针对正痘病毒及猴痘病毒的特异性检测体系

本发明涉及分子诊断，尤其涉及一种荧光定量聚合酶链式反应方法检测正痘病毒及猴痘病毒的实验方法。

背景技术：

1、正痘病毒(orthopoxvirus)是一类较大的dna病毒，基因组约200-300kbp，包括可引起人感染性疾病的痘苗病毒(vaccinia virus，vacv)、天花病毒(variola virus，varv)、牛痘病毒(cowpox virus，cpxv)、猴痘病毒(monkey poxvirus，mpxv)和骆驼痘病毒(camelpox virus)，以及仅在动物间传播的鼠痘病毒(ectromelia virus，ectv)以及浣熊痘病毒(raccoonpox virus)、臭鼬痘病毒(skunkpox virus)、沙鼠痘病毒(taterapoxvirus)。

2、上个世纪前，varv在全球范围内流行，致死率30％，而后vacv作为其疫苗株，在全人类中进行预防接种，who在1978年宣布，天花病毒被人类灭绝，成为全球首个被人类消灭的劣性病毒。1980年之后，随着vacv疫苗接种的终止，其他痘病毒感染引发的病例报道开始引起人们的关注，其中就包括猴痘病毒。

3、1970年非洲刚果地区报道了首例猴痘病毒感染病例之后，猴痘病毒仅在非洲地区小范围流行，或通过旅行者偶然感染被携带至非洲以外地方，引起小范围的病毒传播，期间流行的猴痘病毒包括在非洲刚果地区流行的clade i分支及在西非地区流行的clade ii分支。2022年5月，猴痘病毒感染病毒在欧洲国家报道，均为clade ii分支，且报道病例呈增加的态势，在全球范围内出现；2022年7月23日，世界卫生组织(who)宣布猴痘为国际关注的突发公共卫生事件。目前多地均有外来猴痘病例的报道，存在猴痘病毒传播的潜在风险，因此，亟需研发经济、有效、简单的猴痘病毒诊断方法，以快速筛查猴痘病毒，实现在传播早期进行干预，阻断传播。

技术实现思路

1、本发明的目的是提供一种检测正痘病毒及猴痘病毒的荧光定量pcr的快速检测方法。

2、为了实现上述目的，本发明提供以下方案：

3、第一方面，本发明提供了一种用于特异性检测正痘病毒的试剂，其包含特异性结合e9l基因的引物和探针和/或特异性结合d6r的引物和探针。

4、第二方面，本发明提供了一种用于特异性检测猴痘病毒的试剂，其包含特异性结合n3r基因的引物和探针和/或特异性结合b18rplus的引物和探针。

5、第三方面，本发明提供了一种荧光定量pcr试剂盒，其包含第一方面或第二方面的试剂。

6、第四方面，本发明提供了第一方面的试剂在制备用于检测样品中存在的正痘病毒和/或用于区分样品中存在的猴痘病毒与其他正痘病毒的检测剂中的用途。

7、第五方面，本发明提供了第二方面的试剂在制备用于检测样品中存在的猴痘病毒和/或用于区分样品中存在的猴痘病毒与其他正痘病毒的检测剂中的用途。

1.一种用于特异性检测正痘病毒的试剂，其包含特异性结合e9l基因的引物和探针和/或特异性结合d6r基因的引物和探针。

2.根据权利要求1所述的试剂，其中所述特异性结合e9l基因的引物和探针的核苷酸序列分别如seq id no：1-3所示；优选地，所述引物的反应浓度为0.5-1.5μm，优选地为1μm，所述探针的反应浓度为0.2-0.5μm，优选地为0.375μm。

3.根据权利要求1或2所述的试剂，其中所述特异性结合d6r的引物和探针的核苷酸序列分别如seq id no：4-6所示；优选地，所述引物的反应浓度为0.5-1.5μm，优选地为0.75μm，所述探针的反应浓度为0.2-0.5μm，优选地为0.375μm。

4.根据权利要求1-3中任一项所述的试剂，其中所述试剂还包含特异性结合n3r基因的引物和探针和/或特异性结合b18rplus的引物和探针。

5.一种用于特异性检测猴痘病毒的试剂，其包含特异性结合n3r基因的引物和探针和/或特异性结合b18rplus的引物和探针。

6.根据权利要求4或5所述的试剂，其中所述特异性结合n3r基因的引物和探针的核苷酸序列分别如seq id no：7-9所示；优选地，所述引物的反应浓度为0.5-1.5μm，优选地为1μm，所述探针的反应浓度为0.2-0.5μm，优选地为0.375μm。

7.根据权利要求4-6中任一项所述的试剂，其中所述特异性结合b18rplus的引物和探针的核苷酸序列分别如seq id no：10-12所示；优选地，所述引物的反应浓度为0.5-1.5μm，优选地为1μm，所述探针的反应浓度为0.2-0.5μm，优选地为0.375μm。

8.一种荧光定量pcr试剂盒，其包含权利要求1-7中任一项所述的试剂；优选地，所述荧光定量pcr试剂盒还包含dna聚合酶、dntp和镁离子。

9.权利要求1-4中任一项的试剂在制备用于检测样品中存在的正痘病毒和/或用于区分样品中存在的猴痘病毒与其他正痘病毒的检测剂中的用途；优选地，所述正痘病毒包括痘苗病毒、天花病毒、牛痘病毒、猴痘病毒和骆驼痘病毒。

10.权利要求5-7中任一项的试剂在制备用于检测样品中存在的猴痘病毒和/或用于区分样品中存在的猴痘病毒与其他正痘病毒的检测剂中的用途；优选地，所述其他正痘病毒包括痘苗病毒、天花病毒、牛痘病毒和骆驼痘病毒。