本发明属于生物医药,具体涉及一种喹硫平衍生物半抗原、抗原、抗喹硫平抗体及其应用。
背景技术:
1、喹硫平(quetiapine)为二苯硫氮卓类非典型抗精神病药,主要作用于中枢多巴胺和5-羟色胺等受体,对于精神分裂症的阳性和阴性症状均有显著效果。由于其不易引起锥体外系反应,且耐受性好,近年来在临床上得到了广泛应用。《2011年精神科血药浓度监测(tdm)共识指南》指出,喹硫平具有治疗窗窄、个体差异大等特点,tdm推荐分级为2级建议级。临床上进行喹硫平血药浓度监测可保障治疗的安全性和有效性。但有报道发现,患者服用喹硫平时出现包括体位性低血压、肝功能酶异常在内的不良反应,更有报道因大剂量服用喹硫平而导致中毒昏迷的案例。故建立喹硫平血药浓度检测方法势在必行。此外已有研究表明,尿液中的喹硫平浓度也可以作为一种有效的监测手段,用于药物动力学研究和体内药物浓度的监测。
2、但目前喹硫平血药浓度监测国内临床实践中开展很少,与喹硫平血药浓度检测方法繁琐、人们缺乏血药浓度监测的意识,以及喹硫平的多种代谢物干扰测定等有关。喹硫平的检测分析主要有hplc-uv,hplc和lc-ms法,但hplc法分析时间较长内源性物质干扰大,难以满足临床检验对高效能和高准确度的要求,hplc-uv法灵敏度不足,lc-ms法设备昂贵,通量低,满足不了临床高通量、快速准确的检测需求。
3、免疫学检测是离体样本检测的常见方法之一,建立高灵敏度高特异性的喹硫平免疫学检测的前提是获得高质量的抗喹硫平抗体,进一步的依赖于喹硫平人工抗原的设计和制备。公开日为2020年2月07日的中国专利cn110763799a公开了一种高效液相色谱法测定喹硫平的方法,公开日为2019年6月18日的中国专利cn109900820a公开了一种高效液相质谱联用测定血液中喹硫平的方法,但是上述两个专利中的方法均需要复杂的前处理和专业的操作人员。公开日为2020年10月23日的中国专利cn111808046a公开了一种喹硫平人工半抗原、人工抗原及其制备方法和应用。但是该专利只是提供了一种喹硫平抗原制备方法,并未提供对应抗体的灵敏度和特异性。公开日为2017年10月20日的中国专利cn107266432a公开了用于免疫测定的喹硫平衍生物半抗原,配套抗体只公布了灵敏度性能,未公开特异性性能。公开日为2019年7月26日的中国专利cn110054693a公开了喹硫平衍生物半抗原的抗体及其用途,对应的建立的检测方法灵敏度符合要求,特异性方面评估对其他精神疾病类药物利培酮,喹硫平,阿立哌唑的交叉反应,但是没有分析同喹硫平代谢物的交叉反应情况。
4、综上所述,目前缺乏高灵敏度的同时特异性非常好的抗喹硫平抗体。
技术实现思路
1、本发明的目的在于提供一种喹硫平衍生物半抗原、抗原、抗喹硫平抗体及其应用,以所述喹硫平衍生物半抗原免疫得到的抗体能够特异性识别喹硫平,且与无活性代谢物无交叉反应,且灵敏度较高。
2、本发明提供了一种喹硫平衍生物半抗原,结构如式ⅰ所示:
3、
4、式ⅰ。
5、本发明还提供了一种喹硫平人工抗原,包括载体蛋白和上述技术方案所述的喹硫平衍生物半抗原;所述喹硫平衍生物半抗原和载体蛋白通过化学交联剂共价偶联。
6、优选的,所述载体蛋白包括牛血清白蛋白、鸡卵清蛋白、牛甲状腺球蛋白、人血清白蛋白或兔血清白蛋白。
7、优选的,所述化学交联剂包括1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳化二亚胺盐酸盐。
8、本发明还提供了一种由上述技术方案所述喹硫平人工抗原免疫筛选获得的杂交瘤细胞c-klp-12h2,所述杂交瘤细胞c-klp-12h2的保藏编号为cgmccno.45340。
9、本发明还提供了抗喹硫平抗体,采用上述技术方案所述的杂交瘤细胞c-klp-12h2分泌得到。
10、优选的,所述抗喹硫平抗体包括单克隆抗体或多克隆抗体。
11、本发明还提供了上述技术方案所述抗喹硫平抗体在免疫检测喹硫平血药浓度或制备免疫检测喹硫平血药浓度的试剂盒和/或试剂中的应用。
12、本发明还提供了一种喹硫平均相酶免疫检测试剂盒,所述试剂盒包括试剂r1和试剂r2;
13、所述试剂r1包括如下浓度的组分:20mm nad,30mm葡萄糖-6-磷酸、55mm ph值为8.0的tris缓冲液和0.01wt.%~0.1wt.%上述技术方案所述的抗喹硫平抗体;
14、所述试剂r2包括如下浓度的组分:0.01wt.%~0.1wt.%的喹硫平衍生物-葡萄糖-6-磷酸脱氢酶酶标偶联物和0.1m ph值为8.5的tris缓冲液;
15、所述喹硫平衍生物-葡萄糖-6-磷酸脱氢酶酶标偶联物由6-磷酸葡萄糖脱氢酶标记和上述技术方案所述喹硫平衍生物半抗原偶联得到。
16、本发明还提供了一种基于磁微粒化学发光法检测喹硫平血药浓度的方法,包括:
17、将待测样本、磁微粒工作液和酶标工作液混合孵育,清洗,加入发光底物反应显色,测定发光值rlu,代入标准四参数方程式,计算待检测样本中喹硫平血药浓度;
18、所述磁微粒工作液由磁微粒标记上述技术方案所述抗喹硫平抗体得到;
19、所述酶标工作液由酶标记上述技术方案所述喹硫平衍生物半抗原得到。
20、有益效果:
21、本发明提供了一种喹硫平衍生物半抗原,结构如式ⅰ所示:
22、
23、式ⅰ。
24、本发明所述喹硫平衍生物半抗原的衍生位点位于1,4-硫氮杂烷的n原子上,所述衍生位点位于喹硫平与喹硫平多种无活性代谢物:n-脱烷基喹硫平,o-脱烷基喹硫平,7羟基喹硫平和亚砜喹硫平的共同的特征结构上,进而展示出不同化合物的特征性,因此制备的抗喹硫平抗体能够特异性识别喹硫平,同多种代谢物无显著交叉反应。
25、本发明还提供了杂交瘤细胞c-klp-12h2,所述杂交瘤细胞c-klp-12h2分泌的抗喹硫平抗体能够高灵敏度、特异性地识别喹硫平与奥氮平、阿立哌唑、利培酮、n-脱烷基喹硫平、o-脱烷基喹硫平、7羟基喹硫平和亚砜喹硫平,无交叉反应,进而能够建立准确监测喹硫平血液和尿液浓度的方法。
26、生物材料保藏信息
27、分类命名为杂交瘤细胞株,保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,保藏日期为2022年12月26日,保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号,保藏编号为cgmcc no.45340,细胞编号为c-klp-12h2。
1.一种喹硫平衍生物半抗原,结构如式ⅰ所示:
2.一种喹硫平人工抗原,其特征在于,包括载体蛋白和权利要求1所述的喹硫平衍生物半抗原;所述喹硫平衍生物半抗原和载体蛋白通过化学交联剂共价偶联。
3.根据权利要求2所述的喹硫平人工抗原,其特征在于,所述载体蛋白包括牛血清白蛋白、鸡卵清蛋白、牛甲状腺球蛋白、人血清白蛋白或兔血清白蛋白。
4.根据权利要求2或3所述的喹硫平人工抗原,其特征在于,所述化学交联剂包括1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳化二亚胺盐酸盐。
5.一种由权利要求2~4任意一项所述喹硫平人工抗原免疫筛选获得的杂交瘤细胞c-klp-12h2,所述杂交瘤细胞c-klp-12h2的保藏编号为cgmcc no.45340。
6.抗喹硫平抗体,其特征在于,采用权利要求5所述的杂交瘤细胞c-klp-12h2分泌得到。
7.根据权利要求6所述的抗喹硫平抗体,其特征在于,所述抗喹硫平抗体包括单克隆抗体或多克隆抗体。
8.权利要求6所述抗喹硫平抗体在免疫检测喹硫平血药浓度或制备免疫检测喹硫平血药浓度的试剂盒和/或试剂中的应用。
9.一种喹硫平均相酶免疫检测试剂盒,其特征在于,所述试剂盒包括试剂r1和试剂r2;
10.一种基于磁微粒化学发光法检测喹硫平血药浓度的方法,其特征在于,包括: