一种利用耐高温酵母生产酵母培养物的方法与流程

本发明属于固态发酵和生物功能饲料领域，具体地说是一种利用耐高温酵母生产酵母培养物的方法。

背景技术：

1、酵母培养物是由酵母菌在特定的固态培养基上经过充分的厌氧发酵后形成的微生态制品，属于固态发酵技术。酵母培养物包括三部分功能物质，即酵母细胞外代谢产物、经过酵母发酵而变性的培养基以及酵母细胞本身(细胞内容物成分和细胞壁成分)，因此优质的酵母培养物产品，发酵过程离不开较高的酵母菌量和较高的生长代谢活力。

2、然而固态发酵的特点在于很难做到培养基的完全无菌，物料堆积发酵产热后又不易散热。因此酵母固态发酵，一方面需要开发合适酵母生长而不适宜其他菌类生长的培养基配方，另一方面需要加大酵母接种量，这样可以让酵母菌在发酵初期迅速占优，同时也提高了酵母培养物生产效率。然而大的接种量意味着温度的快速升高，即便初始温度在25℃，也会很快增长到35℃以上。而普通酵母的最适生长温度在30℃左右，是很难长时间适应这种高温环境的，从而导致代谢活力严重下降，不能产生较为丰富的酵母培养物的三大类功能物质，另外固态发酵产热不能像液体发酵一样，通过搅拌和降温迅速散热，固态发酵通常使用翻料降温方法，然而翻料会形成好氧发酵，违背了厌氧发酵的技术要求。而其他降温方式，如环境降温，或通非氧气体着手控制，这些措施都会增加很大能耗而效果不佳。

技术实现思路

1、本发明提供一种利用耐高温酵母生产酵母培养物的方法，用以解决现有技术中的缺陷。

2、本发明通过以下技术方案予以实现：

3、一种利用耐高温酵母生产酵母培养物的方法，包括如下步骤：

4、步骤一：高温培养筛选

5、选用饲用酵母进行培养，从试管斜面挑取1-3环菌苔，配制成菌悬液，吸取菌悬液涂布于8-12个ypd培养基平板，每个ypd培养基平板涂布100ul菌悬液，40℃恒温培养；培养46-52h，筛选平板中生长最好的十个菌落备用；

6、步骤二：发酵繁殖活力筛选

7、将步骤一中选取的菌落，分别接种于摇瓶培养基，在40℃下，200rpm，发酵34-38h，然后分别取10ml发酵液，4000rpm离心10min，检测湿重，保藏湿重最高的菌株，并用其制备摇瓶发酵液；

8、步骤三：酵母液态发酵

9、取步骤二中制备的发酵液，然后将其接入种子培养基在40℃温度下，前8h通气比0.4：1，之后通气比0.9：1，发酵20-24h；然后将发酵液接种到发酵培养基中，在40℃温度下，前6h通气比0.6：1，之后通气比0.9：1，发酵周期26-30h，得耐高温酵母发酵液；

10、步骤四：酵母培养物固态发酵

11、将步骤三中所得耐高温酵母发酵液加入固态发酵底物中，充分搅拌混合均匀，使物料终水分控制在39-41％，起始温度控制在25-28℃，混合完成后送入发酵箱内压实厌氧发酵，发酵时间65-72h，发酵结束后，对物料进行55℃低温干燥、粉碎即得酵母培养物。

12、如上所述的一种利用耐高温酵母生产酵母培养物的方法，所述的步骤一中菌悬液的配制方法包括如下步骤：将取下的菌苔加入10ml无菌生理盐水，充分震荡分散，然后吸取1ml震荡后溶液再加入9ml无菌生理盐水，充分震荡，按照上述步骤进行2-4个数量级稀释，以获得合适浓度的菌悬液，便于分离到较多单菌落。

13、如上所述的一种利用耐高温酵母生产酵母培养物的方法，所述的步骤二中的湿重检测标准为不低于40g/l，若所有发酵液均未达到，则再次进行筛选直至有达到检测标准的发酵液为止。

14、如上所述的一种利用耐高温酵母生产酵母培养物的方法，所述的步骤二中的摇瓶培养基包括如下重量百分比的物质：红糖3.5-4.5％，葡萄糖1.3-1.7％，蛋白胨1.4-1.6％，酵母膏0.25-0.35％，磷酸二氢钾0.10-0.14％，硫酸镁0.07-0.09％，尿素0.13-0.17％，余量为水。

15、如上所述的一种利用耐高温酵母生产酵母培养物的方法，所述的摇瓶培养基的装液量60ml/250ml摇瓶。

16、如上所述的一种利用耐高温酵母生产酵母培养物的方法，所述的步骤三中的种子培养基包括如下重量百分比的物质：葡萄糖1.3-1.7％，蔗糖蜜4.5-5.5％，蛋白胨0.4-0.6％，酵母膏0.25-0.35％，磷酸二氢钾0.08-0.12％，尿素0.16-0.24％，硫酸镁0.08-0.12％，余量为水。

17、如上所述的一种利用耐高温酵母生产酵母培养物的方法，所述的步骤三中的发酵培养基包括如下重量百分比的物质：葡萄糖1.7-2.3％，蔗糖蜜14-16％，蛋白胨0.4-0.6％，磷酸二氢钾0.08-0.12％，硫酸铵0.08-0.12％，尿素0.35-0.45％，硫酸镁0.08-0.12％，余量为水。

18、如上所述的一种利用耐高温酵母生产酵母培养物的方法，所述的步骤二中湿重最高的菌株制备的发酵液与种子培养基接种体积比为1-5:1000。

19、如上所述的一种利用耐高温酵母生产酵母培养物的方法，所述的步骤三中种子发酵液接种到发酵培养基时按照发酵液与发酵培养基体积比为1:8-10的比例进行添加。

20、如上所述的一种利用耐高温酵母生产酵母培养物的方法，所述的步骤三中得到的高温酵母发酵液取10ml在4000rpm离心10min，所得菌株湿重应不低于150g/l。

21、如上所述的一种利用耐高温酵母生产酵母培养物的方法，所述的步骤四中的发酵底物包括如下重量份数的物质：麸皮30-50份，豆粕6-10份，玉米粉8-12份，啤酒粉2-3份，玉米浆9-11份，蔗糖蜜3-5份，磷酸二氢钾0.25份，硫酸铵0.25份，高温淀粉酶0.05份，水10-12份。

22、如上所述的一种利用耐高温酵母生产酵母培养物的方法，所述的发酵底物在制备时，先将蔗糖蜜溶于水中，然后将其与其他原料按配比混合于搅拌罐，再蒸汽加热熟化灭菌，加热温度为90℃，加热时间为20min，之后经过降温后接入耐高温酵母发酵液。

23、如上所述的一种利用耐高温酵母生产酵母培养物的方法，所述耐高温酵母发酵液与发酵底物按照1：7-8的体积质量比进行添加，换算单位为l/kg。

24、如上所述的一种利用耐高温酵母生产酵母培养物的方法，所述的步骤四中在发酵完成后对发酵物进行酸度检测，酸度应在3-4％。

25、本发明的优点是：

26、1、本发明通过对饲用酵母经过高温培养筛选和发酵繁殖活力筛选得到耐高温特性酵母，其可以在28-42℃范围保持良好生长代谢活性，同时耐高温的饲用酵母经过40℃液体发酵培养获得菌液，其湿重达到150g/l以上。接种于特定固态物料进行酵母培养物发酵，接种后全程压实厌氧，过程不再需要翻料降温、通气降温等降温措施，从而解决了酵母培养物在发酵过程中由于高温导致酵母活力严重下降，固态发酵又无法有效降温的问题，从而在节约了能源的同时还有效的提高了发酵效率；

27、2、经过实践研究证明，本发明制备的酵母培养物具有独特发酵香味，代谢产物丰富，可以增加奶牛产奶量，且比普通酵母同工艺生产的酵母培养物，使用添加量大幅降低，在确保奶牛产奶量的同时，还可以提高奶牛采食量、增强免疫力和抗应激性。也可以促进单胃动物肠道健康、增强免疫力，提高饲料消化吸收率。