95的氨基酸序列的vh cdr3；以及(ii)轻链可变区(vl)，其包含(a)具有seq id no:72的氨基酸序列的vl cdr1、具有seq id no:73的氨基酸序列的vl cdr2和具有seq id no:74的氨基酸序列的vl cdr3；(b)具有seq id no:78的氨基酸序列的vl cdr1、具有seq id no:79的氨基酸序列的vl cdr2和具有seq id no:80的氨基酸序列的vl cdr3；(c)具有seq id no:84的氨基酸序列的vl cdr1、具有seq id no:85的氨基酸序列的vl cdr2和具有seq id no:86的氨基酸序列的vl cdr3；(d)具有seq id no:90的氨基酸序列的vl cdr1、具有seq id no:91的氨基酸序列的vl cdr2和具有seq id no:92的氨基酸序列的vl cdr3；或(e)具有seq id no:96的氨基酸序列的vl cdr1、具有seq id no:97的氨基酸序列的vl cdr2和具有seq id no:98的氨基酸序列的vl cdr3。

14、在本文提供的多特异性抗体的一些实施方案中，该第一结合结构域包含：具有seqid no:67的氨基酸序列的vh和具有seq id no:68的氨基酸序列的vl。

15、在本文提供的多特异性抗体的一些实施方案中，该第二抗原位于细胞表面上。

16、在本文提供的多特异性抗体的一些实施方案中，该第二抗原在肿瘤细胞上表达。

17、在本文提供的多特异性抗体的一些实施方案中，该第二抗原是肿瘤特异性抗原(tsa)或肿瘤相关抗原(taa)。

18、在本文提供的多特异性抗体的一些实施方案中，该第二抗原是bcma。

19、在本文提供的多特异性抗体的一些实施方案中，第二抗原是gprc5d。

20、在本文提供的多特异性抗体的一些实施方案中，该第一结合结构域是人源化的。在本文提供的多特异性抗体的一些实施方案中，该第二结合结构域是人源化的。在本文提供的多特异性抗体的一些实施方案中，该第一结合结构域和该第二结合结构域两者均是人源化的。

21、在本文提供的多特异性抗体的一些实施方案中，该多特异性抗体是igg抗体。

22、在本文提供的多特异性抗体的一些实施方案中，该igg抗体是igg1、igg2、igg3或igg4抗体。

23、在本文提供的多特异性抗体的一些实施方案中，该igg抗体是igg1抗体。

24、在本文提供的多特异性抗体的一些实施方案中，该igg1包含沉默突变。在本文提供的多特异性抗体的一些实施方案中，该igg1包含aas突变。在一些实施方案中，包含该aas突变的该多特异性抗体可诱导肿瘤细胞的nk细胞依赖性细胞毒性。

25、在本文提供的多特异性抗体的一些实施方案中，该igg1包含用于增强抗体的效应子功能的突变。在本文提供的多特异性抗体的一些实施方案中，该igg1包含k248e/t437r突变。在一些实施方案中，包含该k248e/t437r突变的该多特异性抗体缺乏抗nk细胞的细胞毒性。

26、在本文提供的多特异性抗体的一些实施方案中，对该fc区进行非岩藻糖修饰。

27、在本文提供的多特异性抗体的一些实施方案中，该多特异性抗体是双特异性抗体。

28、在本文提供的多特异性抗体的一些实施方案中，该双特异性抗体呈两脚台支架构型(bipod-scaffold configuration)。

29、在本文提供的多特异性抗体的一些实施方案中，该第一结合结构域是fab区，并且该第二结合结构域是scfv区。

30、在本文提供的多特异性抗体的一些实施方案中，该双特异性抗体呈莫里森支架构型(morrison-scaffold configuration)。

31、在本文提供的多特异性抗体的一些实施方案中，该第一结合结构域包含两个fab区，并且该第二结合结构域包含两个scfv区。

32、在本文提供的多特异性抗体的一些实施方案中，该多特异性抗体缺乏抗nk细胞的细胞毒性。

33、在本文提供的多特异性抗体的一些实施方案中，该多特异性抗体在体外以小于约500pm的ic50诱导肿瘤细胞的nk细胞依赖性细胞毒性。在一些实施方案中，该多特异性抗体在体外以小于约300pm的ic50诱导肿瘤细胞的nk细胞依赖性细胞毒性。在一些实施方案中，该多特异性抗体在体外以小于约100pm的ic50诱导肿瘤细胞的nk细胞依赖性细胞毒性。在一些实施方案中，该多特异性抗体在体外以小于约50pm的ic50诱导肿瘤细胞的nk细胞依赖性细胞毒性。在一些实施方案中，该多特异性抗体在体外以小于约20pm的ic50诱导肿瘤细胞的nk细胞依赖性细胞毒性。在一些实施方案中，该多特异性抗体在体外以小于约15pm的ic50诱导肿瘤细胞的nk细胞依赖性细胞毒性。在一些实施方案中，该多特异性抗体在体外以小于约10pm的ic50诱导肿瘤细胞的nk细胞依赖性细胞毒性。

34、在本文提供的多特异性抗体的一些实施方案中，用nk效应细胞和表达该第二抗原的靶细胞的混合物评估该ic50。

35、在本文提供的多特异性抗体的一些实施方案中，效应细胞与靶细胞的比率为约0.01:1至约10:1。在本文提供的多特异性抗体的一些实施方案中，效应细胞与靶细胞的比率为约0.01:1至约5:1。在一些实施方案中，效应细胞与靶细胞的比率为约0.1:1至约2:1。在一些实施方案中，效应细胞与靶细胞的比率为约1:1。

36、在另一方面，提供了编码本文提供的多特异性抗体的核酸。还提供了一种载体，该载体包含编码本文提供的多特异性抗体的核酸。还提供了包含载体的宿主细胞，该载体包含编码本文提供的多特异性抗体的核酸。还提供了一种试剂盒，该试剂盒包括包含编码本文提供的多特异性抗体的核酸的载体以及用于该载体的包装。

37、在另一方面，本文提供了一种结合nkg2d的抗体，该抗体包含：(i)重链可变区(vh)，其包含(a)具有seq id no:4的氨基酸序列的vh互补决定区(cdr)1、具有seq id no:5的氨基酸序列的vh cdr2和具有seq id no:6的氨基酸序列的vh cdr3；(b)具有seq id no:10的氨基酸序列的vh互补决定区(cdr)1、具有seq id no:11的氨基酸序列的vh cdr2和具有seq id no:12的氨基酸序列的vh cdr3；(c)具有seq id no:16的氨基酸序列的vh互补决定区(cdr)1、具有seq id no:17的氨基酸序列的vh cdr2和具有seq id no:18的氨基酸序列的vh cdr3；(d)具有seq id no:22的氨基酸序列的vh互补决定区(cdr)1、具有seq idno:23的氨基酸序列的vh cdr2和具有seq id no:24的氨基酸序列的vh cdr3；或(e)具有seq id no:28的氨基酸序列的vh互补决定区(cdr)1、具有seq id no:29的氨基酸序列的vhcdr2和具有seq id no:30的氨基酸序列的vh cdr3；以及(ii)轻链可变区(vl)，其包含(a)具有seq id no:7的氨基酸序列的vl cdr1、具有seq id no:8的氨基酸序列的vl cdr2和具有seq id no:9的氨基酸序列的vl cdr3；(b)具有seq id no:13的氨基酸序列的vl cdr1、具有seq id no:14的氨基酸序列的vl cdr2和具有seq id no:15的氨基酸序列的vl cdr3；(c)具有seq id no:19的氨基酸序列的vl cdr1、具有seq id no:20的氨基酸序列的vlcdr2和具有seq id no:21的氨基酸序列的vl cdr3；(d)具有seq id no:25的氨基酸序列的vl cdr1、具有seq id no:26的氨基酸序列的vl cdr2和具有seq id no:27的氨基酸序列的vl cdr3；或(e)具有seq id no:31的氨基酸序列的vl cdr1、具有seq id no:32的氨基酸序列的vl cdr2和具有seq id no:33的氨基酸序列的vl cdr3。

38、在本文提供的结合nkg2d的抗体的一些实施方案中，该第一结合结构域包含具有seq id no:2的氨基酸序列的vh和具有seq id no:3的氨基酸序列的vl。

39、在另一方面，本文提供了一种结合nkg2d的抗体，该抗体包含：(i)重链可变区(vh)，其包含(a)具有seq id no:36的氨基酸序列的vh互补决定区(cdr)1、具有seq id no:37的氨基酸序列的vh cdr2和具有seq id no:38的氨基酸序列的vh cdr3；(b)具有seq idno:42的氨基酸序列的vh互补决定区(cdr)1、具有seq id no:43的氨基酸序列的vh cdr2和具有seq id no:44的氨基酸序列的vh cdr3；(c)具有seq id no:48的氨基酸序列的vh互补决定区(cdr)1、具有seq id no:49的氨基酸序列的vh cdr2和具有seq id no:50的氨基酸序列的vh cdr3；(d)具有seq id no:54的氨基酸序列的vh互补决定区(cdr)1、具有seq idno:55的氨基酸序列的vh cdr2和具有seq id no:56的氨基酸序列的vh cdr3；或(e)具有seq id no:60的氨基酸序列的vh互补决定区(cdr)1、具有seq id no:61的氨基酸序列的vhcdr2和具有seq id no:62的氨基酸序列的vh cdr3；以及(ii)轻链可变区(vl)，其包含(a)具有seq id no:39的氨基酸序列的vl cdr1、具有seq id no:40的氨基酸序列的vl cdr2和具有seq id no:41的氨基酸序列的vl cdr3；(b)具有seq id no:45的氨基酸序列的vlcdr1、具有seq id no:46的氨基酸序列的vl cdr2和具有seq id no:47的氨基酸序列的vlcdr3；(c)具有seq id no:51的氨基酸序列的vl cdr1、具有seq id no:52的氨基酸序列的vl cdr2和具有seq id no:53的氨基酸序列的vl cdr3；(d)具有seq id no:57的氨基酸序列的vl cdr1、具有seq id no:58的氨基酸序列的vl cdr2和具有seq id no:59的氨基酸序列的vl cdr3；或(e)具有seq id no:63的氨基酸序列的vl cdr1、具有seq id no:64的氨基酸序列的vl cdr2和具有seq id no:65的氨基酸序列的vl cdr3。

40、在本文提供的结合nkg2d的抗体的一些实施方案中，该第一结合结构域包含：具有seq id no:34的氨基酸序列的vh和具有seq id no:35的氨基酸序列的vl。

41、在另一方面，本文提供了一种结合nkp46的抗体，该抗体包含：(i)重链可变区(vh)，其包含(a)具有seq id no:69的氨基酸序列的vh互补决定区(cdr)1、具有seq id no:70的氨基酸序列的vh cdr2和具有seq id no:71的氨基酸序列的vh cdr3；(b)具有seq idno:75的氨基酸序列的vh互补决定区(cdr)1、具有seq id no:76的氨基酸序列的vh cdr2和具有seq id no:77的氨基酸序列的vh cdr3；(c)具有seq id no:81的氨基酸序列的vh互补决定区(cdr)1、具有seq id no:82的氨基酸序列的vh cdr2和具有seq id no:83的氨基酸序列的vh cdr3；(d)具有seq id no:87的氨基酸序列的vh互补决定区(cdr)1、具有seq idno:88的氨基酸序列的vh cdr2和具有seq id no:89的氨基酸序列的vh cdr3；或(e)具有seq id no:93的氨基酸序列的vh互补决定区(cdr)1、具有seq id no:94的氨基酸序列的vhcdr2和具有seq id no:95的氨基酸序列的vh cdr3；以及(ii)轻链可变区(vl)，其包含(a)具有seq id no:72的氨基酸序列的vl cdr1、具有seq id no:73的氨基酸序列的vl cdr2和具有seq id no:74的氨基酸序列的vl cdr3；(b)具有seq id no:78的氨基酸序列的vlcdr1、具有seq id no:79的氨基酸序列的vl cdr2和具有seq id no:80的氨基酸序列的vlcdr3；(c)具有seq id no:84的氨基酸序列的vl cdr1、具有seq id no:85的氨基酸序列的vl cdr2和具有seq id no:86的氨基酸序列的vl cdr3；(d)具有seq id no:90的氨基酸序列的vl cdr1、具有seq id no:91的氨基酸序列的vl cdr2和具有seq id no:92的氨基酸序列的vl cdr3；或(e)具有seq id no:96的氨基酸序列的vl cdr1、具有seq id no:97的氨基酸序列的vl cdr2和具有seq id no:98的氨基酸序列的vl cdr3。

42、在本文提供的结合nkp46的抗体的一些实施方案中，该第一结合结构域包含：具有seq id no:67的氨基酸序列的vh和具有seq id no:68的氨基酸序列的vl。

43、在另一方面，本文提供了一种编码本文提供的抗体的核酸。还提供了一种载体，该载体包含编码本文提供的抗体的核酸。还提供了包含载体的宿主细胞，该载体包含编码本文提供的抗体的核酸。还提供了一种试剂盒，该试剂盒包括：包含编码本文提供的抗体的核酸的载体，和用于该载体的包装。

44、在又另一方面，本文提供了一种药物组合物，该药物组合物包含本文提供的多特异性抗体和药学上可接受的载体，其中该多特异性抗体包含：与在自然杀伤(nk)细胞上表达的第一抗原结合的第一结合结构域和与第二抗原结合的第二结合结构域。

45、在本文提供的药物组合物的一些实施方案中，该第一抗原是nk细胞活化受体。

46、在本文提供的药物组合物的一些实施方案中，该第一抗原是nkg2d。

47、在本文提供的药物组合物的一些实施方案中，该第一抗原是nkp46。

48、在本文提供的药物组合物的一些实施方案中，该第二抗原位于细胞表面上。

49、在本文提供的药物组合物的一些实施方案中，该第二抗原在肿瘤细胞上表达。

50、在本文提供的药物组合物的一些实施方案中，该第二抗原是肿瘤特异性抗原(tsa)或肿瘤相关抗原(taa)。

51、在本文提供的药物组合物的一些实施方案中，该第二抗原是bcma。

52、在本文提供的药物组合物的一些实施方案中，第二抗原是gprc5d。

53、在本文提供的药物组合物的一些实施方案中，该第一结合结构域是人源化的。在本文提供的药物组合物的一些实施方案中，该第二结合结构域是人源化的。在本文提供的药物组合物的一些实施方案中，该第一结合结构域和该第二结合结构域两者均是人源化的。

54、在本文提供的药物组合物的一些实施方案中，多特异性抗体是igg抗体。

55、在本文提供的药物组合物的一些实施方案中，该igg抗体是igg1、igg2、igg3或igg4抗体。

56、在本文提供的药物组合物的一些实施方案中，该igg抗体是igg1抗体。

57、在本文提供的药物组合物的一些实施方案中，该igg1包含沉默突变。在本文提供的药物组合物的一些实施方案中，该igg1包含aas突变。

58、在本文提供的药物组合物的一些实施方案中，该igg1包含用于增强抗体的效应子功能的突变。在本文提供的药物组合物的一些实施方案中，该igg1包含k248e/t437r突变。

59、在本文提供的药物组合物的一些实施方案中，对该fc区进行非岩藻糖修饰。

60、在本文提供的药物组合物的一些实施方案中，多特异性抗体是双特异性抗体。

61、在本文提供的药物组合物的一些实施方案中，该双特异性抗体呈两脚台支架构型。

62、在本文提供的药物组合物的一些实施方案中，该第一结合结构域是fab区，并且该第二结合结构域是scfv区。

63、在本文提供的药物组合物的一些实施方案中，该双特异性抗体呈莫里森支架构型。

64、在本文提供的药物组合物的一些实施方案中，该第一结合结构域包含两个fab区，并且该第二结合结构域包含两个scfv区。

65、在本文提供的药物组合物的一些实施方案中，该多特异性抗体在体外以小于约500pm的ic50诱导肿瘤细胞的nk细胞依赖性细胞毒性。在一些实施方案中，该多特异性抗体在体外以小于约300pm的ic50诱导肿瘤细胞的nk细胞依赖性细胞毒性。在一些实施方案中，该多特异性抗体在体外以小于约100pm的ic50诱导肿瘤细胞的nk细胞依赖性细胞毒性。在一些实施方案中，该多特异性抗体在体外以小于约50pm的ic50诱导肿瘤细胞的nk细胞依赖性细胞毒性。在一些实施方案中，该多特异性抗体在体外以小于约20pm的ic50诱导肿瘤细胞的nk细胞依赖性细胞毒性。在一些实施方案中，该多特异性抗体在体外以小于约15pm的ic50诱导肿瘤细胞的nk细胞依赖性细胞毒性。在一些实施方案中，该多特异性抗体在体外以小于约10pm的ic50诱导肿瘤细胞的nk细胞依赖性细胞毒性。

66、在本文提供的药物组合物的一些实施方案中，用nk效应细胞和表达该第二抗原的靶细胞的混合物评估该ic50。

67、在本文提供的药物组合物的一些实施方案中，效应细胞与靶细胞的比率为约0.01:1至约10:1。在本文提供的药物组合物的一些实施方案中，效应细胞与靶细胞的比率为约0.01:1至约5:1。在一些实施方案中，效应细胞与靶细胞的比率为约0.1:1至约2:1。在一些实施方案中，效应细胞与靶细胞的比率为约1:1。

68、在又另一方面，本文提供了一种用于制备多特异性抗体的方法，该方法包括向宿主细胞中引入一种或多种核酸，该一种或多种核酸编码与在nk细胞上表达的第一抗原结合的第一结合结构域和与第二抗原结合的第二结合结构域。

69、在用于制备本文提供的多特异性抗体的方法的一些实施方案中，该第一抗原是nk细胞活化受体。

70、在用于制备本文提供的多特异性抗体的方法的一些实施方案中，其中该多特异性抗体是本文提供的多特异性抗体。

71、在用于制备本文提供的多特异性抗体的方法的一些实施方案中，第一抗原是nkp46。在用于制备本文提供的多特异性抗体的方法的一些实施方案中，第一抗原是nkg2d。

72、在用于制备本文提供的多特异性抗体的方法的一些实施方案中，该第二抗原位于细胞表面上。

73、在用于制备本文提供的多特异性抗体的方法的一些实施方案中，该第二抗原在肿瘤细胞上表达。

74、在用于制备本文提供的多特异性抗体的方法的一些实施方案中，该第二抗原是肿瘤特异性抗原(tsa)或肿瘤相关抗原(taa)。

75、在用于制备本文提供的多特异性抗体的方法的一些实施方案中，该第二抗原是bcma。

76、在用于制备本文提供的多特异性抗体的方法的一些实施方案中，第二抗原是gprc5d。

77、在用于制备本文提供的多特异性抗体的方法的一些实施方案中，该第一结合结构域是人源化的。在用于制备本文提供的多特异性抗体的方法的一些实施方案中，该第二结合结构域是人源化的。在用于制备本文提供的多特异性抗体的方法的一些实施方案中，该第一结合结构域和该第二结合结构域两者均是人源化的。

78、在用于制备本文提供的多特异性抗体的方法的一些实施方案中，该多特异性抗体是igg抗体。

79、在用于制备本文提供的多特异性抗体的方法的一些实施方案中，该igg抗体是igg1、igg2、igg3或igg4抗体。

80、在用于制备本文提供的多特异性抗体的方法的一些实施方案中，该igg抗体是igg1抗体。

81、在本文提供的方法的一些实施方案中，该igg1包含沉默突变。在本文提供的方法的一些实施方案中，该igg1包含aas突变。

82、在本文提供的方法的一些实施方案中，该igg1包含用于增强抗体的效应子功能的突变。在本文提供的方法的一些实施方案中，该igg1包含k248e/t437r突变。

83、在本文提供的方法的一些实施方案中，对该fc区进行非岩藻糖修饰。

84、在用于制备本文提供的多特异性抗体的方法的一些实施方案中，该多特异性抗体是双特异性抗体。

85、在用于制备本文提供的多特异性抗体的方法的一些实施方案中，该双特异性抗体呈两脚台支架构型。

86、在用于制备本文提供的多特异性抗体的方法的一些实施方案中，该第一结合结构域是fab区，并且该第二结合结构域是scfv区。

87、在用于制备本文提供的多特异性抗体的方法的一些实施方案中，该双特异性抗体呈莫里森支架构型。

88、在用于制备本文提供的多特异性抗体的方法的一些实施方案中，该第一结合结构域包含两个fab区，并且该第二结合结构域包含两个scfv区。

89、在用于制备本文提供的多特异性抗体的方法的一些实施方案中，该多特异性抗体在体外以小于约500pm的ic50诱导肿瘤细胞的νk细胞依赖性细胞毒性。在一些实施方案中，该多特异性抗体在体外以小于约300pm的ic50诱导肿瘤细胞的νk细胞依赖性细胞毒性。在一些实施方案中，该多特异性抗体在体外以小于约100pm的ic50诱导肿瘤细胞的νk细胞依赖性细胞毒性。在一些实施方案中，该多特异性抗体在体外以小于约50pm的ic50诱导肿瘤细胞的νk细胞依赖性细胞毒性。在一些实施方案中，该多特异性抗体在体外以小于约20pm的ic50诱导肿瘤细胞的νk细胞依赖性细胞毒性。在一些实施方案中，该多特异性抗体在体外以小于约15pm的ic50诱导肿瘤细胞的νk细胞依赖性细胞毒性。在一些实施方案中，该多特异性抗体在体外以小于约10pm的ic50诱导肿瘤细胞的νk细胞依赖性细胞毒性。

90、在用于制备本文提供的多特异性抗体的方法的一些实施方案中，用νk效应细胞和表达该第二抗原的靶细胞的混合物评估该ic50。

91、在用于制备本文提供的多特异性抗体的方法的一些实施方案中，效应细胞与靶细胞的比率为约0.01:1至约10:1。在用于制备本文提供的多特异性抗体的方法的一些实施方案中，效应细胞与靶细胞的比率为约0.01:1至约5:1。在一些实施方案中，效应细胞与靶细胞的比率为约0.1:1至约2:1。在一些实施方案中，效应细胞与靶细胞的比率为约1:1。

92、在另一方面，本文提供了一种将nk细胞引导至靶细胞的方法，该方法包括使该nk细胞与多特异性抗体接触，从而将该nk细胞引导至该靶细胞，其中该多特异性抗体包含与nk细胞上的第一抗原结合的第一结合结构域和与靶细胞上的第二抗原结合的第二结合结构域。

93、在另一方面，本文提供了多特异性抗体用于将nk细胞引导至靶细胞的用途，该用途包括使该nk细胞与该多特异性抗体接触，从而将该nk细胞引导至该靶细胞，其中该多特异性抗体包含与nk细胞上的第一抗原结合的第一结合结构域和与靶细胞上的第二抗原结合的第二结合结构域。

94、在另一方面，本文提供了一种使nk细胞活化的方法，该方法包括使该nk与多特异性抗体接触，其中该多特异性抗体包含与该nk细胞上的第一抗原结合的第一结合结构域和与靶细胞上的第二抗原结合的第二结合结构域。

95、在另一方面，本文提供了多特异性抗体用于使nk细胞活化的用途，该用途包括使该nk与该多特异性抗体接触，其中该多特异性抗体包含与该nk细胞上的第一抗原结合的第一结合结构域和与靶细胞上的第二抗原结合的第二结合结构域。

96、在另一方面，本文提供了一种抑制在细胞表面上表达第二抗原的靶细胞的生长或增殖的方法，该方法包括使该靶细胞与多特异性抗体接触，其中该多特异性抗体包含与nk细胞上的第一抗原结合的第一结合结构域和与该第二抗原结合的第二结合结构域。

97、在另一方面，本文提供了多特异性抗体用于抑制在细胞表面上表达第二抗原的靶细胞的生长或增殖的用途，该多特异性抗体的用途包括使该靶细胞与该多特异性抗体接触，其中该多特异性抗体包含与nk细胞上的第一抗原结合的第一结合结构域和与该第二抗原结合的第二结合结构域。

98、在另一方面，本文提供了一种用于在受试者中消除表达第二抗原的靶细胞或治疗全部或部分地由表达该第二抗原的靶细胞引起的疾病或病症的方法，该方法包括向该受试者施用有效量的多特异性抗体，其中该多特异性抗体包含与nk细胞上的第一抗原结合的第一结合结构域和与该第二抗原结合的第二结合结构域。

99、在另一方面，本文提供了多特异性抗体用于在受试者中消除表达第二抗原的靶细胞或治疗全部或部分地由表达该第二抗原的靶细胞引起的疾病或病症的用途，该用途包括向该受试者施用有效量的多特异性抗体，其中该多特异性抗体包含与nk细胞上的第一抗原结合的第一结合结构域和与该第二抗原结合的第二结合结构域。

100、在一些实施方案中，受试者是有需要的受试者。在一些实施方案中，受试者是人。

101、在一些实施方案中，疾病或障碍为癌症。在一些实施方案中，癌症是血癌。在一些实施方案中，癌症是实体瘤癌症。

102、在本文提供的方法的一些实施方案中，该第一抗原是nk细胞活化受体。

103、在本文提供的方法的一些实施方案中，第一抗原是nkg2d。在本文提供的方法的一些实施方案中，第一抗原是nkp46。在一些实施方案中，该多特异性抗体是本文提供的多特异性抗体。

104、在本文提供的方法的一些实施方案中，该第二抗原位于细胞表面上。

105、在本文提供的方法的一些实施方案中，该第二抗原在肿瘤细胞上表达。

106、在本文提供的方法的一些实施方案中，该第二抗原是肿瘤特异性抗原(tsa)或肿瘤相关抗原(taa)。

107、在本文提供的方法的一些实施方案中，该第二抗原是bcma。

108、在本文提供的方法的一些实施方案中，第二抗原是gprc5d。

109、在本文提供的方法的一些实施方案中，该第一结合结构域是人源化的。在本文提供的方法的一些实施方案中，该第二结合结构域是人源化的。在本文提供的方法的一些实施方案中，该第一结合结构域和该第二结合结构域两者均是人源化的。

110、在本文提供的方法的一些实施方案中，多特异性抗体是igg抗体。

111、在本文提供的方法的一些实施方案中，该igg抗体是igg1、igg2、igg3或igg4抗体。

112、在本文提供的方法的一些实施方案中，该igg抗体是igg1抗体。

113、在本文提供的方法的一些实施方案中，该igg1包含沉默突变。在本文提供的方法的一些实施方案中，该igg1包含aas突变。

114、在本文提供的方法的一些实施方案中，该igg1包含用于增强抗体的效应子功能的突变。在本文提供的方法的一些实施方案中，该igg1包含k248e/t437r突变。

115、在本文提供的方法的一些实施方案中，对该fc区进行非岩藻糖修饰。

116、在本文提供的方法的一些实施方案中，多特异性抗体是双特异性抗体。

117、在本文提供的方法的一些实施方案中，该双特异性抗体呈两脚台支架构型。

118、在本文提供的方法的一些实施方案中，该第一结合结构域是fab区，并且该第二结合结构域是scfv区。

119、在本文提供的方法的一些实施方案中，该双特异性抗体呈莫里森支架构型。

120、在本文提供的方法的一些实施方案中，该第一结合结构域包含两个fab区，并且该第二结合结构域包含两个scfv区。

121、在本文提供的方法的一些实施方案中，该多特异性抗体在体外以小于约500pm的ic50诱导肿瘤细胞的nk细胞依赖性细胞毒性。在一些实施方案中，该多特异性抗体在体外以小于约300pm的ic50诱导肿瘤细胞的nk细胞依赖性细胞毒性。在一些实施方案中，该多特异性抗体在体外以小于约100pm的ic50诱导肿瘤细胞的nk细胞依赖性细胞毒性。在一些实施方案中，该多特异性抗体在体外以小于约50pm的ic50诱导肿瘤细胞的nk细胞依赖性细胞毒性。在一些实施方案中，该多特异性抗体在体外以小于约20pm的ic50诱导肿瘤细胞的nk细胞依赖性细胞毒性。在一些实施方案中，该多特异性抗体在体外以小于约15pm的ic50诱导肿瘤细胞的nk细胞依赖性细胞毒性。在一些实施方案中，该多特异性抗体在体外以小于约10pm的ic50诱导肿瘤细胞的nk细胞依赖性细胞毒性。

122、在本文提供的方法的一些实施方案中，用nk效应细胞和表达该第二抗原的靶细胞的混合物评估该ic50。

123、在本文提供的方法的一些实施方案中，效应细胞与靶细胞的比率为约0.01:1至约10:1。在本文提供的方法的一些实施方案中，效应细胞与靶细胞的比率为约0.01:1至约5:1。在一些实施方案中，效应细胞与靶细胞的比率为约0.1:1至约2:1。在一些实施方案中，效应细胞与靶细胞的比率为约0.5:1。在一些实施方案中，效应细胞与靶细胞的比率为约1:1。

124、在另一方面，本文提供了一种分子，该分子包含用于接合或活化nk细胞的第一工具和用于结合肿瘤细胞的第二工具，其中该分子能够诱导针对该肿瘤细胞的nk细胞依赖性细胞毒性。

125、在本文提供的分子的一些实施方案中，该第一工具包含与在nk细胞上表达的第一抗原结合的第一结合结构域，并且该第二工具包含与在肿瘤细胞上表达的第二抗原结合的第二结合结构域。

126、在本文提供的分子的一些实施方案中，该第一抗原是nk细胞活化受体。

127、在本文提供的分子的一些实施方案中，第一抗原是nkg2d。

128、在本文提供的分子的一些实施方案中，第一抗原是nkp46。

129、在本文提供的分子的一些实施方案中，该第二抗原是肿瘤特异性抗原(tsa)或肿瘤相关抗原(taa)。

130、在本文提供的分子的一些实施方案中，该第二抗原是bcma。

131、在本文提供的分子的一些实施方案中，第二抗原是gprc5d。

132、在另一方面，本文提供了一种用于制备与多于一个靶分子结合的分子的方法，该方法包括：用于执行获得能够与nk细胞上的第一抗原结合的结合结构域的功能的步骤；用于执行获得能够与肿瘤细胞上的第二抗原结合的结合结构域的功能的步骤；以及用于执行提供能够与该第一抗原和该第二抗原结合的分子的功能的步骤。

133、在另一方面，本文提供了一种将nk细胞引导至靶细胞的方法，该方法包括使该nk细胞与本文提供的分子接触。

134、在另一方面，本文提供了一种使nk细胞活化的方法，该方法包括使该nk细胞与本文提供的分子接触。

135、在另一方面，本文提供了一种抑制靶细胞的生长或增殖的方法，该方法包括使该靶细胞与本文提供的分子接触。

136、在另一方面，本文提供了一种用于在受试者中消除表达第二抗原的靶细胞或治疗全部或部分地由表达该第二抗原的靶细胞引起的疾病或病症的方法，该方法包括施用有效量的本文提供的分子。

技术实现思路