导致COFS综合征的致病基因、检测及应用的制作方法

本发明涉及检测试剂领域，尤其涉及一种导致cofs综合征的致病基因、检测及应用。

背景技术：

1、cofs综合征又称为脑眼面骨骼(cerebro-oculo-facio-skeletal，cofs)综合征，是一种罕见的常染色体隐性遗传病，本病于1974年由pena和shokeir正式命名，其主要临床特征除严重的精神发育迟滞外还包括小头畸形、眼部异常、大耳廓、小下颌、关节屈曲及身体发育落后。cofs综合征属于核苷酸转录偶联修复途径障碍类疾病一种。根据不同的致病基因突变分为4种类型：cofs综合征1型为ercc6(csb，mim 126340)基因突变所致，2型(mim610756)为ercc2(xpd)基因突变所致，3型为ercc5(xpg)基因突变所致，4型为ercc1基因突变所致。ercc2基因突变除导致常染色体隐性遗传的脑-眼-面-骨骼综合征2型(cofs2，mim610756)外，还可以引起毛发硫代营养不良症(ttd，mim 601675)和色素干燥皮肤病(mim278730)。cofs2(mim 610756)是一种进行性神经退行性疾病，其特征是小头畸形、先天性白内障、严重智力低下、面部畸形和关节软化等；ttd常见临床表现为皮肤、神经和生长异常，其他临床特征有鱼鳞病、智力/发育障碍、生育力下降、眼部异常和身材矮小等；色素干燥皮肤病临床特征是身体受阳光暴晒的地方易患上皮肤癌。

2、ercc2基因(mim 126340)定位于染色体19q13.32，包括23个外显子和22个内含子，基因长20.8kb，编码760个氨基酸序列的ercc2蛋白。核苷酸切除修复途径是修复dna损伤的机制，该基因编码的蛋白参与转录偶联核苷酸切除修复，是基础转录因子btf2/tfiih复合物的一个不可分割的成员。该基因产物具有atp依赖性dna解旋酶活性，属于解旋酶的rad3/xpd亚家族。ercc2基因的突变或者失活可能导致疾病包括：癌症、着色性干皮病、毛发硫营养不良、cofs综合症等。

3、因此，基因突变是导致疾病发生发展的重要遗传基础，基因诊断是确诊cofs综合征的重要遗传学标准。临床上需要针对不同突变建立相应的检测技术并用于明确病因和疾病诊断，本发明首次发现ercc2一种新型复合杂合突变，可导致cofs综合征，并据此研制相应的诊断试剂盒，助力cofs综合征基因突变的筛查和诊断，并为其药物筛选、药效评价及靶向治疗提供新的技术支持。

技术实现思路

1、本发明的主要目的是提供一种导致cofs综合征的致病基因、检测及应用，以解决cofs综合征的筛查和诊断的技术问题。

2、为实现上述目的，本发明提供了一种导致cofs综合征的致病基因，所述致病基因相比于野生型ercc2基因，在所述野生型ercc2基因的紧邻第18号外显子的第17号内含子的最后一位碱基发生碱基g突变为碱基a；

3、和/或，所述致病基因相比于所述野生型ercc2基因，在所述野生型ercc2基因的第21号外显子的第1922位碱基发生碱性g突变为碱基c。

4、本发明还提供一种由如上述任意所述致病基因引发的cofs综合征的检测试剂，所述检测试剂包括针对所述致病基因发生突变的位点设计的特异性扩增引物。

5、进一步地，所述特异性扩增引物包括ercc2-1f、ercc2-1r、ercc2-2f、ercc2-2r，所述ercc2-1f的核苷酸序列如seq id no.1所示，所述ercc2-1r的核苷酸序列如seq id no.2所示，所述ercc2-2f的核苷酸序列如seq id no.3所示，所述ercc2-2r的核苷酸序列如seqid no.4所示。

6、本发明还提供一种cofs综合征的检测试剂盒，包括如上述任意所述检测试剂。

7、进一步地，还包括pcr扩增反应的试剂，和/或dna测序时所需的试剂和测序引物。

8、进一步地，所述测序引物包括ercc2-seq1f、ercc2-seq1r、ercc2-seq2f和ercc2-seq2r，所述ercc2-seq1f的核苷酸序列如seq id no.5所示，所述ercc2-seq1r的核苷酸序列如seq id no.6所示，所述ercc2-seq2f的核苷酸序列如seq id no.7所示，所述ercc2-seq2r的核苷酸序列如seq id no.8所示。

9、本发明还提供如上述任意所述检测试剂或如上述任意所述检测试剂盒在cofs综合征的检测方法中的应用。

10、进一步地，所述检测试剂的检测样本包括血液和/或羊水。

11、本次申请提出导致cofs综合征的致病基因，可以有效将cofs综合征患者和正常人群区分开，因此，本发明的致病基因突变可以作为诊断cofs综合征的生物标志物。本发明可通过检测受试者是否携带有上述突变，用于cofs综合征的遗传学诊断、筛查和优生优育指导。本发明所提供的检测试剂盒可用于快速、有效地预测或诊断cofs综合征。本发明为cofs综合征的发病机制研究奠定了新的基础和途径，为cofs综合征患者的治疗提供全新的理论依据。本发明可以为治疗cofs综合征提供可能的药物靶点。

技术特征：

1.一种导致cofs综合征的致病基因，其特征在于，所述致病基因相比于野生型ercc2基因，在所述野生型ercc2基因的紧邻第18号外显子的第17号内含子的最后一位碱基发生碱基g突变为碱基a；

2.一种由权利要求1所述致病基因引发的cofs综合征的检测试剂，其特征在于，所述检测试剂包括针对所述致病基因发生突变的位点设计的特异性扩增引物。

3.根据权利要求2所述检测试剂，其特征在于，所述特异性扩增引物包括ercc2-1f、ercc2-1r、ercc2-2f、ercc2-2r，所述ercc2-1f的核苷酸序列如seq id no.1所示，所述ercc2-1r的核苷酸序列如seq id no.2所示，所述ercc2-2f的核苷酸序列如seq id no.3所示，所述ercc2-2r的核苷酸序列如seq id no.4所示。

4.一种cofs综合征的检测试剂盒，其特征在于，包括权利要求2或3的所述检测试剂。

5.根据权利要求4所述检测试剂盒，其特征在于，还包括pcr扩增反应的试剂，和/或dna测序时所需的试剂和测序引物。

6.根据权利要求5所述检测试剂盒，其特征在于，所述测序引物包括ercc2-seq1f、ercc2-seq1r、ercc2-seq2f和ercc2-seq2r，所述ercc2-seq1f的核苷酸序列如seq id no.5所示，所述ercc2-seq1r的核苷酸序列如seq id no.6所示，所述ercc2-seq2f的核苷酸序列如seq id no.7所示，所述ercc2-seq2r的核苷酸序列如seq id no.8所示。

7.权利要求2或3所述检测试剂或权利要求4～6任一项所述检测试剂盒在cofs综合征的检测方法中的应用。

8.根据权利要求7所述应用，其特征在于，所述检测试剂的检测样本包括血液和/或羊水。

技术总结
本发明提供了一种导致COFS综合征的致病基因、检测及应用；致病基因相比于野生型ERCC2基因，在野生型ERCC2基因的紧邻第18号外显子的第17号内含子的最后一位碱基发生碱基G突变成碱基A，和/或在野生型ERCC2基因的第21号外显子的第1922位碱基发生碱性G突变为碱性C。本发明的致病基因突变可以作为诊断COFS综合征的生物标志物；本发明可通过检测受试者是否携带有上述突变，用于COFS综合征的遗传学诊断、筛查和优生优育指导；本发明所提供的检测试剂盒可用于快速、有效地预测或诊断COFS综合征。

技术研发人员：曾桥,伊宁,薛斌,范园
受保护的技术使用者：湖南家辉生物技术有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/12