专利名称：硅胶膜型dna快速提取及保存试剂盒的制作方法
技术领域：
本发明涉及生物技术领域，特别涉及硅胶膜型DNA快速提取及保存试剂盒。
背景技术：
目前，从细菌或者体液中提取DNA的技术已经被广泛应用。 传统的DNA提取是酚氯仿法，该方法廉价，应用范围广，但是由于大量使用有机溶剂容易引起环境污染。利用树脂、硅胶和硅胶膜吸附DNA特性而研发的DNA提取试剂盒，环境污染小，但是操作步骤繁琐，需要裂解液裂解细胞后通过多步离心获得纯化的DNA，成本较高并且采用上述方法均不能长期保存DNA。 DNA保存目前普遍采用的技术仍然是低温贮藏，利用低温抑制核酸内切酶对DNA的降解。采用该方法需要低温冰箱，保存条件要求高，同时也不利于DNA的运输。[0005] DNA的提取和保存主要有以下几种途径一 现场采集菌液或者体液，立即提取DNA并低温保存。二 现场采集样本，低温冻存防止核酸酶降解，然后运送至实验室提取DNA后低温冻存。采用方法一的缺陷是采集现场需要离心机、超净工作台等实验室设备，对于野外采集样本或者不具备实验室条件的场所无法使用该方法提取和保存DNA。采用方法二的缺陷是菌液或者体液低温运输不方便，如果不需立即提取DNA，样本必须一直低温贮藏，成本较高。 因此设计一种既能快速提取DNA又能保存DNA的试剂盒非常必要。
发明内容本实用新型的目的是通过对硅胶膜进行处理后，使样本DNA直接吸附在硅胶膜上，同时抑制核酸内切酶的活性，再通过洗脱液洗脱DNA，从而设计出一种可以快速从菌液或者体液中获得纯化的DNA，又能长期保存DNA的试剂盒。 本试剂盒所采用的技术方案是设计一种硅胶膜型DNA快速提取和保存试剂盒。试剂盒由预处理硅胶膜保存卡、75% _95%乙醇或异丙醇试剂瓶、超纯水或10mmo1/L-2. 5mmol/L Tris-HCL溶液试剂瓶组装在一个盒子内构成。 所述预处理硅胶膜是将硅胶膜浸泡在ra为5. 0-7. 0，由50mmol/L-100mmol/LTris-HCL、15mmol/L-20mmol/L EDTA、1% -5% SDS、3_5mol/L异硫氰酸胍或盐酸胍组成的裂解缓冲液中烘干后制备而成。 所述预处理硅胶膜保存卡是由一张洁净纸片或塑料片上粘附预处理硅胶膜，由密封材料包裹构成。 所述75 % -95 %乙醇或异丙醇试剂瓶由玻璃或塑料瓶内含75 % -95 %乙醇或异丙醇构成。 所述超纯水或10mmol/L-2. 5mmol/L Tris-HCL溶液试剂瓶由玻璃或塑料瓶内含超纯水或10mmol/L-2. 5mmol/L Tris-HCL溶液构成。 本实用新型的硅胶膜型DNA快速提取及保存试剂盒在保存DNA时，首先将菌液或者体液滴在预处理硅胶膜保存卡上，在硅胶膜上粘附的裂解缓冲液盐分的作用之下细胞膜
破裂，DNA吸附在硅胶膜上。将保存卡包裹密封后，DNA可室温长期保存。 本实用新型的硅胶膜型DNA快速提取及保存试剂盒在提取DNA时，将上述吸附DNA
的硅胶膜从保存卡中取出，从75 %-95 %乙醇或异丙醇试剂瓶中吸取试剂洗涤硅胶膜上残
留盐分和细胞质，再从超纯水或lOmmol/L-2. 5mmol/L Tris-HCL溶液试剂瓶中吸取试剂将
DNA洗脱。 本试剂盒具有携带方便、成本低廉、操作简单的特点。
图1本实用新型的结构示意图 图2预处理硅胶膜保存卡的结构示意图
具体实施方式本硅胶膜型DNA快速提取及保存试剂盒实施例如图1所示由预处理硅胶膜保存卡1、85%乙醇试剂瓶2、超纯水试剂瓶3组装在一个盒子4内构成。 预处理硅胶膜保存卡如图2所示由一张卡片5上粘附两张圆形预处理硅胶膜6，外部纸壳7密封构成。用来保存预处理硅胶膜及吸附的DNA，避免外界环境对DNA的降解，外部纸壳可用于标记样本信息。 本试剂盒的使用方法步骤为(1)将硅胶膜保存卡取出，打开外壳。(2)常规采样。(3)将50ul菌液或体液样本滴加在硅胶膜表面并晾干。(4)封闭外壳并在外壳上标记样本信息。该保存卡可在室温环境下长期保存DNA。 (5)打开保存卡外壳，取下硅胶膜。(6)将硅胶膜转移至1.5ml离心管中，从85X乙醇试剂瓶中吸lml试剂加入离心管。(7)水平震荡5min，吸弃管中溶液。(8)短暂离心后吸弃管底残留溶液，在室温空气中干燥10min。 (9)从超纯水试剂瓶中吸50ul试剂，滴加在管内硅胶膜上，10分钟后短暂离心，底部溶液含有纯化的DNA可用于后续测序、PCR、酶切、转化等反应。
权利要求硅胶膜型DNA快速提取及保存试剂盒，其特征在于由预处理硅胶膜保存卡(1)、洗涤液试剂瓶(2)、DNA洗脱液试剂瓶(3)组装在一个盒子(4)内构成。
2. 如权利要求1所述预处理硅胶膜保存卡，其特征在于由一张卡片(5)上粘附预处理 硅胶膜(6)，外部纸壳(7)密封构成。
专利摘要本实用新型公开了一种硅胶膜型DNA快速提取及保存DNA试剂盒，本试剂盒包括预处理硅胶膜保存卡、乙醇或异丙醇试剂瓶、超纯水或低盐溶液试剂瓶。预处理硅胶膜保存卡是由一张卡片上粘附预处理硅胶膜，由密封材料包裹构成。将样本滴加在预处理硅胶膜保存卡上，保存卡可长期室温保存DNA。通过洗脱液处理后吸附在硅胶膜上的DNA可释放至溶液中获得纯化DNA。本试剂盒具有携带方便、成本低廉、操作简单的特点。
文档编号C12N15/10GK201512539SQ200920043078
公开日2010年6月23日 申请日期2009年7月1日 优先权日2009年7月1日
发明者林桂兰 申请人:林桂兰