一种适于包装慢病毒的培养基及其应用的制作方法

本说明书涉及生物，特别涉及一种适于包装慢病毒的培养基及其应用。

背景技术：

1、自然杀伤细胞是一组独特的抗肿瘤效应细胞，具有不受mhc限制的细胞毒性、产生细胞因子和免疫记忆等功能，使其成为先天性和适应性免疫反应系统中的关键角色。car-nk就是利用基因工程给nk细胞加入一个能识别肿瘤细胞，并且同时激活nk细胞杀死肿瘤细胞的嵌合抗体。2020年，car-nk免疫细胞治疗曾被权威学术期刊《自然-医学》纳入度生物医学领域的十代瞩目进展之一。car-nk细胞疗法是一个很有前途的临床研究领域，对某些癌症患者具有良好的安全性和初步疗效。

2、目前用于car-nk慢病毒的包装系统为四质粒系统，分别为编码包膜蛋白baev基因的质粒、编码gag、pol等蛋白基因的质粒、以及编码rev等蛋白基因的质粒及含目的基因的穿梭质粒共同转染293t悬浮细胞，得到重组慢病毒。但是基于目前的包装工艺，存在感染滴度较低、杂质水平较高等问题。

技术实现思路

1、本申请提供一种适于包装慢病毒的培养基，所述培养基包括基础培养基和补料培养基，所述基础培养基为dynamis，所述补料培养基选自feed1、feed2或feed3培养基中至少一种。

2、本申请还提供一种包装慢病毒的方法，包括：将转染复合物加入到hek293t悬浮细胞悬液中，培养，收毒；所述hek293t悬浮细胞悬液中包括上述的基础培养基。

3、本申请还提供上述的培养基或上述的方法在慢病毒制备中的应用。

4、本说明书提出的一种适于包装慢病毒的培养基，带来的有益效果包括但不限于：本申请筛选出dynamis为慢病毒包装基础培养基，并在转染12h后补加包装体积20％的feed2补料培养基，48h收获后病毒粗毒感染滴度高(≥6.41e+08tu/ml)，hcp含量维持在30000ng/ml以下。极大可能的减小了下游纯化的压力，保证最终重组慢病毒成品的滴度和杂质水平符合质量标准，有利于后续的规模化生产。

技术特征：

1.一种适于包装慢病毒的培养基，其特征在于，所述培养基包括基础培养基和补料培养基，所述基础培养基为dynamis，所述补料培养基选自feed1、feed2或feed3培养基中至少一种。

2.如权利要求1所述的培养基，其特征在于，所述补料培养基体积为基础培养基体积的10％～20％，所述补料培养基为feed2培养基。

3.如权利要求1所述的培养基，其特征在于，所述补料培养基体积为基础培养基体积的15％～20％。

4.如权利要求1所述的培养基，其特征在于，所述补料培养基体积为基础培养基体积的20％。

5.一种包装慢病毒的方法，其特征在于，包括：

6.如权利要求5所述的方法，其特征在于，所述培养6-12h后，加入补料培养基和200mm谷氨酰胺溶液，所述补料培养基选自feed1、feed2或feed3培养基中至少一种，优选的，所述补料培养基为feed2培养基。

7.如权利要求6所述的方法，其特征在于，所述补料培养基体积为hek293t悬浮细胞悬液体积的10％～20％，所述200mm谷氨酰胺溶液体积为hek293t悬浮细胞悬液体积的2％。

8.如权利要求6所述的方法，其特征在于，所述补料培养基体积为hek293t悬浮细胞悬液体积的15％～20％。

9.如权利要求6所述的方法，其特征在于，所述补料培养基体积为hek293t悬浮细胞悬液体积的20％。

10.如权利要求1～4任一项所述的培养基或权利要求5～9任一项所述的方法在慢病毒制备中的应用。

技术总结
本申请公开了一种适于包装慢病毒的培养基，所述培养基包括基础培养基和补料培养基，所述基础培养基为Dynamis，所述补料培养基选自Feed1、Feed2或Feed3培养基中至少一种。本申请还公开一种包装慢病毒的方法，包括：将转染复合物加入到HEK293T悬浮细胞悬液中，培养，收毒；所述HEK293T悬浮细胞悬液中包括上述的基础培养基。本申请还公开上述的培养基或上述的方法在慢病毒制备中的应用。

技术研发人员：赵燊,栗红建,张丹,周静雨
受保护的技术使用者：江苏谱新生物医药有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/5