一种新型海洋贝类小分子免疫活性肽的制备方法及其应用与流程

本发明涉及医药，尤其涉及一种海洋贝类小分子免疫活性肽及其制备方法。

背景技术：

1、海洋贝类的合理开发促进经济的发展，海洋贝类富含丰富的蛋白、多肽、氨基酸、多糖、牛磺酸及微量元素等生理活性物质，开发成功能性食品、营养食品和天然药物等，具有广泛的应用前景。生物活性肽是指对生物机体生命活动有益或具有生理作用的肽类化合物，属于小分子物质，可以被肠道直接吸收的营养特性，其具有天然活性、安全性和高效性，酶法水解蛋白质，制备活性肽，该活性肽具有特殊的生理活性，在细胞生理及代谢功能的调节上具有重要的作用。多肽具有极强的活性和多样性，可全面调节人体生理功能，增强人体生理活性。多肽不仅能提供人体生长发育所需的营养物质，而且具有特殊的生物学功能，可防治血栓、高血脂、高血压、延缓衰老，抗疲劳，提高机体免疫力，促进人体对蛋白质、维生素、氨基酸等营养物质和钙、铁、锌、硒、镁、铜等多种有益的微量元素的吸收。

技术实现思路

1、本发明的目的在于提供一种蝾贝活性肽的制备方法。具体地，该方法包括如下步骤：

2、1)精确称取12.00g蝾贝干肉，粗洗后用超声波清洗仪清洗30min，每隔10min更换清洗所用超纯水，将蝾贝沥干后用超纯水低温沉浸4h，采用高速组织捣碎机以10000r/min匀浆25min至糊状，调ph值至10.0；

3、2)向所得浆液中加蛋白酶并恒温水浴后，经100℃水浴灭酶20min，在4℃下以4000r/min的转速离心20min后取上清液；

4、3)将上清液导入截留透析袋中置于4℃冰箱中透析60h，每隔12h更换透析所用超纯水，再冷冻干燥得蝾贝多肽。

5、优选地，所述蛋白酶选自以下中的一种或多种：中性蛋白酶、碱性蛋白酶、风味蛋白酶、胃蛋白酶、木瓜蛋白酶和胰蛋白酶.

6、优选地，所述蛋白酶为中性蛋白酶和碱性蛋白酶以重量比1-3:1(优选为2:1)组成的复合酶。该复合酶的水解能力最大，因此将该复合酶作为酶解法制备蝾贝肽的最佳酶制剂。

7、优选地，所述蛋白酶的加入量为2000-6000u/g，更优选为4000u/g。在该加入量下，能够得到最大的肽得率，之后随着酶加量的增加肽得率的变化趋势趋于缓慢。

8、优选地，所述酶解在50-60℃的温度下进行，优选为55℃。该温度下，蝾贝肽的得率最大，具有维持复合酶分子结构次级键稳定的优点，进一步维持复合酶的活力。

9、优选地，所述酶解的时间为2-4h，优选为3h。

10、酶解时间会影响蛋白的酶解反应，时间短酶解反应不彻底，时间过长又有可能出现过度水解，因此确定酶解时间很重要，在该酶解时间内，随着酶解时间的延长，蝾贝肽得率逐渐升高，在3h时肽得率的变化趋势趋于缓慢，酶解时间为4h时效果最佳，但是较3h区别不明显。所以，从肽得率和成本两方面考虑，酶解时间优选为3h。

11、优选地，步骤2)中，当所述蛋白酶为中性蛋白酶时，所述蛋白溶液的ph为7-8；当所述蛋白酶为碱性蛋白酶时，所述蛋白溶液的ph为9-12；当所述蛋白酶为风味蛋白酶时，所述蛋白溶液的ph为6-8；当所述蛋白酶为胃蛋白酶时，所述蛋白溶液的ph为2-3；当所述蛋白酶为木瓜蛋白酶时，所述蛋白溶液的ph为7-9；当所述蛋白酶为胰蛋白酶时，所述蛋白溶液的ph为7-9。

12、优选地，步骤2)中，所述ph用hcl和/或naoh进行调整。

13、本发明同时提供了上述方法制备得到的蝾贝肽，所述蝾贝肽的分子量范围为：1#分子量0.5kda-1.0kda，2#分子量1.0kda-2kda，3#分子量2.0kda-，优选所述蝾贝肽的分子量为1.0kda-2.0kda。

14、本发明的技术方案具有如下效果：

15、本发明提供了上述蝾贝肽在提高机体免疫力和应激能力的应用，尤其是在制备提高机体免疫力和应激能力的食品、药品中的应用。

16、本发明实现了海洋贝类产品高值化利用，为贝类产品深加工提供了可靠依据

技术特征：

1.一种蝾贝活性肽的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述蛋白酶选自以下中的一种或多种：中性蛋白酶、碱性蛋白酶、风味蛋白酶、胃蛋白酶、木瓜蛋白酶和胰蛋白酶。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述蛋白酶为中性蛋白酶和碱性蛋白酶以重量比1-3:1组成的复合酶。

4.根据权利要求1-3中任一项所述的方法，其特征在于，所述蛋白酶的加入量为2000-6000u/g。

5.根据权利要求1-4中任一项所述的方法，其特征在于，所述酶解在50-60℃的温度下进行。

6.根据权利要求1-5中任一项所述的方法，其特征在于，所述酶解的时间为2-4h。

7.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，步骤2)中，所述蛋白溶液的ph为7-10。

8.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述方法还包括对步骤3)中所得蝾贝活性肽进行分离；所述分离步骤具体为：采用有一定孔径的网络结构的交联葡聚凝胶，大分子物质先出，小分子物质后出。得到三个不同分子量的活性肽：1#分子量0.5kda-1.0kda，2#分子量1.0kda-2kda，3#分子量2.0kda-。

9.权利要求1-8中任一项所述方法制备得到的蝾贝活性肽，所述蝾贝活性肽的分子量为1.0kda-2.0kda。

10.权利要求1-8中任一项所述方法制备得到的蝾贝活性肽在提高机体免疫力中的应用。

技术总结
本发明涉及医药技术领域，尤其涉及一种海洋贝类小分子免疫活性肽及其制备方法。通过对蝾贝活性肽的分离和制备，提供了蝾贝活性肽以及其在提高机体免疫力和应激能力的应用，尤其是在制备提高机体免疫力和应激能力的食品、药品中的应用。同时实现了海洋贝类产品高值化利用，为贝类产品深加工提供了可靠依据。

技术研发人员：王凡
受保护的技术使用者：福州新瑞利众科技有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/15