一种蚯蚓血红蛋白冻干制剂的制备方法

本发明涉及生物制药，具体为一种蚯蚓血红蛋白冻干制剂的制备方法。

背景技术：

1、蚯蚓血红蛋白呈红色的具有输送氧能力的物质之一。存在于星虫的血球和血浆中，含铁不含铜，是蚯蚓血红蛋白辅基与珠蛋白结合成的化合物，蚯蚓血红蛋白辅基含多肽和铁，但不含卟啉环。吸收带和血蓝蛋白相似。虽然存铁，但没有过氧化酶的作用，不与co结合。分子量6600。三个铁原子带一分子氧，根据目前的研究得知，其单体结构与人血血红蛋白的单体结构非常相似，且具有更强的氧气的携带运输能力。因此，作为一种重要的、潜在的新型血液替代品受到科学界的关注。

2、目前的蚯蚓血红蛋白制备方法繁琐，且制得的冻干制剂杂质较多，不能实现通过简化制备方法，并且针对制备过程中的杂质进行全面清洗处理，来提高蚯蚓血红蛋白的纯度，无法达到既快速又很好的对蚯蚓血红蛋白进行提取并进行冻干制剂制备的目的，从而给人们的蚯蚓血红蛋白制备带来极大的不便。

技术实现思路

1、(一)解决的技术问题

2、针对现有技术的不足，本发明提供了一种蚯蚓血红蛋白冻干制剂的制备方法，解决了现有的蚯蚓血红蛋白制备方法繁琐，且制得的冻干制剂杂质较多，不能实现通过简化制备方法，并且针对制备过程中的杂质进行全面清洗处理，来提高蚯蚓血红蛋白的纯度，无法达到既快速又很好的对蚯蚓血红蛋白进行提取并进行冻干制剂制备目的的问题。

3、(二)技术方案

4、为实现以上目的，本发明通过以下技术方案予以实现：一种蚯蚓血红蛋白冻干制剂的制备方法，具有包括以下步骤：

5、s1、前处理：取人工饲养的蚯蚓作为原料，先放入15-25℃的是中吐沙清洗2-3次，洗净后的蚯蚓，用剪刀预先剪碎成0.5-1.4cm的小块，装入容器中；

6、s2、提取：向容器中加入预冷的蒸馏水，将容器放置在提取设备的指定部位，启动提取本设备进行提取，得到粗提蚯蚓液，然后将粗提蚯蚓液置于离心设备中离心处理20-25min；

7、s3、分离：取步骤s2离心后的上清液，按1：0.5-1.2的比例加入预先调配好的聚乙二醇和硫酸铵的混合溶液中，通过搅拌设备搅拌8-10min，得到有絮状沉淀的混合液，将混合液置于离心设备中离心处理15-20min，去除上清液，用蒸馏水清洗沉淀上的残留的液体；

8、s4、过滤：将沉淀与蒸馏水复溶，得到均一稳定的蚯蚓血红蛋白溶液，再将得到的蚯蚓血红蛋白溶液通过过滤设备过滤；

9、s5、制剂：将步骤s4透析脱盐处理后的蚯蚓血红蛋白溶液放入冷冻干燥设备中，在无菌密闭环境中，在-6--2℃下冻结5-6h，再通过降低环境气压，缓慢升高蚯蚓血红蛋白溶液的温度，6-8h后使蚯蚓血红蛋白溶液中的水分升华，留下固体形态的疏松块状或粉末状蚯蚓血红蛋白提取物，即得到纯净的蚯蚓血红蛋白冻干制剂。

10、优选的，所述步骤s2中蚯蚓与蒸馏水的质量比例为1：1-5。

11、优选的，所述步骤s3中聚乙二醇溶液和硫酸铵溶液预先配制的比例为1：0.2-0.4。

12、优选的，所述步骤s2中离心处理是以5000-9000rpm的转速，3-6℃的温度进行处理。

13、优选的，所述步骤s3中离心处理是以2000-3000rpm的转速，3-6℃的温度进行处理。

14、优选的，所述步骤s4中加入蒸馏水的体积为步骤s2离心后上清液的1-2倍。

15、优选的，所述步骤s4中过滤过程中通过采用生物质滤膜进行透析脱盐处理。

16、优选的，所述步骤s3中用蒸馏水清洗沉淀残留液体是采用冲洗的方式，冲洗3-5次。

17、(三)有益效果

18、本发明提供了一种蚯蚓血红蛋白冻干制剂的制备方法。与现有技术相比具备以下有益效果：该蚯蚓血红蛋白冻干制剂的制备方法，具有包括以下步骤：s1、前处理：取人工饲养的蚯蚓作为原料，先放入15-25℃的是中吐沙清洗2-3次，洗净后的蚯蚓，用剪刀预先剪碎成0.5-1.4cm的小块，装入容器中；s2、提取：向容器中加入预冷的蒸馏水，将容器放置在提取设备的指定部位，启动提取本设备进行提取，得到粗提蚯蚓液，然后将粗提蚯蚓液置于离心设备中离心处理20-25min；s3、分离：取步骤s2离心后的上清液，按1：0.5-1.2的比例加入预先调配好的聚乙二醇和硫酸铵的混合溶液中，通过搅拌设备搅拌8-10min，得到有絮状沉淀的混合液，将混合液置于离心设备中离心处理15-20min，去除上清液，用蒸馏水清洗沉淀上的残留的液体；s4、过滤：将沉淀与蒸馏水复溶，得到均一稳定的蚯蚓血红蛋白溶液，再将得到的蚯蚓血红蛋白溶液通过过滤设备过滤；s5、制剂：将步骤s4透析脱盐处理后的蚯蚓血红蛋白溶液放入冷冻干燥设备中，在无菌密闭环境中，在-6--2℃下冻结5-6h，再通过降低环境气压，缓慢升高蚯蚓血红蛋白溶液的温度，6-8h后使蚯蚓血红蛋白溶液中的水分升华，留下固体形态的疏松块状或粉末状蚯蚓血红蛋白提取物，即得到纯净的蚯蚓血红蛋白冻干制剂，可实现通过简化制备方法，并且针对制备过程中的杂质进行全面清洗处理，来提高蚯蚓血红蛋白的纯度，很好的达到了既快速又很好的对蚯蚓血红蛋白进行提取并进行冻干制剂制备的目的，大大简化了蚯蚓血红蛋白的制备方法，明显减少了制得的冻干制剂的杂质含量，从而大大方便了人们的蚯蚓血红蛋白制备。

技术特征：

1.一种蚯蚓血红蛋白冻干制剂的制备方法，其特征在于：具有包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的一种蚯蚓血红蛋白冻干制剂的制备方法，其特征在于：所述步骤s2中蚯蚓与蒸馏水的质量比例为1：1-5。

3.根据权利要求1所述的一种蚯蚓血红蛋白冻干制剂的制备方法，其特征在于：所述步骤s3中聚乙二醇溶液和硫酸铵溶液预先配制的比例为1：0.2-0.4。

4.根据权利要求1所述的一种蚯蚓血红蛋白冻干制剂的制备方法，其特征在于：所述步骤s2中离心处理是以5000-9000rpm的转速，3-6℃的温度进行处理。

5.根据权利要求1所述的一种蚯蚓血红蛋白冻干制剂的制备方法，其特征在于：所述步骤s3中离心处理是以2000-3000rpm的转速，3-6℃的温度进行处理。

6.根据权利要求1所述的一种蚯蚓血红蛋白冻干制剂的制备方法，其特征在于：所述步骤s4中加入蒸馏水的体积为步骤s2离心后上清液的1-2倍。

7.根据权利要求1所述的一种蚯蚓血红蛋白冻干制剂的制备方法，其特征在于：所述步骤s4中过滤过程中通过采用生物质滤膜进行透析脱盐处理。

8.根据权利要求1所述的一种蚯蚓血红蛋白冻干制剂的制备方法，其特征在于：所述步骤s3中用蒸馏水清洗沉淀残留液体是采用冲洗的方式，冲洗3-5次。

技术总结
本发明公开了一种蚯蚓血红蛋白冻干制剂的制备方法，具有包括以下步骤：S1、前处理：取人工饲养的蚯蚓作为原料，先放入15‑25℃的是中吐沙清洗2‑3次，洗净后的蚯蚓，用剪刀预先剪碎成0.5‑1.4cm的小块，装入容器中；S2、提取，S3、分离，S4、过滤，S5、制剂，本发明涉及生物制药技术领域。该蚯蚓血红蛋白冻干制剂的制备方法，可实现通过简化制备方法，并且针对制备过程中的杂质进行全面清洗处理，来提高蚯蚓血红蛋白的纯度，很好的达到了既快速又很好的对蚯蚓血红蛋白进行提取并进行冻干制剂制备的目的，大大简化了蚯蚓血红蛋白的制备方法，明显减少了制得的冻干制剂的杂质含量，从而大大方便了人们的蚯蚓血红蛋白制备。

技术研发人员：荣龙,余春红,任烽,陈露,金怡杉
受保护的技术使用者：北京航空航天大学
技术研发日：
技术公布日：2024/1/13