一种与苹果果实蜡质负载量相关的分子标记及应用

本发明属于分子生物学，具体涉及一种与苹果果皮蜡质负载量相关的分子标记及应用。

背景技术：

1、目前的苹果育种实践中，果实重要农艺性状大多通过其表现型来进行人为衡量，受主观性影响较大，致使育种周期长，效率低。利用目标性状关联的功能性分子标记进行标记辅助选择，可将传统的表型选择转化为直接的基因型选择，大大提高了育种效率，加快遗传改良。实现分子标记辅助选择的前提是要找到与重要的农艺性状紧密连锁的分子标记，因此开发具有我国特色的重要性状基因的分子标记并进行辅助选择育种研究意义重大。

2、苹果(拉丁学名：malus domestica，英文名：apple)，蔷薇科苹果属植物，通常品种是一种落叶乔木。伴随着苹果果实的生长发育，沉积在果皮表面的蜡质组分会越来越多，直到果实采收期达到高峰。蜡质负载量作为一种数量性状，在不同苹果资源中不尽相同，有的蜡质含量丰富，有的蜡质含量较少。果皮蜡质对于果实而言具有至关重要的作用，可防止水分过度流失、防止机械损伤和微生物侵染、防止果实遭受过度冷害、防止果实软化、延长果实贮藏期等。因此选育果皮蜡质组分含量丰富的苹果品种可有效延长果实贮藏期，减缓采后失水，延长其货架期，提高其经济价值。

3、在育种过程中选育蜡质含量相对丰富、更耐贮藏的品种至关重要，而目前为止果皮蜡质含量的测定方法耗时耗人，工序复杂，且通过肉眼观察来反映蜡质的含量容易受到个人主观的影响，苹果果实育种过程中缺乏能够直接检测果皮蜡质含量的分子标记。因而，寻找与苹果果实果皮蜡质负载量紧密连锁的dna标记，能够有效辅助高蜡质含量品种的选育。

技术实现思路

1、本发明的目的之一在于提供一种与苹果果皮蜡质负载量相关的分子标记及引物。

2、本发明的目的之二在于提供上述分子标记的应用。所述分子标记与苹果果实蜡质含量多与少紧密相关，用于苹果果实的育种研究。

3、本发明的目的之三在于提供一种鉴定苹果果实果皮蜡质负载量性状的方法。

4、为了实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

5、一种与苹果果实果皮蜡质负载量相关的分子标记，所述分子标记表现为seq idno.1所示核苷酸序列的插入/缺失长度多态性。

6、扩增所述分子标记的引物对的上游引物序列如seq id no.2所示，下游引物序列如seq id no.3所示。

7、具体地，具有seq id no.1所示核苷酸序列且在所述分子标记位点纯合的个体，表现为蜡质负载量低；缺失seq id no.1所示核苷酸序列且在所述分子标记位点纯合的个体，表现为蜡质负载量高；缺失seq id no.1所示核苷酸序列且在所述分子标记位点杂合的个体，表现为蜡质负载量居中。

8、本发明还公开了上述分子标记在苹果分子育种中的应用。主要包括用于鉴定或者辅助鉴定苹果果实果皮蜡质负载量性状。可以在苗期快速的鉴定苹果的果实果皮蜡质负载量性状，从而提高选择效率、加快育种进程。本领域技术人员可以理解，比如通过检测是否存在本发明的分子标记来筛选苹果果实果皮蜡质负载量高的品种。所述检测可以是pcr检测的方法，具体地，可以使用上述的本发明的分子标记的引物对，所述检测还可以通过测序方法进行。

9、本发明还公开了一种鉴定苹果果实果皮蜡质负载量性状的方法，所述方法包括：

10、(1)提取苹果植株组织的dna；

11、(2)pcr扩增：利用权利要求2中所述的引物对，对步骤(1)所提取样品进行pcr扩增；

12、(3)对扩增产物进行测序：

13、当扩增片段为478bp时，则待测苹果表现为果皮蜡质负载量低，当扩增片段为415bp时，则待测苹果表现为果皮蜡质负载量高，当扩增片段为478bp和415bp时，则待测苹果的分子标记位点杂合，表现为蜡质负载量居中。

14、进一步地，利用琼脂糖凝胶电泳检测扩增片段长度。

15、另外，包含上述分子标记引物对的试剂盒，可以用来鉴定苹果材料果皮蜡质负载量高低，具体应用时，可以选择含有上述引物对的试剂做成试剂盒。

16、再者，用于检测所述分子标记是否存在的试剂在苹果果皮蜡质负载量相关基因定位中的应用，利用本发明的分子标记，可以对苹果果皮蜡质负载量相关基因进行定位，上述这些应用均可以按照常规的方法进行。

17、本发明还保护含有上述分子标记的载体。所述重组载体可以是插入有本发明的分子标记的表达载体或者克隆载体。获得上述重组载体后，本领域技术人员可以根据不同的需要，将重组载体转化到合适的细胞中，得到含有该重组载体的重组细胞。因此，本发明还保护含有所述重组载体的重组细胞。

18、与现有技术相比，本发明提供的一种与苹果果实果皮蜡质含量相关的分子标记，具有以下有益效果：

19、本发明提供的分子标记与苹果果实果皮蜡质含量性状紧密相关，通过pcr扩增获得的基因片段长度判断果皮蜡质负载量丰富与否，能够快速准确的判断该苹果品种采后失水快慢及贮藏性，加速遗传改良。还可以用于苹果果实的储存管理，能够避免资源浪费和对于果实的误判。

技术特征：

1.一种与苹果果实果皮蜡质负载量相关的分子标记，其特征在于，所述分子标记表现为seq id no.1所示核苷酸序列的插入/缺失长度多态性。

2.根据权利要求1所述的与苹果果实果皮蜡质负载量相关的分子标记，其特征在于，扩增所述分子标记的引物对的上游引物序列如seq id no.2所示，下游引物序列如seq idno.3所示。

3.根据权利要求1所述的与苹果果实果皮蜡质负载量相关的分子标记，其特征在于，具有seq id no.1所示核苷酸序列且在所述分子标记位点纯合的个体，表现为蜡质负载量低；缺失seq id no.1所示核苷酸序列且在所述分子标记位点纯合的个体，表现为蜡质负载量高；缺失seq id no.1所示核苷酸序列且在所述分子标记位点杂合的个体，表现为蜡质负载量居中。

4.权利要求1-3任一项所述的分子标记在苹果分子育种中的应用。

5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述分子标记用于鉴定或者辅助鉴定苹果果实果皮蜡质负载量性状。

6.一种鉴定苹果果实果皮蜡质负载量性状的方法，其特征在于，所述方法包括：(1)提取苹果植株组织的dna；

7.一种用于鉴定苹果果实果皮蜡质负载量性状的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包含权利要求2中所述的引物对。

8.用于检测权利要求1所述分子标记是否存在的试剂在苹果果皮蜡质负载量相关基因定位中的应用，其特征在于，扩增所述分子标记的引物对的上游引物序列如seq id no.2所示，下游引物序列如seq id no.3所示。

技术总结
本发明属于分子生物学技术领域，具体公开了一种与苹果果皮蜡质负载量相关的分子标记及应用，所述分子标记表现为SEQ ID NO.1所示核苷酸序列的插入/缺失长度多态性。本发明所述的分子标记与苹果果皮蜡质含量紧密相关，可以用于苹果果实的储存管理，能够避免资源浪费和对于果实的误判，加快遗传改良。

技术研发人员：王爱德,纪迎琳,张丽之,王鸣谦,谭冬梅,尹邵波
受保护的技术使用者：沈阳农业大学
技术研发日：
技术公布日：2024/1/15