一种酪蛋白?肉桂精油脂质体抗菌剂的制备方法和用图

文档序号:10670421阅读:757来源:国知局
一种酪蛋白?肉桂精油脂质体抗菌剂的制备方法和用图
【专利摘要】本发明属于抗菌剂及食品添加剂或者化妆品领域,具体涉及一种酪蛋白?肉桂精油脂质体抗菌剂的制备方法及应用。本发明通过将肉桂精油包裹在酪蛋白脂质体中,以实现减少肉桂精油在施用过程中的挥发,从而减少肉桂精油的浪费,提高其利用率,达到长效抗菌与高效利用的目的。
【专利说明】
一种酪蛋白-肉桂精油脂质体抗菌剂的制备方法和用途
技术领域
[0001] 本发明属于抗菌剂及食品添加剂或者化妆品领域,具体涉及一种酪蛋白-肉桂精 油脂质体抗菌剂的制备方法及应用。
【背景技术】
[0002] 肉桂精油属挥发性油,是一种黄色至红褐色澄清液体,其主要成分为肉桂醛,其次 为α_水芹烯、1,8_桉叶油素、对伞花烃、樟脑、芳樟醇、β_石竹烯、α_依兰烯、α_松油醇、香叶 醇、桂酸甲酯、桂酸乙酯、丁子香酚、肉桂醇等。肉桂精油具有抗氧化、清除胆固醇、降血糖、 降血脂、抗菌等功能。目前,肉桂精油已被食品药品监督管理局认为是一种安全无毒的食品 添加剂。肉桂精油已被广泛应用于食品调味料、临床治疗、医疗保健等领域。
[0003]国内已有很多关于肉桂精油在食品、化妆品、医药技术等领域的专利申请。 CN104532596A公开了一种肉桂油微胶囊织物整理液的制备方法。所得的织物整理液具有更 好的耐水洗性能,更持久的抗菌保健和防皱功能。CN104872215A公开了一种含有肉桂油的 微囊化植物精油驱蚊剂。CN102660053A公开了一种卡拉胶-肉桂精油可食性薄膜及其制备 方法。所得薄膜用于超市冷鲜肉的包装,可以有效延长冷鲜肉保质期。CN103271996A公开了 一种肉桂精油与混合环糊精包合物及其制备方法。该技术提高了包合率,增加了溶解度和 稳定性,并且避免了在生产过程中使用有机溶剂。CN103690626A公开了一种复方肉桂胶囊 及其制备方法。产品口感良好,具有明显的效果,保质期长。CN102885379A公开了一种双重 抑菌肉桂醛微胶囊的制备方法。CN103653179A公开了一种肉桂精油纳米脂质体及其制备方 法。方法操作简单,且制备的纳米脂质体分散性好,粒径均匀,稳定性好。CN101519624公开 了一种肉桂精油微胶囊的制备方法。产品具有良好的热稳定性和溶解分散性。
[0004] 虽然肉桂精油在医学,食品和化妆品行业被广泛应用,具有较好的杀菌、增香等特 点,但是肉桂精油易挥发,暴露在空气中不稳定,所以要寻找有效的方法降低肉桂精油在使 用过程中的挥发程度,延长其贮存期。
[0005] 纳米脂质体能将精油包裹在内,并且纳米脂质体不会对肉桂精油的主要活性成分 造成破坏。纳米脂质体使肉桂精油中的活性成分与外界环境隔绝开来,可以降低肉桂精油 的挥发性,延长保存期。但由于脂质体的缓释作用,包裹精油的脂质体保质期有限。因此,选 用酪蛋白制成稳定性更高的酪蛋白脂质体。此外,纳米脂质体由于它们的亚细胞尺寸,能加 强脂质体的被动吸收机制,减少物质运输阻力,从而增强精油的抗菌效果。

【发明内容】

[0006] 本发明的目的是公开一种酪蛋白-肉桂精油脂质体的制备方法及其用途,通过将 肉桂精油包裹在酪蛋白脂质体中,以实现减少肉桂精油在施用过程中的挥发,从而减少肉 桂精油的浪费,提高其利用率,达到长效抗菌与高效利用的目的。本发明由肉桂精油,大豆 卵磷脂,胆固醇和表面活性剂Brij-35,酪蛋白制成酪蛋白-肉桂精油脂质体。
[0007] 本发明的制备方法是将肉桂精油,大豆卵磷脂,胆固醇混合于有机溶剂,减压蒸发 形成光滑的薄膜,加入水相介质溶解膜状物并超声成乳液,通过离心和微孔滤膜过滤,得到 粒径为纳米级的肉桂精油脂质体,其特征在于:将纳米级的肉桂精油脂质体与酪蛋白和表 面活性剂的溶液混合,搅拌均匀,通过低温冷冻缓慢融化的方法使酪蛋白镶嵌在脂质体上, 通过温和超声使脂质体闭合,最终形成包裹肉桂精油的酪蛋白脂质体。
[0008] 本发明的大豆卵磷脂和胆固醇的质量比为5:1;用于制备精油脂质体的乳液含有 肉桂精油的浓度为5.0mg/mL;表面活性剂为十二烷基聚乙二醇醚(Brij-35),得到包裹肉桂 精油的酷蛋白脂质体后其最终浓度为1. 〇mg/mL。
[0009] 本发明中所述的有机溶剂为氯仿。
[0010] 本发明中所用的水相介质是根据中国药典2000版标准配制的磷酸盐缓冲溶液,pH 值6.5~7.4,优选7.2。
[0011] 所述的酪蛋白和表面活性剂的溶液是将酪蛋白分散在Brij-35的磷酸盐缓冲液中 得到的,Br i j-35浓度为1 Omg/mL,分散后溶液中酪蛋白浓度为1. Omg/mL。
[0012] 本发明中脂质体上镶嵌的蛋白为酪蛋白,肉桂精油脂质体与酪蛋白和表面活性剂 的溶液以体积比1 〇: 1混合,混合后溶液中酪蛋白浓度为〇. lmg/mL,Bri j-35浓度为1.Omg/ mL〇
[0013] 本发明中低温冷冻缓慢融化是指将混合液在-18°c下冷冻2h,随后在0°C下缓慢融 化2h。
[0014] 本发明中温和超声是指在低功率50W条件下超声2h,温度范围0-10°C。
【附图说明】
[0015] 图1酪蛋白-肉桂精油脂质体的包封率。
[0016] 图2酪蛋白-肉桂精油脂质体的粒径与多分散系数(PDI)。
[0017] 图3酪蛋白-肉桂精油脂质体对大肠杆菌的抗菌效果。
[0018] 图4酪蛋白-肉桂精油脂质体对金黄色葡萄球菌的抗菌效果。
[0019]表1酪蛋白-肉桂精油脂质体的Zeta电位。
【具体实施方式】
[0020] 通过下面实例说明本发明的【具体实施方式】,但本发明的保护内容,不仅局限于此
[0021] 实施例1酪蛋白-肉桂精油脂质体的包封率
[0022] 1实验材料 大豆卵磷脂 国药集团化学试剂有限公司 胆固醇 AR 国药集团化学试剂有限公司 三氯甲烷 AR 国药集团化学试剂有限公司
[0023] 肉桂精油 AR 法国Flofilmna精油 Brij-35 GR 国药集团化学试剂有限公司 酪蛋白 CP 国药集团化学试剂有限公司
[0024] 2实验方法
[0025] 1)肉桂精油脂质体的制备
[0026]①称取lg大豆卵磷脂,0.2g胆固醇和250mg的肉桂精油,加入50mL氯仿使其溶解。 [0027]②在旋转蒸发仪中蒸发至溶剂蒸干,蒸发温度为10~30°C,圆底烧瓶内壁会形成 光滑的薄膜;然后将所得产品放入真空干燥箱中,30°C,真空状态下干燥24h。
[0028] ③加入50mL的磷酸盐缓冲液到圆底烧瓶中进行水化,水化超声波功率为100W,超 声时间为5h。
[0029] ④将所得混合液于细胞超微粉碎仪中以功率360W,工作10s间隙5s,粉碎30min。
[0030] ⑤将所得产品进行离心,4000rpm,15min,取上层液体。
[0031 ]⑥将所得液体用0.22μπι滤膜进行过滤,得滤液。
[0032] 2)酷蛋白-肉桂精油脂质体的制备
[0033] ①按照上述肉桂精油脂质体的制备方法,制备肉桂精油浓度为5mg/mL的肉桂精油 脂质体。
[0034]②将酪蛋白超声分散在含10mg/mL Brij-35的磷酸盐缓冲液中,形成酪蛋白一 Br i j-35溶液,其中酪蛋白浓度为1. Omg/mL。
[0035]③在50mL肉桂精油脂质体中添加5mL lmg/mL的酪蛋白-Brij-35溶液,混合均匀。 [0036]④将所得混合液于超声条件下扩散lOmin。
[0037] ⑤将所得混合液在-18 °C下冷冻2h。
[0038]⑥将所得混合液在0 °C下缓慢融化2h。
[0039] ⑦通过温和超声(功率50W,2h,KQ-300DE,昆山市超声仪器有限公司)使脂质体闭 合,所得溶液即为酪蛋白-肉桂精油脂质体。
[0040] 3)包封率的测定
[00411用无水乙醇稀释肉桂精油,逐级稀释成浓度分别为0.1、0.2、0.4、0.6、0.8mg/mL的 标准溶液。然后,分别吸取lyL标准溶液进行GC-MS分析,对其主要成分丁子香酚的谱峰面积 进行自动积分,绘制丁子香酚峰面积-肉桂精油浓度标准曲线。取lmL酪蛋白-肉桂精油脂质 体样品,13500rpm,离心3h,倒掉上清液。接着加入lmL乙醇破乳剂,超声3h。最后以lOOOOrpm 的转速离心15min,取上清液,用于GC-MS分析。制备好的脂质体样品,对精油主成分的峰面 进行自动积分,再根据绘制的标准曲线,计算出脂质体中肉桂精油的含量。则:
[0042] 包封率=,月曰质f本+%樹目獅勺3? x 1娜: 初始添加的肉桂精油的总量
[0043] 3酪蛋白-肉桂精油脂质体的包封率
[0044] 包封率是评价脂质体制剂质量好坏的最重要的指标,也是脂质体能否发挥较普通 制剂尚效、低毒等特点的关键。由图1可看出,肉桂精油脂质体的包封率为40.1 %,酷蛋白-肉桂精油脂质体的包封率为81.3%。因此制备酪蛋白-肉桂精油脂质体可以明显提高脂质 体的包封率。
[0045] 实施例2酪蛋白-肉桂精油脂质体的粒径与多分散系数(PDI)
[0046] 1实验材料 [0047]①空白脂质体 [0048]②肉桂精油脂质体
[0049]③酪蛋白-肉桂精油脂质体
[0050] 2实验方法
[0051] 用美国布鲁克海文仪器公司产的,型号为BI-9000的高浓度激光粒度仪测定酪蛋 白-肉桂精油脂质体的粒径和多分散系数(PDI)值,所测样品放入样品池直接测量即可。 [0052] 3酪蛋白-肉桂精油脂质体的粒径与多分散系数(PDI)
[0053] 多分散系数(PDI)直接反映酪蛋白-肉桂精油脂质体的稳定性,因此是主要参考指 标,脂质体的PDI在0~0.3范围内属于最好,在0.3~0.7范围内较差,但可以接受,当PDI> 0.8时,不予考虑。如图2所示,空白脂质体的粒径为86.4nm、PDI为0.353,肉桂精油脂质体的 粒径为145.0nm、PDI为0.246,酪蛋白-肉桂精油脂质体的粒径为615.0腦、?01为0.029。蛋 白-肉桂精油脂质体的多分散系数(PDI)最小,因此制备酪蛋白-肉桂精油脂质体可以明显 提尚脂质体的稳定性。
[0054] 实施例3酪蛋白-肉桂精油脂质体的Zeta电位
[0055] 1实验材料
[0056] ①空白脂质体
[0057]②肉桂精油脂质体
[0058]③酪蛋白-肉桂精油脂质体 [0059] 2实验方法
[0000] 用英国马尔文仪器有限公司生产的型号为Zetasirer nano ZSZeta的电位仪测 量,直接将待测脂质体样品放入电位仪中测量即可。
[0061] 3酪蛋白-肉桂精油脂质体的Zeta电位
[0062] 表1酪蛋白-肉桂精油脂质体的Zeta电位
[0063]
[0064] Zeta电位也可以直接反映酪蛋白-肉桂精油脂质体的稳定性,因此也是主要参考 指标,脂质体的Zeta电位的绝对值越大说明脂质体越稳定性,Zeta电位的绝对值在0~30范 围内属于不稳定,在大于30时脂质体较稳定性。如表1所示,三种脂质体均带负电,空白脂质 体的Zeta电位为-22.8mV,其绝对值小于30,脂质体不稳定;肉桂精油脂质体的Zeta电位为-40. lmV,其绝对值大于30脂质体,较稳定;酪蛋白-肉桂精油脂质体的Zeta电位为-55.OmV, 其绝对值最大,脂质体最稳定。
[0065] 实施例4酪蛋白-肉桂精油脂质体的抗菌性能
[0066] 1实验材料
[0067] ①肉桂精油脂质体(保存7天、30天、60天、90天)
[0068]②酪蛋白-肉桂精油脂质体(保存7天、30天、60天、90天)
[0069] 2实验方法
[0070]采用平板菌落计数法,以大肠杆菌(Escherichia coli)和金黄色葡萄球菌 (Staphylococcus aureus)为模式菌种测定酪蛋白-肉桂精油脂质体的残存菌数。将大肠杆 菌和金黄色葡萄球菌接种到液体培养基中,分别置于空气摇床中在37 °C、150rpm的条件下 震荡培养24~48h,获得对数生长期的菌悬液。取适量处于对数期的大肠杆菌和金黄色葡萄 球菌分别加入含有一定量无菌磷酸盐缓冲液的试管中(细菌浓度约为1〇 5~106CFU/mL),然 后再向试管中加入浓度为20%(v/v)的肉桂精油脂质体及酪蛋白-肉桂精油脂质体。同时另 取两个分别含有以上两种菌的试管并向其中加入等量无菌水(不加脂质体)作为对照。将各 试管均置于空气摇床中在37°C、150rpm的条件下震荡反应24h。分别于不同时间点的取适量 培养液进行十倍梯度稀释到合适的浓度,然后移取l〇〇yL稀释液滴到无菌固体平板培养基 上,涂布均匀之后放入37°C恒温恒湿培养箱中倒置培养。24~48h后进行平板菌落计数,从 而对肉桂精油脂质体和酪蛋白-肉桂精油脂质体的抗菌活性进行评价。实验重复三次,结果 取平均值。
[0071] 3酪蛋白-肉桂精油脂质体的抗菌性能
[0072] 不同保存期的酪蛋白-肉桂精油脂质体的抗菌活性的变化也可以间接反映脂质体 的稳定性。因此对保存7天、30天、60天、90天的肉桂精油脂质体及酪蛋白-肉桂精油脂质体 进行了抗菌性能评价,结果如图3、图4所示。保存时间为7天时,肉桂精油脂质体与酪蛋白-肉桂精油脂质体的抗菌活性相近,对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌均显示了良好的抗菌效 果。保存时间为30天时,肉桂精油脂质体的抗菌效果明显降低,而酪蛋白-肉桂精油脂质体 仍然显示出良好的抗菌效果。保存时间为60天和90天时,肉桂精油脂质体几乎没有显示抗 菌效果,而酪蛋白-肉桂精油脂质体仍然保持良好的抗菌效果。
【主权项】
1. 一种酪蛋白-肉桂精油脂质体抗菌剂的制备方法,将肉桂精油,大豆卵磷脂,胆固醇 混合于有机溶剂,减压蒸发形成光滑的薄膜,加入水相介质溶解膜状物并超声成乳液,通过 离心和微孔滤膜过滤,得到粒径为纳米级的肉桂精油脂质体,其特征在于:将纳米级的肉桂 精油脂质体与酪蛋白和表面活性剂的溶液混合,搅拌均匀,通过低温冷冻缓慢融化的方法 使酪蛋白镶嵌在脂质体上,通过温和超声使脂质体闭合,最终形成包裹肉桂精油的酪蛋白 脂质体。2. 如权利要求1所述的一种酪蛋白-肉桂精油脂质体抗菌剂的制备方法,其特征在于: 大豆卵磷脂和胆固醇的质量比为5:1;用于制备精油脂质体的乳液含有肉桂精油的浓度为 5.0mg/mL;表面活性剂为十二烷基聚乙二醇醚(Brij-35),得到包裹肉桂精油的酪蛋白脂质 体后其最终浓度为1 .Omg/mL。3. 如权利要求1所述的一种酪蛋白-肉桂精油脂质体抗菌剂的制备方法,其特征在于: 所述的有机溶剂为氯仿。4. 如权利要求1所述的一种酪蛋白-肉桂精油脂质体抗菌剂的制备方法,其特征在于: 所用的水相介质是根据中国药典2000版标准配制的磷酸盐缓冲溶液,pH值6.5~7.4,优选 7.2。5. 如权利要求1所述的一种酪蛋白-肉桂精油脂质体抗菌剂的制备方法,其特征在于: 所述的酪蛋白和表面活性剂的溶液是将酪蛋白分散在Brij-35的磷酸盐缓冲液中得到的, Br i j-35浓度为1 Omg/mL,分散后溶液中酪蛋白浓度为1. Omg/mL。6. 如权利要求1所述的一种酪蛋白-肉桂精油脂质体抗菌剂的制备方法,其特征在于: 脂质体上镶嵌的蛋白为酪蛋白,肉桂精油脂质体与酪蛋白和表面活性剂的溶液以体积比 10:1混合,混合后溶液中酪蛋白浓度为0. lmg/mL,Bri j-35浓度为1 .Omg/mL。7. 如权利要求1所述的一种酪蛋白-肉桂精油脂质体抗菌剂的制备方法,其特征在于: 低温冷冻缓慢融化是指将混合液在_18°C下冷冻2h,随后在0°C下缓慢融化2h。8. 如权利要求1所述的一种酪蛋白-肉桂精油脂质体抗菌剂的制备方法,其特征在于: 温和超声是指在低功率50W条件下超声2h,温度范围0-10°C。
【文档编号】A61K8/14GK106038327SQ201610520118
【公开日】2016年10月26日
【申请日】2016年7月4日
【发明人】崔海英, 李伟, 林琳
【申请人】江苏大学
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