用于治疗癌症的CD33xVδ2多特异性抗体的制作方法

本发明涉及多特异性抗体和包含所述抗体的药物组合物、制备所述抗体的方法和所述抗体靶向cd33的用途以及它们在治疗疾病例如癌症中的用途。

背景技术：

1、由于急性髓系白血病(aml)母细胞的异质性和缺乏aml特异性抗原，aml的靶向免疫疗法仍然是一项重大的临床挑战。几种针对cd33的免疫疗法目前正在进行aml的1期或2期临床试验，例如cd33xcd3 t细胞重定向分子和多种自体或同种异体cart或nk细胞疗法。

2、vγ9vδ2t细胞代表了有意义的t细胞亚群，可用于探索肿瘤细胞免疫疗法。它们占循环t细胞群的1％-5％，并且在广泛的癌症集中普遍存在，它们的浸润与突变负荷无关。这些t细胞感知靶细胞上的嗜乳脂蛋白(btn)配体家族中磷酸抗原介导的构象变化，并有效地杀伤这些细胞。vγ9vδ2t细胞受pdl1对肿瘤细胞抑制的影响较小，并且vγ9vδ2t细胞群不含treg。这是有关系的，因为treg被cd3双特异性t细胞接合剂激活已证明会限制后者的活性。此外，磷酸抗原激活的嗜乳脂蛋白(btn3a，cd227)的差异表达可能有助于γδt细胞对癌细胞的抗肿瘤活性高于正常细胞。

技术实现思路

1、本发明的目的是提供能够进行cd33依赖性γδt细胞重定向的多特异性或双特异性抗体。

2、本发明的目的是提供由与高亲和力或低亲和力vδ2结合剂配对的不同cd33结合剂构成的多特异性或双特异性抗体。

3、本发明的目的是提供与vγ9vδ2t细胞联合对cd33+癌细胞和原发性aml母细胞具有细胞毒性的多特异性或双特异性抗体。

4、本发明的目的是提供在不同细胞系中诱导有效和选择性t细胞介导的细胞毒性的多特异性或双特异性抗体。

5、本发明的目的是提供与现有疗法相比在安全性和功效方面具有优势的多特异性或双特异性抗体。

6、本发明的目的是提供诱导vγ9vδ2t细胞的靶依赖性脱粒、激活和增殖的多特异性或双特异性抗体。

7、本发明的目的是提供显示相比于健康cd14+细胞(单核细胞)优先杀伤thp-1癌细胞的多特异性或双特异性抗体。

技术特征：

1.一种分离的多特异性抗体，所述分离的多特异性抗体包含能够结合人cd33的第一抗原结合区和能够结合人vγ9vδ2t细胞受体的第二抗原结合区；

2.根据权利要求1所述的分离的多特异性抗体，其中所述第二抗原结合区是单结构域抗体并且包含以下的cdr1、cdr2和cdr3：

3.根据权利要求2所述的分离的多特异性抗体，其中所述第一抗原结合区包含分别为seq id no:1、2、3、4、5和6的hcdr1、hcdr2、hcdr3、lcdr1、lcdr2和lcdr3。

4.根据权利要求2所述的分离的多特异性抗体，其中所述第一抗原结合区包含分别为seq id no:1、2、3、4、5和6的hcdr1、hcdr2、hcdr3、lcdr1、lcdr2和lcdr3，并且所述第二抗原结合区为单结构域抗体并且包含分别为seq id no:28、29和30的cdr1、cdr2和cdr3。

5.根据权利要求2所述的分离的多特异性抗体，其中所述第一抗原结合区包含分别为seq id no:1、2、3、4、5和6的hcdr1、hcdr2、hcdr3、lcdr1、lcdr2和lcdr3，并且所述第二抗原结合区为单结构域抗体并且包含分别为seq id no:25、26和27的cdr1、cdr2和cd3。

6.根据权利要求1所述的分离的多特异性抗体，其中所述第二抗原结合区是单结构域抗体并且包含分别为seq id no:28、29和30的cdr1、cdr2和cd3。

7.根据前述权利要求中任一项所述的分离的多特异性抗体，所述分离的多特异性抗体包含能够结合人cd33的第一抗原结合区和能够结合人vγ9vδ2t细胞受体的第二抗原结合区；

8.根据权利要求1所述的分离的多特异性抗体，其中

9.根据权利要求8所述的分离的多特异性抗体，其中所述分离的多特异性抗体包含scfv和vhh，所述scfv包含能够结合人cd33的第一抗原结合区，所述vhh包含能够结合人vγ9vδ2t细胞受体的第二抗原结合区，并且其中所述scfv包含肽接头，所述肽接头任选地选自seq id no:67至99所示的接头的组。

10.根据前述权利要求中任一项所述的分离的多特异性抗体，其中所述第一抗原结合区和所述第二抗原结合区经由肽接头直接或间接共价连接；任选地，其中所述肽接头是seqid no:100中所示的接头。

11.根据权利要求10所述的分离的多特异性抗体，其中所述第一抗原结合区位于所述第二抗原结合区的n末端。

12.根据前述权利要求中任一项的分离的多特异性抗体，所述分离的多特异性抗体还包含由第一fc多肽和第二fc多肽组成的fc区。

13.根据权利要求1至8中任一项所述的分离的多特异性抗体，其中所述分离的多特异性抗体包含fab、vhh，所述fab包含能够结合人cd33的第一抗原结合区，所述vhh包含能够结合人vγ9vδ2t细胞受体的第二抗原结合区，并且其中所述分离的多特异性抗体包含fc区。

14.根据前述权利要求中任一项所述的分离的多特异性抗体，所述分离的多特异性抗体包含选自由igg1、igg2、igg3或igg4同种型组成的组的ig恒定区或其片段。

15.根据权利要求12至14中任一项所述的分离的多特异性抗体，其中所述fc区是惰性的。

16.根据权利要求15所述的分离的多特异性抗体，其中在所述第一fc多肽和所述第二fc多肽中的一者或两者中的所述fc区包含在对应于234的位置处的ala，在对应于235的位置处的ala，以及在对应于265的位置处的ser，其中编号是根据eu。

17.根据权利要求12至16中任一项所述的分离的多特异性抗体，其中所述第一fc多肽包含在对应于366的位置处的trp并且所述第二fc多肽包含在对应于366的位置处的ser、在对应于368的位置处的ala和在对应于407的位置处的val，或反之亦然，其中编号是根据eu。

18.根据权利要求12至17中任一项所述的分离的多特异性抗体，其中在所述第一fc多肽和所述第二fc多肽中的一者或两者中的所述fc区包含在对应于252的位置处的tyr、在对应于254的位置处的thr和在对应于256的位置处的glu，其中编号是根据eu。

19.根据权利要求12至18中任一项所述的分离的多特异性抗体，其中在所述第一fc多肽和所述第二fc多肽中的一者或两者中的所述fc区包含在对应于435的位置处的arg和在对应于436的位置处的phe，其中编号是根据eu。

20.根据前述权利要求中任一项所述的分离的多特异性抗体，其中所述多特异性抗体是双特异性抗体。

21.根据前述权利要求中任一项所述的分离的多特异性抗体，所述分离的多特异性抗体包含：

22.一种药物组合物，所述药物组合物包含根据权利要求1至21中任一项所述的分离的多特异性抗体以及药学上可接受的载剂。

23.根据权利要求1至21中任一项所述的分离的多特异性抗体，所述分离的多特异性抗体用作药物。

24.根据权利要求1至21中任一项所述的分离的多特异性抗体，所述分离的多特异性抗体用于治疗血液癌症；任选地，其中所述血液癌症选自由以下组成的组：白血病、淋巴瘤、多发性骨髓瘤、急性髓系白血病(aml)、骨髓增生异常综合征(mds)、急性淋巴细胞白血病(all)、弥漫大b细胞淋巴瘤(dlbcl)、慢性髓系白血病(cml)、母细胞浆细胞样树突状细胞肿瘤(dpdcn)、骨髓增殖性肿瘤(mpn)、和混合表型急性白血病。

25.一种核酸构建体或核酸构建体的组合，所述核酸构建体或核酸构建体的组合编码根据权利要求1至21中任一项所述的多特异性抗体。

26.一种表达载体，所述表达载体包含根据权利要求25所述的核酸构建体或核酸构建体的组合。

27.一种分离的宿主细胞，所述分离的宿主细胞包含根据权利要求25所述的核酸构建体或核酸构建体的组合或者根据权利要求26所述的表达载体。

28.一种治疗疾病的方法，所述方法包括向有需要的人类受试者施用根据权利要求1至21中任一项所述的多特异性抗体。

29.根据权利要求28所述的方法，其中所述疾病是血液癌症；任选地，其中所述血液癌症选自由以下组成的组：白血病、淋巴瘤、多发性骨髓瘤、急性髓系白血病(aml)、骨髓增生异常综合征(mds)、急性淋巴细胞白血病(all)、弥漫大b细胞淋巴瘤(dlbcl)、慢性髓系白血病(cml)、母细胞浆细胞样树突状细胞肿瘤(dpdcn)、骨髓增殖性肿瘤(mpn)、和混合表型急性白血病。

技术总结
本发明涉及多特异性抗体和包含所述抗体的药物组合物、制备所述抗体的方法和所述抗体靶向CD33的用途以及它们在治疗疾病例如癌症中的用途。

技术研发人员：P·J·杜南,S·L·拉波特,S·辛格,P·W·H·I·帕伦,S·J·L·梅拉特,R·C·鲁弗斯,S·M·A·埃拉什卡,U·费里帕尔
受保护的技术使用者：詹森生物科技公司
技术研发日：
技术公布日：2024/5/10