一种坦氏不动杆菌来源的DSF淬灭酶及其编码基因与应用

本发明属于生物技术及酶的应用，具体涉及一种坦氏不动杆菌来源的dsf淬灭酶及其编码基因与应用。

背景技术：

1、邻单胞菌(plesiomonas)是一种兼性厌氧、以极生鞭毛运动的革兰氏阴性短杆菌。邻单胞菌广泛分布于土壤和水体中，不仅能引起人类发生肠胃炎，也可引起人类败血症、脑膜炎等肠外感染，亦可感染犬、赤麻鸭等导致肠道疾病，是一种常见的人畜共患的重要食源性病原菌。鱼类更是类志贺邻单胞菌常见的宿主，该菌对多种水产动物有致病性，已见尼罗罗非鱼、杂交鲟、大鲵、青鱼、鳗鲡、斑点叉尾等多种水产动物感染类志贺邻单胞菌死亡的报道，患病鱼体主要临床症状表现为体表出血溃烂、鳞片脱落、鳍条溃烂、肠道出血并伴有少量腹水。研究表明邻单胞菌属的增加会引起肠道炎症，影响鱼类的健康。因此，研究开发一种无污染、无残留、不会使致病菌产生耐药性的方式来降低邻单胞菌属的丰度，是目前实现鱼类肠道菌群的无抗调控的重要途径。

2、近年来，通过信号分子类似物、信号分子降解酶剂、信号受体激活剂/抑制剂等策略干扰、阻断病原菌的群体感应通讯系统即群体淬灭(quorum quenching，qq)机制防控动植物病害的相关应用越来越多。dsf(diffusible signal factor)是近年来在黄单胞菌(xanthomonas)、苛养木杆菌(xyllela fastidiosa)、嗜麦芽寡养单胞菌(stenotrophomonas maltophilia)、伯克氏菌(burkholderia)、绿脓杆菌(pseudomonasaeruginosa)和许多海洋细菌中发现鉴定的一类新型群体感应信号分子，研究发现干扰病原菌的dsf信号分子，可以影响病原细胞的运动性、生物膜和胞外酶活性，并且显著降低病原菌的致病能力，因此，该酶具有开发制备体外降解dsf家族信号分子酶制剂的应用价值。目前开发的dsf淬灭酶主要都是针对植物病害防治，但对于水产动物中的病害防治仍鲜有报道。因此，急需研发一种快速并且有效降解群体感应信号分子dsf，从而显著减轻dsf介导的致病菌对水产动物的危害的方法。

技术实现思路

1、本发明所要解决的技术问题是如何快速并且有效降解群体感应信号分子dsf，从而显著减轻dsf介导的致病菌对水产动物的危害，实现鱼类肠道菌群的无抗调控。

2、为解决上述技术问题，本发明首先提供了一种蛋白质。

3、本发明提供的蛋白质，所述蛋白质可为a1)或a2)或a3)或a4)：

4、a1)氨基酸序列如seq id no.2所示的蛋白质；

5、a2)氨基酸序列是seq id no.4的第1-558位的蛋白质；

6、a3)将a1)或a2)的蛋白质经过氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加得到的与a1)或a2)所示的蛋白质具有80％以上的同一性且具有相同功能的蛋白质；

7、a4)在a1)或a2)的一端连接蛋白质标签得到的融合蛋白质。

8、所述蛋白质为faddd1。

9、上述蛋白质可人工合成，也可先合成其编码基因，再进行生物表达得到。

10、上述蛋白质中，所述标签是指利用dna体外重组技术，与目的蛋白一起融合表达的一种多肽或者蛋白，以便于目的蛋白的表达、检测、示踪和/或纯化。所述标签可为flag标签、his标签、mbp标签、ha标签、myc标签、gst标签和/或sumo标签等。

11、所述基因编码所述蛋白，所述基因选自下述任一种：

12、1)编码序列是seq id no.1所示的dna分子；

13、2)编码序列是seq id no.3的第1-1674位的dna分子；

14、3)与1)或2)限定的dna分子具有80％以上的同一性且编码所述蛋白质的dna分子。

15、所述蛋白质来源于坦氏不动杆菌(acinetobacter tandoii)。

16、与上述蛋白质相关的生物材料，所述生物材料可为下述b1)至b12)中的任一种：

17、b1)编码权利要求1所述蛋白质的核酸分子；

18、b2)含有b1)所述核酸分子的表达盒；

19、b3)含有b1)所述核酸分子的重组载体；

20、b4)含有b2)所述表达盒的重组载体；

21、b5)含有b1)所述核酸分子的重组微生物；

22、b6)含有b2)所述表达盒的重组微生物；

23、b7)含有b3)所述重组载体的重组微生物；

24、b8)含有b4)所述重组载体的重组微生物；

25、b9)含有b1)所述核酸分子的转基因动物细胞系；

26、b10)含有b2)所述表达盒的转基因动物细胞系；

27、b11)含有b3)所述重组载体的转基因动物细胞系；

28、b12)含有b4)所述重组载体的转基因动物细胞系。

29、本发明还提供了制备上述蛋白质的方法，所述方法包括使所述蛋白质的编码基因在生物中进行表达得到所述蛋白质的步骤。

30、上述方法中，所述使蛋白质的编码基因在生物中进行表达包括将所述蛋白质的编码基因导入受体微生物，得到表达所述蛋白质的重组微生物，培养所述重组微生物，表达得到所述蛋白质。

31、上述方法中，所述蛋白质的编码基因可为如下1)或2)或3)所示的基因：

32、1)编码序列是seq id no.1所示的dna分子；

33、2)编码序列是seq id no.3的第1-1674的dna分子；

34、3)与1)或2)限定的dna分子具有80％以上的同一性且编码所述蛋白质的dna分子。

35、所述编码所述蛋白质的基因为faddd1基因。

36、本文所述核酸分子可以是dna，如cdna、基因组dna或重组dna；所述核酸分子也可以是rna，如grna、mrna、sirna、shrna、sgrna、mirna或反义rna。

37、本领域普通技术人员可以很容易地采用已知的方法，例如定向进化或点突变的方法，对本发明的编码蛋白质faddd1的核苷酸序列进行突变。那些经过人工修饰的，具有与本发明分离得到的蛋白质faddd1的核苷酸序列75％或75％以上同一性的核苷酸，只要编码蛋白质faddd1且具有蛋白质faddd1功能，均是衍生于本发明的核苷酸序列并且等同于本发明的序列。

38、上述75％或75％以上同一性，可为80％、85％、90％或95％以上的同一性。

39、本文中，同一性是指氨基酸序列或核苷酸序列的同一性。可使用国际互联网上的同源性检索站点测定氨基酸序列的同一性，如ncbi主页网站的blast网页。例如，可在高级blast2.1中，通过使用blastp作为程序，将expect值设置为10，将所有filter设置为off，使用blosum62作为matrix，将gap existence cost，per residue gap cost和lambda ratio分别设置为11，1和0.85(缺省值)并进行检索以对氨基酸序列的同一性进行计算，然后即可获得同一性的值(％)。

40、本文中，所述80％以上的同一性可为至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的同一性。本发明还提供了一种防治依赖dsf介导致病的生防试剂，所述生防试剂含有上述蛋白质。

41、本发明还提供了上述重组蛋白质、上述生物材料或方法在如下任一种中的应用：

42、1)在制备提高水产动物抵抗病害药物中的应用，

43、2)制备抗水产动物中的病害产品中的应用，

44、3)在制备降解群体感应信号分子dsf或/和dsf类似物中的产品中的应用。

45、上述应用中，所述病害为群体感应信号分子dsf介导的致病菌引起的疾病。

46、本发明提供了一种dsf降解酶编码基因faddd1及其应用。本发明从坦氏不动杆菌(acinetobacter tandoii)dd15中克隆得到了一种新的负责脂肪酸降解的基因-dsf降解酶编码基因faddd1，该编码基因faddd1在大肠杆菌中异源表达后，能够显著提高宿主斑马鱼对qs信号分子dsf介导的致病菌的抗病性。

47、保藏说明

48、菌种名称：坦氏不动杆菌

49、拉丁名：acinetobacter tandoii

50、菌株编号：dd15

51、保藏机构：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心

52、保藏机构简称：cgmcc

53、地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号

54、保藏日期：2022年6月9日

55、保藏中心登记入册编号：cgmcc no.25032