一种可注射的高浓度胶原蛋白的制备方法与流程

本发明涉及生物医药，尤其涉及一种可注射的高浓度胶原蛋白的制备方法。

背景技术：

1、胶原蛋白具有生物相容性、生物可降解性、无毒性及低过敏反应等特性，用途非常广泛，涉及生物医学材料、医疗药品、化妆品、食品及化工原料等。高浓度的胶原蛋白能够按需制备成多种浓度，可适用不同的需求，可注射的高浓度胶原蛋白是一类经济价值很高的产品。

2、现有技术中，用于医疗材料的胶原蛋白一般需要过滤除菌，高浓度胶原蛋白不能直接过滤除菌，胶原蛋白作为高分子蛋白质只能配制成低至5‰以下的浓度才能通过0.22微米滤孔的滤膜，且过滤效率非常低。低浓度的胶原蛋白溶液一般通过蒸发浓缩或挥发性溶剂浓缩的方式来提高浓度，蒸发浓缩可能导致胶原蛋白热变性，制备步骤复杂，且耗时。挥发性溶剂浓缩则要考虑如何去除溶剂残留。因此，急需开发一种快速、简便且产量高的制备可注射的高浓度胶原蛋白的方法以解决上述技术问题。

3、有鉴于此，特提出本发明。

技术实现思路

1、本发明的目的是提供一种可注射的高浓度胶原蛋白的制备方法，采用预处理-酶解-盐析-透析的方法制备出高纯度的胶原蛋白，通过冷冻干燥得到干态的胶原蛋白，此干态胶原蛋白可辐照灭菌，高压均质后得到一种适用于27g甚至更小规格针头的注射性高浓度胶原蛋白。

2、为了实现上述目的，本发明提供的一种可注射的高浓度胶原蛋白的制备方法，包括如下步骤：

3、s1：预处理，将动物组织用氢氧化钠浸泡，纯化水清洗数遍，进行粉碎；

4、s2：酶解，离心得到胶原蛋白粗提液；

5、s3：盐析，获得胶原蛋白沉淀；

6、s4：透析，除去小分子杂质；

7、s5：冷冻干燥后，采用钴60辐照灭菌；

8、s6：粉碎，分散于磷酸盐生理盐水，并加入添加剂；

9、s7：高压均质，得到可注射的高浓度胶原蛋白。

10、优选地，所述s1中，氢氧化钠的浓度为1m，浸泡时间为30-120min。

11、优选地，所述s2的具体步骤为：采用磷酸、醋酸或盐酸酸性溶液将注射用水调节ph在2.0-2.5之间，加入动物组织重量1/50-1/100的胃蛋白酶，搅拌72h。

12、优选地，所述s3的具体步骤为：加入氯化钠，使其浓度达到0.5-0.9m，搅拌，待胶原蛋白析出，离心，弃去溶液。

13、优选地，所述s4的具体步骤为：将s3得到的胶原蛋白沉淀装入透析袋进行透析7-10天，除去残留的氯化钠小分子杂质。

14、优选地，所述s5的具体步骤为：冷冻干燥后，采用钴60以12kgy的辐照剂量进行灭菌。

15、优选地，所述s6的具体步骤为：将灭菌后的胶原蛋白进行粉碎，将胶原蛋白以干品计按照1：15.6-32.3的质量比例加入到磷酸盐生理盐水中，制备出浓度为3-6％的高浓度胶原蛋白混合物，所述磷酸盐生理盐水中含有添加剂，所述添加剂包括0.3％利多卡因，0.1-0.2％甘油，0.1-0.2％透明质酸钠，0.1-0.4％羧甲基纤维素钠，0.1-0.2％明胶，0.4-0.5％磷脂，0.1-0.3％海藻酸钠，所述添加剂的质量百分比为占最终胶原蛋白混合物的质量百分比。

16、优选地，所述s7的具体步骤为：采用乳化机和高压均质机对混合物进行均质乳化处理。

17、本发明提供的一种可注射的高浓度胶原蛋白的制备方法，具有如下有益效果。

18、1.本发明采用对干态胶原蛋白进行辐照灭菌替代低浓度胶原蛋白的过滤除菌，操作简便，效率高。

19、2.本发明采用将干态胶原蛋白溶解均质制备高浓度胶原蛋白替代低溶度胶原蛋白浓缩制备高浓度胶原蛋白，操作简便，效率高。

技术特征：

1.一种可注射的高浓度胶原蛋白的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

2.根据权利要求1所述的一种可注射的高浓度胶原蛋白的制备方法，其特征在于，所述s1中，氢氧化钠的浓度为1m，浸泡时间为30-120min。

3.根据权利要求1所述的一种可注射的高浓度胶原蛋白的制备方法，其特征在于，所述s2的具体步骤为：采用磷酸、醋酸或盐酸酸性溶液将注射用水调节ph在2.0-2.5之间，加入动物组织重量1/50-1/100的胃蛋白酶，搅拌72h。

4.根据权利要求1所述的一种可注射的高浓度胶原蛋白的制备方法，其特征在于，所述s3的具体步骤为：加入氯化钠，使其浓度达到0.5-0.9m，搅拌，待胶原蛋白析出，离心，弃去溶液。

5.根据权利要求1所述的一种可注射的高浓度胶原蛋白的制备方法，其特征在于，所述s4的具体步骤为：将s3得到的胶原蛋白沉淀装入透析袋进行透析7-10天，除去残留的氯化钠小分子杂质。

6.根据权利要求1所述的一种可注射的高浓度胶原蛋白的制备方法，其特征在于，所述s5的具体步骤为：冷冻干燥后，采用钴60以12-25kgy的辐照剂量进行灭菌。

7.根据权利要求1所述的一种可注射的高浓度胶原蛋白的制备方法，其特征在于，所述s6的具体步骤为：将灭菌后的胶原蛋白进行粉碎，将胶原蛋白以干品计按照1：15.6-32.3的质量比例加入到磷酸盐生理盐水中，制备出浓度为3-6％的高浓度胶原蛋白混合物，所述磷酸盐生理盐水中含有添加剂，所述添加剂包括0.3％利多卡因，0.1-0.2％甘油，0.1-0.2％透明质酸钠，0.1-0.4％羧甲基纤维素钠，0.1-0.2％明胶，0.4-0.5％磷脂，0.1-0.3％海藻酸钠，所述添加剂的质量百分比为占最终胶原蛋白混合物的质量百分比。

8.根据权利要求1所述的一种可注射的高浓度胶原蛋白的制备方法，其特征在于，所述s7的具体步骤为：采用乳化机和高压均质机对混合物进行均质乳化处理。

技术总结
本发明公开了一种可注射的高浓度胶原蛋白的制备方法，包括如下步骤：S1：预处理，将动物组织用氢氧化钠浸泡，纯化水清洗数遍，进行粉碎；S2：酶解，离心得到胶原蛋白粗提液；S3：盐析，获得胶原蛋白沉淀；S4：透析，除去小分子杂质；S5：冷冻干燥后，采用钴60辐照灭菌；S6：粉碎，分散于磷酸盐生理盐水，并加入添加剂；S7：高压均质，得到可注射的高浓度胶原蛋白，本发明采用预处理‑酶解‑盐析‑透析的方法制备出高纯度的胶原蛋白，通过冷冻干燥得到干态的胶原蛋白，此干态胶原蛋白可辐照灭菌，高压均质后得到一种适用于27G甚至更小规格针头的注射性高浓度胶原蛋白。

技术研发人员：张艳,裴秀娟,孙晓焕,袁文静,张世超
受保护的技术使用者：天津世纪康泰生物医学工程有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/12