一种微生物裂解液、裂解方法及试剂盒与流程

本发明涉及微生物基因组检测，尤其涉及一种微生物裂解液、裂解方法及试剂盒。

背景技术：

1、近年来，随着二代测序的发展，人们对生物的认知进一步提高，微生物ngs测序也越来越受到各界广泛关注。微生物宏基因组二代测序，不仅能帮助人类探究未知生物的遗传信息，也能帮助人类快速得到已知微生物信息。在临床应用上，可帮助医生迅速找到患者感染病原体，便于医生针对该病原体进行及时、准确地治疗；在科研上，可帮助研究人员探索各种微生物，例如古细菌等微生物的遗传信息及方式，使人们进一步提升对微生物的理解。

2、现有的物理裂解和化学裂解具有以下缺点：1.物理裂解操作方法复杂且需要样本量大，对许多样本量较少的珍贵样品不适用；2.化学裂解对于许多厚壁微生物往往裂解效果不佳，且需要较长时间。可见现有技术中对于微生物的裂解方法仍存在诸多缺点，因此，开发一种所需样本量少、通量高、可同时对多个样本同时裂解的方法十分具有应用前景。

技术实现思路

1、本发明的第一个方面提供了一种微生物裂解液，所述裂解液的制备原料包括：复合酶、表面活性剂、牛血清白蛋白、引物、裂解缓冲液、裂解酶、水。

2、在一些实施方式中，按重量份，所述裂解液的制备原料包括：复合酶1-5份、表面活性剂1-5份、牛血清白蛋白1-5份、引物0.5-3份、裂解缓冲液8-15份、裂解酶0.5-3份、水50-70份。

3、进一步地，按重量份，所述裂解液的制备原料包括：复合酶1-2份、表面活性剂1-3份、牛血清白蛋白1-3份、引物0.5-2份、裂解缓冲液8-12份、裂解酶0.5-2份、水55-65份。

4、更进一步地，按重量份，所述裂解液的制备原料包括：复合酶2份、表面活性剂2份、牛血清白蛋白2份、引物1份、裂解缓冲液10份、裂解酶1份、水62份。

5、在一些实施方式中，复合酶包括溶菌酶、溶葡球菌酶、蜗牛酶、溶壁酶中的至少一种。

6、在一些实施方式中，所述复合酶为溶菌酶和溶葡球菌酶，重量比为(1-3)：(1-3)，优选地，重量比为1：1。

7、申请人在探究中发现，选用溶菌酶和溶葡球菌酶能够更好的裂解革兰氏阴性/阳性菌的同时裂解葡萄球菌，尤其是当二者的重量比为(1-3)：(1-3)优选为1：1时，裂解效果更好，这可能是因为在该比例下两种酶相互影响较小，能发挥各自最大的活性。

8、在一些实施方式中，所述引物的序列为5’d(nnnnnn)-3’-p。

9、在一些实施方式中，所述表面活性剂包括吐温-20、吐温-40、吐温-60、吐温-80中的至少一种。

10、在一些实施方式中，所述表面活性剂为吐温-20。

11、申请人还发现，在本体系内选择吐温-20作为表面活性剂相对于其他类型的表活能够更好的保持液滴稳定性，这可能是因为吐温-20与裂解试剂的兼容性更强。

12、本发明的第二个方面提供了一种微生物的裂解方法，所述方法包括如下步骤：

13、s1.制备微生物悬液；

14、s2.制备微生物裂解液；

15、s3.pcr反应程序进行微生物裂解；

16、s4.染色，观察微生物裂解效果。

17、在一些实施方式中，所述染色所用的染料包括syto9/pi染料、dmao/ethd-iii染料、mycolightgreenjj98、mycolightredjj94、calcein-am染料中的至少一种。

18、本发明的第三个方面提供了一种用于裂解微生物的试剂盒，所述试剂盒包括所述的微生物裂解液。

19、与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：

20、1.本发明采用多种生物酶共同裂解的方法，操作简单，仅在pcr仪上便能完成微生物裂解，且裂解所需样本量少，一次实验仅需10μl，通量高，一次可裂解3千万个细菌，可同时对多个样本同时裂解，并且能通过染色迅速检测裂解效果，使用于快速检测大量样本。

21、2.本发明通过pcr仪进行酶裂解微生物，可同时裂解大部分革兰氏阴性菌与革兰氏阳性菌，如大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、乳链球菌等，操作简单，所需步骤方便，成本低，裂解微生物效率高，是一种良好的微生物裂解方式。

技术特征：

1.一种微生物裂解液，其特征在于，所述裂解液的制备原料包括：复合酶、表面活性剂、牛血清白蛋白、引物、裂解缓冲液、裂解酶、水。

2.根据权利要求1所述的微生物裂解液，其特征在于，按重量份，所述裂解液的制备原料包括：复合酶1-5份、表面活性剂1-5份、牛血清白蛋白1-5份、引物0.5-3份、裂解缓冲液8-15份、裂解酶0.5-3份、水50-70份。

3.根据权利要求2所述的微生物裂解液，其特征在于，复合酶包括溶菌酶、溶葡球菌酶、蜗牛酶、溶壁酶中的至少一种。

4.根据权利要求3所述的微生物裂解液，其特征在于，所述复合酶为溶菌酶和溶葡球菌酶，重量比为(1-3)：(1-3)。

5.根据权利要求3所述的微生物裂解液，其特征在于，所述引物的序列为5’d(nnnnnn)-3’-p。

6.根据权利要求1所述的微生物裂解液，其特征在于，所述表面活性剂包括吐温-20、吐温-40、吐温-60、吐温-80中的至少一种。

7.根据权利要求6所述的微生物裂解液，其特征在于，所述表面活性剂为吐温-20。

8.一种微生物的裂解方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：

9.根据权利要求8所述的裂解方法，其特征在于，所述染色所用的染料包括syto9/pi染料、dmao/ethd-iii染料、mycolightgreenjj98、mycolightredjj94、calcein-am染料中的至少一种。

10.一种用于裂解微生物的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括如权利要求1-7任一项所述的微生物裂解液。

技术总结
本发明涉及微生物基因组检测技术领域，尤其涉及一种微生物裂解液、裂解方法及试剂盒，所述裂解液的制备原料包括：复合酶、表面活性剂、牛血清白蛋白、引物、裂解缓冲液、裂解酶、水。本发明采用多种生物酶共同裂解的方法，操作简单，仅在PCR仪上便能完成微生物裂解，且裂解所需样本量少，通量高，可同时对多个样本同时裂解，并且能通过染色迅速检测裂解效果，使用于快速检测大量样本。

技术研发人员：郑文山,张孝瑾
受保护的技术使用者：墨卓生物科技（浙江）有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/15