一种增香降粘菌剂及其在再造烟叶浓缩液中的应用的制作方法

本发明涉及微生物，特别涉及一种增香降粘菌剂及其在再造烟叶浓缩液中的应用。

背景技术：

1、造纸法再造烟叶是利用烟草物质(烟梗、烟末、碎烟片等)为主体原料，通过提取、打浆、浓缩、抄造、涂布和干燥等工艺，将烟草原料加工而成的烟草制品，对卷烟品牌的发展及卷烟品质的稳定提升发挥着至关重要的作用。烟草物质经过水提后，提取液经过浓缩形成浓缩液，固形物经过压片形成片基，将烟草浓缩液均一的涂布在片基上，从而制备成再造烟叶。片基为再造烟叶提供骨架结构，浓缩液为再造烟叶提供主要香味成分。然而目前大部分再造烟叶加工过程中的浓缩液普遍存在两方面的问题：一是再造烟叶浓缩液的香味成分不足，二是浓缩液粘度大使得片基涂布率低，且易导致设备堵塞，无法满足再造烟叶生产企业更高的加工要求及产品品质需求。

2、浓缩液中香味物质来源于烟草物质，在制备过程中由于提取率低和高温浓缩损失等原因，导致浓缩液中香味物质含量不足；浓缩液粘度大主要是由于浓缩液中多糖、果胶、淀粉、蛋白质等大分子物质较多造成的，降低大分子物质含量可以有效降低浓缩液的粘度。在实际生产工艺过程中就此问题曾开展过多方面的实验工作：通过外加香料改善香味不足，但成本较高且一般不够协调；通过改善物料运送机装置、碳化硅超滤膜净化再造烟叶浓缩液来解决粘度问题，但实际效果不是很理想，没有从根本上对症结问题进行研究。

3、微生物降解大分子具有绿色、高效等特点，选择合适的微生物处理浓缩液，一方面可以降解大分子物质降低粘度，另一方面可以转化大分子物质形成香味成分。目前利用微生物来增加造纸法再造烟叶工艺中浓缩液香气、降低浓缩液粘度的相关报道较少。

技术实现思路

1、本发明所要解决的技术问题是提供一种增香降粘菌剂及其在再造烟叶浓缩液中的应用，其克服了现有技术的上述缺陷。

2、本发明所要解决的技术问题是通过以下技术方案来实现的：

3、一种增香降粘菌剂，所述增香降粘菌剂通过以下方法制备而成：

4、(1)菌体的培养与富集：

5、将保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心，保藏编号为cgmcc no.24327的克雷伯氏菌(klebsiella sp.)hnyj-1单菌落用接种环接种到lb液体培养基中，于25-40℃，100-200r/min的摇床中培养6-36h，得到原始种子；

6、(2)菌体梯度诱导获得增香降粘菌剂：

7、(21)选择粘度为82cp±0.5cp的浓缩液，用纯水进行稀释，获得体积比为30％和70％的浓缩液；

8、(22)将体积为v1的原始种子离心去上清，菌体沉淀后全部放置于体积为v1的30％浓缩液中，于25-40℃，100-200r/min的摇床中培养6-36h，离心后去上清，溶解于体积为80％v1的去离子水中，得到一级诱导种子，并等分为2份，1份留存备用，1份继续诱导；

9、(23)将其中1份一级诱导种子与体积为v2的70％浓缩液中，于25-40℃，100-200r/min的摇床中培养6-36h，离心后去上清，溶解于体积为80％v2的去离子水中，得到二级诱导种子，并等分为2份，1份留存备用，1份继续诱导；

10、(24)将其中1份二级诱导种子于4℃静置放置6-48h，然后与体积为v3的100％浓缩液混合，于25-40℃，100-200r/min的摇床中培养6-36h，离心去上清，溶解于体积为80％v3的去离子水中，得到三级诱导种子，

11、所述一级诱导种子、所述二级诱导种子以及所述三级诱导种子即为增香降粘菌剂。

12、优选地，步骤(1)中，原始种子的培养条件为：温度30℃，转速150r/min的摇床培养12h。

13、优选地，步骤(2)中，一级诱导种子的培养条件为：温度30℃，转速150r/min的摇床培养24h，二级诱导种子的培养条件为：温度30℃，转速150r/min的摇床培养18h，三级诱导种子的培养条件为：温度30℃，转速150r/min的摇床培养12h。

14、优选地，步骤(2)中，v2/v1＝v3/v2＝40％。

15、一种利用增香降粘菌剂制备增香降粘的再造烟叶浓缩液的方法，包括以下步骤：

16、向再造烟叶浓缩液中添加体积分数为2％的三级诱导种子，设置温度25-40℃、50-200r/min搅拌发酵6-36h，发酵结束后，得到增香降粘的再造烟叶浓缩液；或者

17、向再造烟叶浓缩液中添加体积分数为0.5-10％的一级诱导种子，添加体积分数为0.1-5％的二级诱导种子，混合均匀后，设置温度25-40℃、50-150r/min搅拌发酵6-36h；再添加体积分数为0.1-5％的三级诱导种子，设置温度25-40℃、50-200r/min继续搅拌发酵6-36h，发酵结束后，得到增香降粘的再造烟叶浓缩液。

18、一种增香降粘的再造烟叶浓缩液中的应用。经过增香降粘菌剂处理后再造烟叶浓增香降粘菌剂在制备缩液中蛋白和淀粉的含量减少，果胶和纤维基本无变化，粘度降低。经过增香降粘菌剂处理后，再造烟叶浓缩液中醇类、醛酮类和酯类香味物质含量增加明显，杂环类物质升高，香味物质总量提升。

19、一种增香降粘的再造烟叶浓缩液在烟叶中的应用。

20、本发明上述技术方案，具有如下有益效果：

21、(1)克雷伯氏菌hnyj-1可以针对性降解蛋白和果胶，从而降低再造烟叶浓缩液粘度。增香降粘菌剂处理后再造烟叶浓缩液中淀粉的含量减少，纤维基本无变化，粘度降低。

22、(2)通过增香降粘菌剂处理后，再造烟叶浓缩液的整体品质提高明显。经过增香降粘菌剂处理后，再造烟叶浓缩液中醇类、醛酮类和酯类香味物质含量增加明显，杂环类物质升高，香味物质总量提升。

技术特征：

1.一种增香降粘菌剂，其特征在于，所述增香降粘菌剂通过以下方法制备而成：

2.根据权利要求1所述的增香降粘菌剂，其特征在于，步骤(1)中，原始种子的培养条件为：温度30℃，转速150r/min的摇床培养12h。

3.根据权利要求1所述的增香降粘菌剂，其特征在于，步骤(2)中，一级诱导种子的培养条件为：温度30℃，转速150r/min的摇床培养24h，二级诱导种子的培养条件为：温度30℃，转速150r/min的摇床培养18h，三级诱导种子的培养条件为：温度30℃，转速150r/min的摇床培养12h。

4.根据权利要求1所述的增香降粘菌剂，其特征在于，步骤(2)中，v2/v1＝v3/v2＝40％。

5.一种利用权利要求1-4任一所述的增香降粘菌剂制备增香降粘的再造烟叶浓缩液的方法，其特征在于，包括以下步骤：

6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述增香降粘菌剂处理后再造烟叶浓缩液中蛋白和淀粉的含量减少，果胶和纤维基本无变化，粘度降低。

7.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，经过增香降粘菌剂处理后，再造烟叶浓缩液中醇类、醛酮类和酯类香味物质含量增加明显，杂环类物质升高，香味物质总量提升。

8.根据权利要求5所述的增香降粘的再造烟叶浓缩液在烟叶中的应用。

技术总结
本发明公开了一种增香降粘菌剂及其在再造烟叶浓缩液中的应用。该增香降粘菌剂通过以下方法制备而成：(1)菌体的培养与富集：将保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心，保藏编号为CGMCC No.24327的克雷伯氏菌(Klebsiella sp.)HNYJ‑1单菌落用接种环接种到LB液体培养基中，培养，得到原始种子；(2)菌体梯度诱导获得增香降粘菌剂。该增香降粘菌剂用于制备增香降粘的再造烟叶浓缩液。经过增香降粘菌剂处理后再造烟叶浓缩液中蛋白、果胶以及淀粉的含量减少，纤维基本无变化，粘度降低；同时，再造烟叶浓缩液中醇类、醛酮类和酯类香味物质含量增加明显，杂环类物质升高，香味物质总量提升。

技术研发人员：杨金初,冯颖杰,杨宗灿,张婷婷,徐永明,刘文召,张展,李耀光,郭华诚,王清福,刘前进
受保护的技术使用者：河南中烟工业有限责任公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/13