用于影响细胞增殖和迁徙的组合物的制作方法

本技术涉及生物领域，具体的涉及一种用于影响细胞增殖和迁徙的组合物。

背景技术：

1、大肠癌是常见的恶性肿瘤，包括结肠癌和直肠癌。大肠癌的发病率从高到低依次为直肠、乙状结肠、盲肠、升结肠、降结肠以及横结肠，近年有向近端(右半结肠)发展的趋势。其发病与生活方式、遗传、大肠腺瘤等关系密切。结直肠癌(crc)是世界范围内常见的恶性肿瘤，近年来，尤其在亚洲，随着人们饮食结构及生态环境的改变，crc的发病率及死亡率呈上升趋势。

2、msi1是通过调节转录后的翻译过程来维持干细胞特性和肿瘤形成。msi1相关基因主要参与细胞增殖(39％)、细胞分化(36％)、细胞周期(36％)和细胞凋亡(33％)，是各种肿瘤的重要生长调节剂，msi1基因全长2950bp，含15个外显子，基因定位于人染色体12q24.1-q24.31，蛋白相对分子质量为39×103。在真核生物中，人msi1n端含有2个保守的rna识别结构域(rrm)，在转录后的基因表达调控中起着重要的作用，可参与rna剪接、多聚腺苷化作用、序列编辑、rna转运、维持rna的稳定和降解、细胞内定位和翻译控制等。相关研究证明，msi1通过2个特异性rna识别模序识别结合(g/a)unagu位点，阻止如cdkn2a、numb等mrna的翻译。msi1通过结合定位3’utr片段影响它们的翻译过程。msi1含有＞800名rna结合蛋白家族成员，与多种基因表达调控密切相关，而当异常表达时可导致疾病，如癌症。

3、msi1和β1整联蛋白可能参与大肠肿瘤发生、发展过程。在结肠癌的研究中发现，msi1的表达是通过涉及notch3机制反过来诱导刺激dll4，通过抑制numb维持notch1信号从而增加了msi1的水平。这些观察突出notch活性的调节是癌细胞的一种新颖的前馈回路。通过免疫印迹、免疫组化及rna等测定msi1蛋白的表达，证实msi1是结肠癌症患者的一种新型的预后标志物，在结肠癌转移过程中异常表达，表明它是一个潜在的治疗目标。msi1表达增高与结肠癌的tnm分期直接相关，cd133与msi1双阳性表达在大肠癌的浸润与转移中起重要协同作用，并且对奥沙利铂联合5-氟尿嘧啶方案化疗高度耐药，提示msi1能诱导肿瘤转移和导致肿瘤细胞耐药，最终影响患者预后。此外，msi1表达增高亦与ki-67表达阳性及结肠癌的预后不良相关。msi1的sirna质粒表达载体可以有效阻断hct116结肠癌细胞msi1的mrna表达，从而抑制细胞增殖，促进细胞凋亡。msi1在人结肠癌sw-480细胞中有表达，沉默msi1对癌细胞增殖有负性调节作用，可明显抑制其生长和增殖；后期实验结果证实，msi1sirna能有效抑制人结肠癌sw-480细胞中msi1蛋白的表达；并且使其迁移和侵袭能力明显下降，和对照组相比差异有统计学意义。进一步证实，结肠癌msi1的表达较正常癌旁组织高，差异有统计学意义。结肠癌中msi1的表达与肿瘤浸润深度、duke’s分期、淋巴转移、tnm分期和血管密度密切相关。msi1蛋白可通过促进瘤内血管增生，从而促进结肠癌的生长和侵袭转移，并进一步影响患者的预后。

4、目前肿瘤治疗中使用最广泛的仍是化疗以及放射性疗法，其毒副作用较大，患者在治疗过程中还可能造成肿瘤细胞的残留或对使用的药物产生抵抗，以至不能达到治疗的目的。随着基因工程技术和dna重组技术的兴起，利用单克隆抗体治疗肿瘤已经日渐取代副作用较大的传统疗法而成为新的发展趋向。所以，研制更多的单克隆抗体以及怎样更好的利用单克隆抗体治疗大肠癌或者结肠癌是重要的研究方向。目前在临床上应用的针对结直肠癌的单克隆抗体主要有抗vegf单克隆抗体贝伐单抗和抗egfr单克隆抗体西妥昔单抗以及帕尼单抗。贝伐单抗和西妥昔单抗作为对结直肠癌有明显抗肿瘤活性的单克隆抗体，首先在联合化疗的研究中获得了突破，发挥了出色的抗肿瘤活性，显著增强放、化疗的疗效。目前大量的临床研究已证实这两种单抗在转移性结直肠癌(mcrc)中疗效确切，西妥昔单抗已经在我国上市，贝伐单抗正在中国进行注册临床试验，帕尼单抗尚未申请在中国进行注册。目前的肠癌分子靶向治疗中，单克隆抗体占据了主要地位。但是提供的可选择治疗单抗种类还不够多，特别是针对新靶点的开发，还有待进一步的加强。

技术实现思路

1、本发明克服现有技术的缺陷，提供了一种针对结肠癌治疗的解决方案。

2、具体的，本发明提供了一种特异性针对msi1蛋白的单克隆抗体。

3、具体的，所述单克隆抗体的重链可变区和轻链可变区氨基酸序列分别为seq idno.1和seq id no.2所示。

4、在一些实施方式中，所述单克隆抗体与seq id no：1或seq id no：2氨基酸序列具有至少85％，或90％，或91％，或92％，或93％，或94％，或95％，或96％，或97％，或98％，或99％的序列同一性且与mis1具kd≤1×10-8mol/l，kd值也可以选择1×10-9mol/l、2×10-9mol/l、3×10-9mol/l、4×10-9mol/l、4.5×10-9mol/l、5×10-9mol/l、6×10-9mol/l、7×10-9mol/l、8×10-9mol/l、9×10-9mol/l、1×10-10mol/l、3×10-10mol/l、5×10-10mol/l、7×10-10mol/l、9×10-10mol/l或1×10-8mol/l。

5、在一些实施方案中，本文所述的抗体部分可以进一步被修饰以包含现有技术中已知且容易获得的其他非蛋白质部分。适用于抗体衍生化的部分包括但不限于水溶性聚合物。水溶性聚合物的非限制性实例，包括但不限于：聚乙二醇(peg)、乙二醇/丙二醇共聚物、羧甲基纤维素、右旋糖酐、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮、聚1,3-二氧戊环、聚-1,3,6-三恶烷、乙烯/马来酸酐共聚物、聚氨基酸(均聚物或无规共聚物)和右旋糖酐或聚(正乙烯基吡咯烷酮)聚乙二醇、聚丙二醇均聚物、聚环氧丙烷/环氧乙烷共聚物、聚氧乙烯化多元醇(例如甘油)、聚乙烯醇及其混合物。聚乙二醇丙醛由于在水中的稳定性而在制造中可能具有优势。聚合物可以是任何分子量的，也可以是支链或非支链的。与抗体连接的聚合物数量可有所不同，如果连接有多于一种聚合物，则它们可以是相同或不同的分子。一般而言，可以根据考虑因素(包括但不限于：待改善的抗体的具体特性或功能，在确定的条件下该抗体衍生物是否将用于诊断，等)来确定用于衍生化的聚合物的数量和/或类型。

6、进一步的，本发明还提供了所述的msi1单克隆抗体在制备用于治疗个体癌症的药物组合物中的用途。

7、在一些实施方案中，所述个体是哺乳动物(例如人、非人灵长类、大鼠、小鼠、牛、马、猪、绵羊、山羊、狗、猫等)。在一些实施方案中，所述个体是人。在一些实施方案中，所述个体是临床患者、临床试验志愿者、实验动物等。在一些实施方案中，所述个体年龄小于约60岁(例如包括小于约50岁、40岁、30岁、25岁、20岁、15岁或10岁中的任一个)。在一些实施方案中，所述个体年龄大于约60岁(包括例如，大于约70岁、80岁、90岁或100岁任一个)。在一些实施方案中，所述个体被诊断为或在遗传上易患本文所述的一种或多种疾病或病况(如黑素瘤、肾细胞癌、结直肠癌、尿路上皮癌、霍奇金淋巴瘤、小细胞肺癌、非小细胞肺癌、头颈肿瘤、胃癌、b细胞淋巴瘤、默克尔细胞癌、肝癌或宫颈癌)。在一些实施方案中，所述个体具有与本文所述一种或多种疾病或病症相关的一个或多个风险因素。

8、具体的，所述的癌症是结肠癌。

9、进一步的，本发明提供的药物组合物还含有第二药剂或疗法。

10、在一些实施方案中，所述第二药剂或疗法选自：本妥昔单抗(brentuximab)、bms-986016、urelumab单抗、mogamulizumab单抗、varlilumab单抗、ds-8273a、泊马度胺(pomalidomide)、埃罗妥珠单抗(elotuzumab)、艾卡哚司他(epacadostat)、bms-986205、吲哚莫德(indoximod)、abt-399、莫托莫德(motolimod)、西妥昔单抗(cetuximab)、bms-986012、格列巴单抗-维多汀(glembatumumabvedotin)、bms-986148、alt-803、卡比拉珠单抗(cabiralizumab)、abbv-085、贝伐单抗、培美曲塞(pemetrexed)、厄洛替尼(erlotinib)、克唑替尼(crizotinib)、bms-986156、利瑞鲁单抗(lirilumab)、埃罗妥珠单抗(elotuzumab)、干扰素-γ、bms-986179、bms-986178、abbv-368、雷莫芦单抗(ramucirumab)、白介素2、达雷木单抗(daratumumab)、奥戈伏单抗(oregovomab)、nktr-214、abbv-927、jtx-2011、安德西昔单抗(andecaliximab)、bms-986207、迪妥昔单抗(dinutuximab)-β、尼妥珠单抗(nimotuzumab)、abbv-428、x4p-001、曲妥珠单抗-dm1、伊匹单抗(ipilimumab)、干扰素α-2b、mk-4166、吲哚莫德、利妥昔单抗、耐昔妥珠单抗(necitumumab)、埃诺珠单抗(enoblituzumab)、gsk3174998、乌妥昔单抗(ublituximab)、tgr-1202、mk-1248、pv-10、米妥昔单抗-索拉维坦(mirvetuximabsoravtansine)、afm13、马戈昔单抗(margetuximab)、imp321、apx005m、amg820、sephb4-has、mk-4280、登赛珠单抗(demcizumab)、gsk3359609、重组ephb4-hsa融合蛋白、resimmune、放射疗法、am0010、白介素12、干扰素γ-1b、mk-7684、imm-101、恩替诺特(entinostat)、考比替尼(cobimetinib)、凡鲁珠单抗(vanucizumab)、peg-干扰素α-2b、奥滨尤妥珠单抗(obinutuzumab)、乙酰水杨酸、moxr0916、ro6874281、他泽司他(tazemetostat)、依鲁替尼(ibrutinib)、泊洛妥珠单抗-维多汀(polatuzumabvedotin)、来那度胺(lenalidomide)、苯达莫司汀(bendamustine)、chop、rg7888、凡鲁珠单抗、ro7009789、依米妥珠单抗(emactuzumab)、色妥珠单抗-阿木留金(cergutuzumabamunaleukin)、ro6958688、达雷木单抗、达雷木单抗、cdx-1401、帕妥珠单抗、曲妥珠单抗-恩坦辛(trastuzumabemtansine)、阿霉素、环磷酰胺、多西他赛、rg6058、alx148、达雷木单抗、埃非佐莫德(efizonerimod)、莫加利珠单抗、奥来克单抗(oleclumab)、莫那利珠单抗(monalizumab)、medi0562、imc-cs4、medi5083、乌托鲁单抗(utomilumab)、pf-04518600、pd0360324、阿扎胞苷(azacitidine)、苯达莫司汀、m9241、维莫非尼、pdr001、ly3321367、德瓦鲁单抗(durvalumab)、洛扎利珠单抗(plozalizumab)、维多珠单抗(vedolizumab)、tak-580、洛瓦妥珠单抗-特昔林(rovalpituzumabtesirine)、本妥昔单抗-维多汀(brentuximabvedotin)、博纳吐单抗(blinatumomab)、mbg453、gwn323、地西他滨、康纳单抗(canakinumab)、cjm112、曲美替尼、egf816、nis793、regn1979、regn3767、阿卡替尼(acalabrutinib)、乐伐替尼(lenvatinib)、伏立诺他(vorinostat)、迪纳昔克利(dinaciclib)、达拉非尼(dabrafenib)、阿西替尼(axitinib)、依鲁替尼、阿贝马昔克利(abemaciclib)、艾瑞布林(eribulin)、bl-8040、地塞米松、cmp-001、阿法替尼、安卡舍替(amcasertib)、arry-382、阿扎胞苷、罗米地辛(romidepsin)、b-701、bgb324、比美替尼(binimetinib)、比瑞纳畔(birinapant)、卡非佐米(carfilzomib)、gm-csf、德伐替尼(defactinib)、恩科拉非尼(encorafenib)、依诺波沙(enobosarm)、依西美坦(exemestane)、亮丙瑞林(leuprolide)、g100、gr-md-02、伊马替尼(imatinib)、imo-2125、incb054828、伊他替尼(itacitinib)、incb050465、来曲唑、帕博西尼(palbociclib)、mk-1454、纳帕布卡辛(napabucasin)、尼达尼布(nintedanib)、尼拉帕尼(niraparib)、奥拉帕尼(olaparib)、恩杂鲁胺(enzalutamide)、泼尼松、帕唑帕尼(pazopanib)、pegph20、plx3397、普瑞莱登(preladenant)、鲁索替尼(ruxolitinib)、沙格司亭(sargramostim)、sch900353、sd-101、维莫德吉(vismodegib)、x4p-001、xl888、ziv-阿柏西普(ziv-aflibercept)、依鲁替尼、达沙替尼、普那布林(plinabulin)、维尼帕尼(veliparib)、pt2385、egf816、inc280、色瑞替尼(ceritinib)、加仑赛替(galunisertib)、替西罗莫司(temsirolimus)、伊立替康、卡培他滨、安卡舍替、ipi-549、西达本胺(chidamide)、cb-839、tak-659、司曲替尼(sitravatinib)、格列替尼(glesatinib)、司曲替尼、莫西汀(mocetinostat)、阿瓦度胺(avadomide)、rrx-001、奥马索龙(omaveloxolone)、丙戊酸盐(valproate)、cb-1158、阿扎胞苷、米哚妥林、阿糖胞苷、依鲁替尼、莫西汀、奥西替尼(osimertinib)甲磺酸酯、吉非替尼、azd6738、西地尼布、medi9197、azd5069、白蛋白结合型紫杉醇、azd4547、azd1775、维斯赛替(vistusertib)、加仑赛替、ly2510924、azd4635、泊西达替尼(pexidartinib)、司美替尼(selumetinib)、曲贝替定(trabectedin)、恩沙替尼(ensartinib)、阿莱替尼(alectinib)、罗西莱替尼(rociletinib)、cpi-444、依托泊苷、卡铂、崔莱克利(trilaciclib)、卢卡帕尼(rucaparib)、维尼帕尼、劳拉替尼(lorlatinib)、舒尼替尼(sunitinib)、beigene-290、bgb-3111、萨沃替尼(savolitinib)、阿帕替尼(apatinib)、美瑞替尼(merestinib)、西他司他(citarinostat)、恩罗非尼(emurafenib)、卡博替尼(cabozantinib)、帕唑帕尼、wnt974、fgf401、pbf509、lxh254、瑞戈非尼(regorafenib)、索拉非尼(sorafenib)、lcl101、依维莫司、帕比司他(panobinostat)、卡普替尼(capmatinib)、blz945、ad-cea疫苗、axalimogenefilolisbac、vigil、tpiv200、pvx-410、hiltonol、dc/aml融合细胞疫苗、ltx-315、lv305、膀胱内bcg治疗、adxs-psa、p53mva、ptvg-hp质粒dna疫苗、6mhp、gvax胰腺、gvax、dnx-2401、dpx-survivac疫苗、树突状细胞疗法、冷冻手术、prevnar13、mdc3/8、ny-eso-1、gp100:280-288、crs-207、isa101、viagenpumatucel-l、树突状细胞疫苗、wt1疫苗、tg4010、cv-301、pd-l1/ido肽疫苗、dcvax-l、neo-pv-01、cimavax-egf疫苗、减毒麻疹病毒、prostvac、cmb305、sipuleucel-t、oncos-102、柯萨奇病毒a21、柯萨奇病毒a22、pelareorep、ad-magea3/mg1-magea3、talimogenelaherparepvec、表达hsv-tk的腺病毒、pexa-vec、enadenotucirev、mcpyvtag特异性自体cd8+t细胞、imcgp100、til治疗、ic9-gd2t细胞、e7tcrt细胞、pil-12、isf35、ny-eso-1tcrpbmc、hpv特异性t细胞、nk免疫疗法、axicabtageneciloleucel、azd9150、聚iclc和imprimepgg。

11、有益效果

12、本发明针对msi1蛋白制备了特异性的单克隆抗体，该单克隆抗体具有较好的特异性以及和靶蛋白的亲和特性。将该单克隆抗体与癌细胞作用后，能够较好的抑制癌细胞的增殖以及癌细胞的迁徙能力，并且具有剂量依赖性。