女性原发不孕的生物标志物、核酸产品和试剂盒的制作方法

本申请属于基因检测，具体涉及一种女性原发不孕的生物标志物、核酸产品和试剂盒。

背景技术：

1、原发不孕是指有性生活的女性，在没有过任何妊娠或流产情况下，并且未采取避孕措施的情况下1年没有怀孕，原发性不孕症率发病率3％。原发性不孕症在时间的标准上尚未统一，国际妇产科联合会根据多数学者的意见，将不孕症标准定为结婚后1～2年。

2、正常怀孕及生殖是维持及延续人类种群的重要环节。对于女性不孕，目前已经有zp-1、stag3、fshr等基因被发现与女性不孕症密切相关(huang hl etal,mutant zp1infamilial infertility.n engl j med.2014 370(13):1220-6；de roux net al，afamily with hypogonadotropic hypogonadism and mutations in thegonadotropin-releasing hormone receptor.n engl j med.1997 337(22):1597-602；caburet s etal,mutant cohesion in premature ovarian failure.n engl j med.2014370(10):943-9)。但是，均未在临床中应用。

3、导致女性不孕症的原因很多，有一些临床报道涉及以卵子不成熟为特征的女性不孕症的描述(rudak et al,fertility and sterility,1990 54:292-296；humanreproduction，1995 10:2343-2349；fertility and sterility 1999 71:567-570；humanreproduction 2001 16(10):2136-2138；human reproduction 2002 17(6):1604-1609；human reproduction 2002 17(10):2556-2559，但是这些基因诊断不够全面，仅能解释部分患者的原因，针对性不强。并且目前尚未存在针对受精后，早期胚胎发育阻滞而导致女性不孕的相关判断指标来判断女性原发不孕，传统的标志物存在诊断不够全面、效率低下等问题。

技术实现思路

1、基于此，本申请提供一种判断女性原发不孕的生物标志物，通过检测该生物标志物是否发生突变来判断女性原发不孕，可以改善传统生物标志物对女性原发不孕诊断不够全面，针对性不强的问题。

2、本申请一方面提供一种用于检测女性原发不孕的生物标志物，所述生物标志物为eif4e1b基因，通过检测eif4e1b基因是否发生突变来判断女性是否原发不孕。

3、在其中一个实施例中，所述eif4e1b基因突变片段包括chr5:177177181～177177679区域、chr5:177188446～177188806区域、chr5:177189171～177190118区域、chr5:177190100～177190342区域、chr5:177190874～177191082区域和chr5:177191579～177193322区域中的至少一个。

4、在其中一个实施例中，所述突变为eif4e1b基因发生错义突变。

5、本申请还提供上述的生物标志物在制备用于诊断女性原发不孕的试剂或试剂盒中的应用。

6、本申请提供一种核酸产品，包括用于检测eif4e1b基因是否发生突变的检测引物对。

7、在其中一个实施例中，所述核酸产品包括分别用于检测所述突变片段是否发生突变的引物对1～6中的至少一对。

8、在其中一个实施例中，所述引物对1的核苷酸序列如seq id no.1和seqid no.2所示；所述引物对2的核苷酸序列如seq id no.3和seq id no.4所示；所述引物对3的核苷酸序列如seq id no.5和seq id no.6所示；所述引物对4的核苷酸序列如seq id no.7和seqid no.8所示；所述引物对5的核苷酸序列如seq id no.9和seq id no.10所示；所述引物对6的核苷酸序列如seq id no.11和seq id no.12所示。

9、本申请还提供一种用于检测女性原发不孕的试剂盒，包括上述的核酸产品。

10、在其中一个实施例中，所述试剂盒还包括核酸提取试剂、缓冲液、dna聚合酶及dntps中的至少一种。

11、在其中一个实施例中，所述试剂盒中引物对1～6使用时的扩增条件为：95℃、90s；95℃、30s，60℃、30s，72℃、40s，35个循环；72℃，10min。

12、本申请提供了一种女性原发不孕的生物标志物、核酸产品和试剂盒，通过检测eif4e1b基因是否发生突变来判断女性是否原发不孕。本申请的试剂盒具有针对性强、灵敏度高的特点，并提供了一种区别于现有技术的生物标志物并将其运用于核酸产品及试剂盒中，有利于提高早诊率和遗传性原发不孕的诊断准确率。

技术特征：

1.一种用于检测女性原发不孕的生物标志物，其特征在于，所述生物标志物为eif4e1b基因，通过检测eif4e1b基因是否发生突变来判断女性是否原发不孕。

2.根据权利要求1所述的生物标志物，其特征在于，所述eif4e1b基因的突变片段包括chr5:177177181～177177679区域、chr5:177188446～177188806区域、chr5:177189171～177190118区域、chr5:177190100～177190342区域、chr5:177190874～177191082区域和chr5:177191579～177193322区域中的至少一个。

3.根据权利要求1或2所述的生物标志物，其特征在于，所述突变为eif4e1b基因发生错义突变。

4.权利要求1所述的生物标志物在制备用于诊断女性原发不孕的试剂或试剂盒中的应用。

5.一种核酸产品，其特征在于，包括用于检测eif4e1b基因是否发生突变的检测引物对。

6.根据权利要求5所述的核酸产品，其特征在于，所述核酸产品包括分别用于检测所述突变片段是否发生突变的引物对1～6中的至少一对。

7.根据权利要求6所述的核酸产品，其特征在于，所述引物对1的核苷酸序列如seq idno.1和seq id no.2所示；所述引物对2的核苷酸序列如seq idno.3和seq id no.4所示；所述引物对3的核苷酸序列如seq id no.5和seq id no.6所示；所述引物对4的核苷酸序列如seq id no.7和seq id no.8所示；所述引物对5的核苷酸序列如seq id no.9和seq idno.10所示；所述引物对6的核苷酸序列如seq id no.11和seq id no.12所示。

8.一种用于检测女性原发不孕的试剂盒，其特征在于，包括权利要求5～7任一项所述的核酸产品。

9.根据权利要求8所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括核酸提取试剂、缓冲液、dna聚合酶及dntps中的至少一种。

10.根据权利要求8～9任一项所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中引物对1～6使用时的扩增条件为：95℃、90s；95℃、30s；0℃、30s；2℃、40s；5个循环；72℃，10min。

技术总结
本申请提供了一种女性原发不孕的生物标志物、核酸产品和试剂盒，通过检测EIF4E1B基因是否发生突变来判断女性是否原发不孕。本申请的试剂盒具有针对性强、灵敏度高的特点，并提供了一种区别于现有技术的生物标志物并将其运用于核酸产品及试剂盒中，有利于提高早诊率和遗传性原发不孕的诊断准确率。

技术研发人员：郭静,卢光琇,林戈
受保护的技术使用者：中信湘雅生殖与遗传专科医院有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/11